奶粉中沙門氏菌盲樣考核檢測分析

唐 剛, 李世艷, 張冬青, 鄧曉鴻, 王韋崗

1.蚌埠產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院 (蚌埠 233040) 2鎮(zhèn)江市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心 (鎮(zhèn)江 212132) 3江蘇國測檢測技術(shù)有限公司 (蘇州 215300)

沙門氏菌(Salmonella)是一種常見的食源性致病菌，廣泛分布于自然界，能使人和動物致病，污染食品引發(fā)食物中毒。據(jù)統(tǒng)計，全球每年因食品中沙門氏菌污染引起的感染病例數(shù)以億計[1]。微生物實驗室的檢驗能力直接關(guān)系到檢驗報告的準確性和可信度。盲樣考核是驗證實驗室微生物檢驗能力的有效途徑之一，是實驗室微生物檢測質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。中國食品藥品檢定研究院為了驗證全國承擔國家抽檢任務的微生物實驗室對沙門氏菌的檢測能力而進行了這次盲樣考核。

本文按照國家標準 GB 4789.4—2016[2]對收到的編碼分別為CODEl～CODE10的10組沙門氏菌盲樣考核樣品進行了定性檢測和結(jié)果判定。通過此次盲樣考核，微生物檢測實驗室的檢驗能力得到了有效驗證，實驗室管理水平和沙門氏菌檢測技術(shù)水平得到了有效的提高。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1樣品來源

由中國食品藥品檢定研究院發(fā)放的盲樣考核樣品10組。編碼分別為CODE1～CODE10，樣品為白色球狀西林瓶裝，包含陰性樣本和陽性樣本；10袋奶粉樣品，每袋質(zhì)量為25 g，編碼分別為CODE1～ CODE10。每個相同編碼的沙門氏菌樣品和奶粉樣品作為1組樣品進行檢測。

1.1.2主要試劑

緩沖蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液、亞硫酸鉍(BS)瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、三糖鐵(TSI)瓊脂、沙門氏菌生化鑒定試劑盒、沙門氏菌診斷血清、沙門氏菌陽性菌株CMCC(B)50115等，均購自北京陸橋技術(shù)有限責任公司。所有試劑均經(jīng)過驗證[3]并在有效期內(nèi)使用。

1.2 方法

1.2.1檢測依據(jù)

依據(jù)國家標準 GB 4789.4—2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》，對編碼分別為CODE1～CODE10的 10組樣品進行檢測，同時設陽性對照和空白對照。

1.2.2預增菌(按照盒內(nèi)附作業(yè)指導書進行)

在生物安全柜內(nèi)無菌操作打開西林瓶，取225 mL滅菌BPW增菌液加入到無菌均質(zhì)袋中，并將西林瓶內(nèi)白色小球加入到BPW增菌液中，充分溶解。然后再將與西林瓶相同編碼的奶粉樣品加入到上述BPW增菌液中，均質(zhì)混勻。另外同時接種沙門氏菌菌株做陽性對照。放入到36 ℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18 h。

1.2.3增菌

輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL TTB內(nèi)，于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。同時，另取1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL SC內(nèi)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。

1.2.4分離培養(yǎng)

將增菌液分別劃線到BS平板、XLD平板和沙門氏菌顯色平板上培養(yǎng)。

1.2.5生化試驗

按照GB 4789.4—2016中5.4規(guī)定的方法進行生化試驗。

1.2.6血清學鑒定

按照GB 4789.4—2016中5.5規(guī)定的方法進行血清學鑒定。

2 結(jié)果與討論

2.1 預增菌

由表1樣品增菌結(jié)果可以看出CODE5的BPW培養(yǎng)液經(jīng)過培養(yǎng)后仍澄清透明，培養(yǎng)前后無明顯區(qū)別，顯示無菌生長，與空白對照的結(jié)果一致，初步判定CODE5為陰性對照。其他各編號的BPW培養(yǎng)液都變渾濁，顯示有菌生長。

