不同提取方法對(duì)金銀花靈芝多糖清除DPPH的效果評(píng)價(jià)

杜文倩 劉小杰 黨凱云 張慧珍 趙志龍

【摘要】目的：探究不同方法提取的金銀花靈芝多糖對(duì)DPPH自由基清除的效果。方法：采用溶劑回流法、搖床振蕩法、超聲萃取法等提取金銀花靈芝中的多糖成分，以L-抗壞血酸為對(duì)照品，采用DPPH法研究不同濃度多糖溶液對(duì)自由基的清除作用。結(jié)果：最適合用于提取金銀花靈芝多糖的方法是超聲萃取法，采用水做溶劑提取時(shí)所得多糖的抗氧化能力最強(qiáng)。結(jié)論：金銀花靈芝多糖具有清除DPPH自由基的作用，在一定的濃度范圍內(nèi)，金銀花靈芝多糖的濃度越大，其清除DPPH自由基的能力越強(qiáng)。

【關(guān)鍵詞】金銀花靈芝多糖;提取;清除自由基

【中圖分類(lèi)號(hào)】 R248

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【文章編號(hào)】2095-6851（2020）08-032-02

[中圖分類(lèi)號(hào)]Q539

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

自由基會(huì)傷害生物膜、酶、維生素、蛋白質(zhì)及活細(xì)胞功能，可造成細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能破壞，如何清除自由基的問(wèn)題已得到普遍關(guān)注[1]。金銀花靈芝為多孔菌科褐孔菌屬真菌子實(shí)體，又稱(chēng)“銀花莪子”或“忍冬藤菇”。富含多糖、三萜、生物堿、麥角甾醇等多種活性成分，具有抗氧化、抗病毒、抑菌等功效。因此，本文通過(guò)不同方法提取金銀花靈芝多糖，并探究其清除DPPH的效果[2]。

1?材料和方法

1.1?材料和儀器

金銀花靈芝子實(shí)體（山東臨沂市平邑縣），無(wú)水乙醇，2，2-二（4-叔辛基苯基）-1-苦肼基自由基（DPPH·）（Solarbio，丙酮，氯仿（分析純），紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2?方法

1.2.1?溶劑回流法

稱(chēng)取金銀花靈芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶劑回流提取3 h，待提取液冷卻后進(jìn)行抽濾，真空濃縮后，37℃真空干燥，稱(chēng)重，用溶劑溶解并定容。

1.2.2?搖床振蕩法

稱(chēng)取金銀花靈芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶劑，放置一定溫度下的搖床上浸提6 h，將提取液進(jìn)行抽濾，真空濃縮后，37℃真空干燥，稱(chēng)重，用溶劑溶解并定容。

1.2.3?超聲萃取法

稱(chēng)取金銀花靈芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶劑，超聲萃取30 min，將提取液進(jìn)行抽濾，真空濃縮后，37℃真空干燥，稱(chēng)重，用溶劑溶解并定容。

1.2.4?金銀花靈芝多糖對(duì)DPPH自由基的清除作用[3]

準(zhǔn)確稱(chēng)取20 mg DPPH，95%乙醇溶解并定容于250 ml容量瓶中，DPPH濃度為2×10-4 mol/L，取等體積待測(cè)液及2×10-4 mol/L DPPH 溶液加入同一具塞試管中，搖勻。30 min后用95% 乙醇做參比在525 nm下測(cè)定其吸光度Ai，同時(shí)測(cè)定2×10-4mol/L DPPH溶液與等體積95%乙醇混合液的吸光度Ac，以及待測(cè)液與等體積95%乙醇混合液的吸光度Aj。根據(jù)下列公式計(jì)算清除率：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%

2?結(jié)果

2.1?不同提取方法的浸出率比較

對(duì)金銀花靈芝多糖采用不同方法進(jìn)行提取[4]，計(jì)算浸出率，結(jié)果見(jiàn)表1。采用三種不同方法對(duì)金銀花靈芝多糖進(jìn)行提取，其浸出率由高到低依次為：溶劑回流法>搖床振蕩法>超聲萃取法。

2.2?不同溶劑提取結(jié)果的比較

采用兩種不同提取方法和四種不同溶劑對(duì)金銀花靈芝多糖進(jìn)行提取，結(jié)果見(jiàn)表2。通過(guò)對(duì)比其提浸出率，按照提浸出率由高到低的順序依次為：水>95%乙醇>丙酮>氯仿?？梢?jiàn)，其浸出率與溶劑的極性有關(guān)，溶劑極

性越大，浸出率越高。

2.3?不同溶劑提取物清除 DPPH 自由基的能力[5]

對(duì)不同溶劑的金銀花靈芝多糖進(jìn)行清除自由基活性能力的測(cè)定，結(jié)果如圖1所示。95%乙醇、水、丙酮對(duì)金銀花靈芝多糖都具有一定的清除自由基活性的能力。隨著金銀花靈芝多糖濃度的增加，清除率逐漸增高，但當(dāng)清除率增加到一定值后，清除率趨于平緩甚至降低。在一定的濃度范圍內(nèi)，采用水作為溶劑所提取得到的金銀花靈芝多糖抗氧化能力最強(qiáng)，其次是采用丙酮得到的提取物，95%乙醇提取得到的多糖抗氧化能力最弱。對(duì)自由基的清除能力以及清除率表示，清除率越高，說(shuō)明多糖提取物的抗氧化作用越強(qiáng)。

3?討論

通過(guò)比較以上幾種提取方法，超聲萃取法是最適合提取金銀花靈芝多糖的提取方法，它具有操作過(guò)程簡(jiǎn)單、提取速度快、節(jié)能、多糖提取率高等優(yōu)勢(shì)。金銀花靈芝多糖具有清除DPPH自由基的作用，采用水做溶劑提取時(shí)所得多糖的抗氧化能力最強(qiáng)，其次為丙酮，用95%乙醇做溶劑時(shí)抗氧化能力最弱。不同溶劑提取多糖時(shí)各提取物清除DPPH自由基的結(jié)果均表明，在一定的濃度范圍內(nèi)，金銀花靈芝多糖的濃度越大，其清除DPPH自由基的能力越強(qiáng)[6]。

我國(guó)對(duì)金銀花的種植及使用已經(jīng)十分普遍，金銀花的藥用價(jià)值也已經(jīng)被大量開(kāi)發(fā)利用。但由于金銀花靈芝產(chǎn)量減少、價(jià)格昂貴，目前對(duì)其研究和開(kāi)發(fā)應(yīng)用還相對(duì)較少，而對(duì)于金銀花靈芝多糖的研究則少之又少。本研究對(duì)金銀花靈芝多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到了較為合適的提取方法;同時(shí)通過(guò)金銀花靈芝多糖對(duì)DPPH自由基清除能力的研究，證明了金銀花靈芝多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性，這一研究對(duì)金銀花靈芝多糖的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

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