EphA2在鼻咽癌致病過程中的作用及治療靶點(diǎn)展望*

梁政 董愷悌 周慧芳 綜述 任秀寶 審校

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）好發(fā)生于中國(guó)華南地區(qū)、東南亞及部分非洲地區(qū)，全世界約80%的NPC 發(fā)生在中國(guó)，嚴(yán)重威脅人們的生命健康。NPC 對(duì)放療較敏感，隨著放療技術(shù)的不斷發(fā)展，早期NPC 的5年生存率已達(dá)95%［1］。病理上NPC 以低分化非角化性鱗癌和未分化癌多見，其他類型為角化性鱗狀細(xì)胞癌。NPC發(fā)病與遺傳因素、EB病毒感染、環(huán)境因素、飲食習(xí)慣等因素有關(guān)。但在臨床實(shí)踐中，由于NPC 發(fā)病部位隱匿，早期癥狀的非特異性導(dǎo)致確診時(shí)常處于中晚期，同時(shí)伴有較高的復(fù)發(fā)率和（或）遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，很大程度上增加了死亡率［2］。因此早期的篩查和診斷，尋找新的治療靶標(biāo)，對(duì)提升NPC整體診治水平具有重要意義。

促紅細(xì)胞生成素產(chǎn)生肝細(xì)胞受體（erythropoietin-producing hepatocellular receptor，Eph）及其配體ephrin［3］，是最大受體酪氨酸激酶（RTK）家族，RTK通常通過與可溶性配體結(jié)合而激活。區(qū)別于其他RTK家族，ephrin 配體和Eph 受體均結(jié)合在細(xì)胞膜上，激活信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，一般發(fā)生在直接接觸的細(xì)胞之間，雙向信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是其獨(dú)特特點(diǎn)［4］。Eph受體是一種膜結(jié)合型Ⅰ型糖蛋白，主要由N末端糖基化配體結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)具有酪氨酸激酶活性區(qū)域構(gòu)成。ephrin配體通過A類糖基磷脂酰肌醇錨蛋白（GPI）錨定作用或通過跨膜蛋白和包括1個(gè)PDZ-結(jié)合基序的胞質(zhì)區(qū)（B 類）與細(xì)胞膜結(jié)合，與此相對(duì)應(yīng)是A 類或B類Eph 受體。Eph 受體共有16 個(gè)亞型，即EphA（1～10）和EphB（1～6）［5］。

配體受體結(jié)合產(chǎn)生的正向信號(hào)通常需要酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域活化，激活的Eph受體通過招募調(diào)節(jié)Rho家族蛋白（包括RhoA、Rac 和CDC42）GTP 酶激活狀態(tài)，針對(duì)細(xì)胞骨架改變、細(xì)胞黏附、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性能產(chǎn)生調(diào)控。配體受體結(jié)合還可以招募p120Ras-GAP，抑制RAS家族蛋白（H-RAS、R-RAS），從而抑制Ras-ERK通路［6］。

Eph 受體-ephrin 配體相互作用和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通常導(dǎo)致細(xì)胞排斥、分離、細(xì)胞收縮、失去黏著斑和細(xì)胞變圓［4，7］，這種排斥性細(xì)胞收縮反應(yīng)在許多生理和病理過程中起到關(guān)鍵作用，包括胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中軸突的引導(dǎo)和損傷后組織再生的抑制［4］。在癌細(xì)胞中，Eph受體引起的排斥反應(yīng)對(duì)惡性腫瘤在不同狀態(tài)下有著不同的影響。

1 EphA2的信號(hào)特點(diǎn)

在16 種Eph 受體中，EphA2 與腫瘤的聯(lián)系最強(qiáng)，因此已被廣泛研究［8-10］。腫瘤細(xì)胞中的EphA2 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可能具有促腫瘤或抑腫瘤的作用，這取決于腫瘤微環(huán)境［11］，EphA2經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及Eph-ephrin結(jié)合、酪氨酸自磷酸化和激酶活性。在正常組織中，EphA2 在上皮細(xì)胞中表達(dá)，膜結(jié)合的Ephrin-A 成員（A1、A2、A3、A4 和A5）在鄰近細(xì)胞中表達(dá)，其結(jié)合EphA2，引發(fā)配體依賴信號(hào)［12］。EphA2配體依賴信號(hào)能有效抑制Ras/ERK的信號(hào)通路和ErbB等其他生長(zhǎng)因子受體激活的PI3K/AKT致癌信號(hào)通路［13-14］。