2.2 增菌

經(jīng)過兩種培養(yǎng)基增菌后，除CODE5和空白對照仍澄清透明、顯示無菌生長外，其他各管的TTB都變渾濁、變黃；SC都變渾濁、變紅，顯示有菌生長。增菌結(jié)果見表1所示。

表1 樣品增菌結(jié)果

2.3 分離

各樣品在選擇性平板上劃線培養(yǎng)后生長情況見表2所示。CODE5和空白對照培養(yǎng)后顯示無菌落生長。CODE5的分離培養(yǎng)結(jié)果驗證了上述是陰性對照的假設。其余各樣品在BS平板上均有黑色菌落生成，有的帶金屬光澤、周圍培養(yǎng)基呈黑色。CODE1、3、7在XLD上有黑色菌落生成，在沙門氏菌顯示培養(yǎng)基上有紫紅色和藍綠色2種菌落生成；CODE2、4、6、8、9、10在XLD上有黃色菌落生成，在沙顯培養(yǎng)基上有藍綠色菌落生成；陽性對照在XLD上有黑色菌落生成，在沙顯培養(yǎng)基上有紫紅色菌落生成。比較可見沙顯培養(yǎng)基的分離效果比BS和XLD要好一些。依據(jù)沙顯培養(yǎng)基說明書，紫紅色菌落為沙門氏菌，初步判定CODE1、3、7為沙門氏菌檢出。

表2 細菌在各平板上的生長情況

2.4 生化試驗

對選擇性平板上典型和可疑菌落進行生化鑒定，部分生化鑒定結(jié)果見表3所示。依據(jù)GB 4789.4—2016標準分析，CODE1、3、7的生化鑒定結(jié)果符合沙門氏菌屬特性；CODE2、4、6、8、9、10不符合沙門氏菌屬特性。

表3 沙門氏菌生化鑒定結(jié)果

2.5 血清學鑒定

將生化試驗結(jié)果符合沙門氏菌屬特性的菌株做血清學凝集試驗。取單個可疑沙門氏菌純培養(yǎng)菌落接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，于(36±1)℃培養(yǎng)24 h，取純培養(yǎng)物作為玻片凝集用的抗原，生理鹽水作對照，分別進行O抗原和H抗原凝集試驗。結(jié)果CODE1、3、7均凝集，生理鹽水對照不凝集。

綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結(jié)果，得出檢驗結(jié)果為編號CODE1、3、7盲樣為沙門氏菌陽性(檢出)；編號CODE2、4、5、6、8、10盲樣為沙門氏菌陰性(未檢出)。

3 結(jié)論

(1)微生物的培養(yǎng)、分離、鑒定分析，是一項細致嚴謹?shù)墓ぷ?，需要做好實驗室質(zhì)量控制工作。要從考核樣品中分離出特定的目標菌，排除干擾菌，應盡可能多選擇幾種增菌液、多選擇幾種分離平板、多劃線平板、多挑幾個可疑菌落鑒定分析，防止漏檢。

(2)生化試驗和血清學鑒定結(jié)果是否可靠依賴于菌落的純培養(yǎng)物，否則容易造成雜菌干擾而嚴重影響鑒定結(jié)果。傳統(tǒng)的劃線分離這一細節(jié)性工作顯得尤為重要，應按照可疑菌落大小形態(tài)等的不同分別進行純化培養(yǎng)和后續(xù)試驗，以達到分離鑒定分析的可靠結(jié)果。

(3)沙門顯色培養(yǎng)基對雜菌的抗干擾能力明顯優(yōu)于BS和XLD選擇性培養(yǎng)基[4]。這是由于沙門顯色培養(yǎng)基利用培養(yǎng)基中的細菌特異性酶的顯色底物與沙門氏菌特有的辛酯酶反應，從而通過觀察菌落顏色就可直接對菌落進行初步判定。本文的檢驗結(jié)果與上述一致。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基的使用，有助于對可疑菌落的初步判定。傳統(tǒng)生化試驗和血清學鑒定，可對檢驗結(jié)果進一步驗證。