EphA2也可以產(chǎn)生不需要配體或激酶活性（非經(jīng)典信號(hào)）的另一種信號(hào)形式，并且在連接激酶結(jié)構(gòu)域和SAM 結(jié)構(gòu)域的片段中涉及S897 的磷酸化，表現(xiàn)為癌蛋白功能。EphA2S897磷酸化是由絲氨酸/蘇氨酸激酶（如AKT、RSK 和PKA）引起的，并促進(jìn)細(xì)胞遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤干細(xì)胞樣特征。S897的磷酸化對(duì)促進(jìn)癌細(xì)胞惡性腫瘤的EphA2非經(jīng)典信號(hào)機(jī)制至關(guān)重要［15-17］。在癌癥進(jìn)展過程中，受體EphA2的過度表達(dá)可導(dǎo)致其配體無(wú)關(guān)的原癌性激活，這是由與配體Ephrin-A 的結(jié)合減少引起的。這些非經(jīng)典的EphA2受體的原癌性作用可通過配體刺激逆轉(zhuǎn)，觸發(fā)了EphA2 內(nèi)在的腫瘤抑制信號(hào)通路，包括抑制PI3K/AKT 和ERK通路［18］。EphA2其他促瘤機(jī)制包括EphA2 的配體結(jié)合區(qū)常被膜型金屬蛋白酶MT1-MMP切割，促進(jìn)配體非依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，錨定不依賴性生長(zhǎng)和細(xì)胞遷移［19］，而解整合素-金屬蛋白酶ADAM12增強(qiáng)Ephrin-A1從EphA2切割促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移［20］（圖1）。

?圖1 EphA2在腫瘤中的作用

2 EPHA2表達(dá)在NPC致病過程中的作用

2.1 NPC中EPHA2信號(hào)通路與臨床意義

Li等［21］發(fā)現(xiàn)，在高轉(zhuǎn)移性NPC 細(xì)胞中，相對(duì)于非轉(zhuǎn)移性NPC細(xì)胞，EphA2的S897處磷酸化顯著上調(diào)，而EphrinA1 的表達(dá)水平顯著降低。AKT/Stat3/介導(dǎo)下磷酸化S897-EphA2 與EphA2 依賴性NPC 細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移和干性呈正相關(guān)，與患者總生存率呈負(fù)相關(guān)。EphA2的S897磷酸化位點(diǎn)可作為NPC的一個(gè)有前景的治療靶點(diǎn)。該研究同時(shí)報(bào)道了ANXA1與Cbl 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EphA2，通過抑制Cbl 介導(dǎo)的EphA2 泛素化降解，提高EphA2 穩(wěn)定性，從而促進(jìn)NPC 的體內(nèi)、外生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。有研究［22-23］發(fā)現(xiàn)，NPC 組織中EphA2表達(dá)增多，EphA2的表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。上調(diào)EphA2表達(dá)可提高NPC5-8F細(xì)胞的存活率。EphA2 的過度表達(dá)通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞周期進(jìn)程而非凋亡過程，其過度表達(dá)降低了NPC 細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。EphA2降表達(dá)可提高對(duì)紫杉醇化療藥物的敏感性。EphA2還可以通過介導(dǎo)P-gp 蛋白表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控NPC 細(xì)胞紫杉醇耐藥性，P13K/AKT 通路可能參與這一過程，因此EphA2有望成為NPC紫杉醇化療增敏靶點(diǎn)［24］。

2.2 EPHA2是NPC EB病毒感染的關(guān)鍵分子

非角化性NPC 是我國(guó)NPC 的主要類型，EB 病毒（epstein-barr virus，EBV）感染是非角化性NPC 最主要的致病因素，幾乎所有的非角化性NPC 患者均存在EBV感染。EBV的感染增加了發(fā)生惡性腫瘤的危險(xiǎn)，EBV 相關(guān)性腫瘤主要包括伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、彌漫大B 淋巴瘤、NK/T 細(xì)胞淋巴瘤、胃癌、NPC等。

EBV主要感染B淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞［25］，EBV進(jìn)入靶細(xì)胞是EBV 致病的重要步驟，需要病毒糖蛋白和細(xì)胞受體介導(dǎo)的病毒膜和宿主細(xì)胞膜融合。病毒糖蛋白包括gp350、gHgL、gB 和gp422，雖然B 細(xì)胞和上皮細(xì)胞的感染機(jī)制不同，gHgL 和gB 是B 細(xì)胞和上皮細(xì)胞感染共同所必需的蛋白。

EBV 感染B 細(xì)胞需要其糖蛋白gp350 或剪接突變體gp220 與細(xì)胞表面受體CD21 之間的相互作用，以及病毒糖蛋白gp42 與MHCⅡ的相互作用［26-27］，活化gp42 能夠?qū)⑿盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至gH/gL 和gB，以防止其與包括整合素受體在內(nèi)的其他細(xì)胞受體相互作用。因此，gp42 被認(rèn)為是EBV 特異性感染B 細(xì)胞所必需的［28-30］。與B 細(xì)胞不同，EBV 進(jìn)入上皮細(xì)胞與gp350/gp220和gp42無(wú)關(guān)，而上皮細(xì)胞的EBV感染也需要糖蛋白gH/gL 和gB［31-34］。Chesnokova 等［35-36］研究表明，糖蛋白gH/gL 與3 種上皮整合素受體（αvβ5、αvβ6 和αvβ8）的相互作用與EBV 進(jìn)入上皮細(xì)胞有關(guān)。近年有研究報(bào)道，EphA2 受體也可以作為介導(dǎo)EBV 感染進(jìn)入受體，Chen等［38］研究發(fā)現(xiàn)，EphA2與EBV編碼的gH/gL 相互作用，促進(jìn)EBV 融合和內(nèi)吞，此外發(fā)現(xiàn)整合素受體αvβ5、αvβ6 和αvβ8 對(duì)EBV 進(jìn)入上皮細(xì)胞無(wú)影響，這與Chesnokova等［36-37］發(fā)現(xiàn)不一致。

Zhang 等［38］通過整合微陣列和RNA 干擾篩選分析發(fā)現(xiàn)，EphA2 對(duì)EBV 進(jìn)入上皮細(xì)胞有重要作用。EphA2敲除可顯著降低EBV上皮細(xì)胞感染，EphA2過表達(dá)增加上皮細(xì)胞EBV 感染。在易受EBV 感染的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系（Akata、Akata-EBV 和Raji）中未檢測(cè)到EphA2 的表達(dá)，表明EphA2 對(duì)上皮細(xì)胞的EBV 感染是必需的，但對(duì)B 細(xì)胞感染則非必需。EphA2 的配體結(jié)合區(qū)和纖維黏連蛋白Ⅲ型重復(fù)區(qū)是EphA2介導(dǎo)的EBV感染的必需區(qū)域。

上皮細(xì)胞感染EBV 需要EphA2，但EBV 編碼蛋白同樣調(diào)節(jié)EphA2 的表達(dá)。Xiang 等［39］研究發(fā)現(xiàn)，EBV 陽(yáng)性NPC 細(xì)胞中EphA2 的表達(dá)水平明顯高于EBV 陰性NPC 細(xì)胞，PI3K/AKT 信號(hào)通路在NPC 的異種移植和臨床標(biāo)本中均被顯著激活。Miao等［40］報(bào)道EphA2 和AKT 之間的相互調(diào)節(jié)環(huán)，非經(jīng)典途徑的EphA2 是AKT 的底物，提示EBV 可能通過AKT 信號(hào)途徑調(diào)節(jié)EphA2的表達(dá)。

3 EPHA2的靶向治療展望

EphA2 在NPC 中過表達(dá)以及其在正常組織中有限的功能提示可以作為開發(fā)新的抗腫瘤藥物的候選靶標(biāo)，并為開發(fā)新的阻斷EBV 感染策略提供新的選擇。針對(duì)EphA2 的各種治療策略正在開發(fā)中，包括小分子拮抗劑、ANXA1 衍生肽、ephrinA1 多肽類似物、單克隆抗體、免疫治療、RNAi介導(dǎo)的EphA2抑制、免疫偶聯(lián)物，為治療腫瘤提供了寶貴的機(jī)會(huì)。

Zhang等［38］在體外實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用可溶性EphA2蛋白、抗EphA2抗體、可溶性EphA2配體ephrin A1或Eph A2抑制劑2，5-二甲基吡咯苯甲酸衍生物有效阻斷EBV上皮細(xì)胞感染。另一種小分子酪氨酸激酶抑制劑達(dá)沙替尼具有對(duì)EphA2的有效抑制活性。達(dá)沙替尼是一種口服活性抑制劑，其作用靶向多種激酶，包括BCR-ABL和Src家族激酶［41］。一項(xiàng)進(jìn)行中的研究發(fā)現(xiàn)，基于ANXA1與EphA2結(jié)合的N端氨基酸20～30區(qū)，應(yīng)用一種ANXA1衍生肽A1，其能切斷ANXA1與EphA2的連接，成功下調(diào)EphA2，并在體內(nèi)外抑制NPC的致癌性。EphA2高表達(dá)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U-251MG細(xì)胞用EphrinA1 cDNA轉(zhuǎn)染，結(jié)果顯示顯著降低EphA2水平，顯著抑制細(xì)胞增殖和遷移［42］。Koolpe等［43］嘗試?yán)肊phrinAl多肽類似物封閉EphA2治療腫瘤。EphA2激動(dòng)劑單克隆抗體可以降低卵巢癌HeyA8細(xì)胞的EphA2水平，在體內(nèi)研究中EphA2激動(dòng)劑單克隆抗體或與劑紫杉醇聯(lián)合使用，顯著抑制了鼠腫瘤的生長(zhǎng)［44］。EphA2表位在腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中的差異表達(dá)為腫瘤免疫治療提供了靶點(diǎn)［45］。EphA2肽段在多種腫瘤中被呈遞，能夠誘導(dǎo)腫瘤特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)［46］，因此以EphA2為靶點(diǎn)的免疫治療研究逐步開展。為了抑制EphA2的過度表達(dá)，RNA干擾（RNAi）方法特異性沉默EphA2基因表達(dá)的序列已經(jīng)得到應(yīng)用，在胰腺癌來(lái)源的MIA-PaCa2細(xì)胞中，RNAi抑制EphA2表達(dá)，同時(shí)抑制裸鼠異種移植模型中的腫瘤生長(zhǎng)［47］。

由于其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)模式，EphA2受體被認(rèn)為是一個(gè)很有前途的腫瘤歸巢靶向傳遞策略，123B9靶向EphA2酪氨酸激酶受體配體結(jié)合區(qū)。在胰腺癌和黑色素瘤模型中，123B9與紫杉醇結(jié)合，比未結(jié)合藥物更有效［48］。EphA2靶向免疫偶聯(lián)物將選擇性地誘導(dǎo)癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性，同時(shí)保留正常細(xì)胞，EphA2單克隆抗體1C1偶聯(lián)到高效微管抑制劑MMAF（monomethyl auristin phenylalanine），在EphA2陽(yáng)性卵巢癌HeyA8細(xì)胞和原位卵巢癌模型中顯示出療效［49］。BT5528為雙環(huán)肽結(jié)合到MMAE（maleimidocaproyl-monomethyl auristatin E）顯示出更強(qiáng)的藥代動(dòng)力學(xué)和更小的毒副作用［50］。

隨著針對(duì)EphA2 的各種途徑靶向治療研究不斷取得進(jìn)展，EphA2有望成為開發(fā)新型NPC靶向治療方法的一個(gè)有前途的策略（圖2），為NPC患者的治療提供了寶貴的機(jī)會(huì)。

圖2 EphA2在NPC致病過程中的作用及治療靶點(diǎn)

4 結(jié)語(yǔ)

EPHA2在NPC中致病過程和EBV感染中的作用是明確的，EphA2受體及其ephrin配體之間的相互關(guān)系復(fù)雜。關(guān)于EphA2和ephrin配體在其他生長(zhǎng)因子受體及其腫瘤微環(huán)境中的功能需要進(jìn)一步闡明，因此探明EphA2在NPC發(fā)生和發(fā)展中的分子機(jī)制將為今后NPC診斷和靶向治療提供新的線索，為合理設(shè)計(jì)針對(duì)Eph-ephrin系統(tǒng)的靶向治療策略提供理論依據(jù)。