高效液相色譜法測(cè)定麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

許世富

摘要 ? ?利用高效液相色譜法測(cè)定麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。采用C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），在室溫下，以乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（5∶95，V/V）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流速1.0 mL/min。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在5～200 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9），平均回收率為92.13%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.93%;鹽酸偽麻黃堿在5～200 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2=0.999 9），平均回收率為93.64%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.05%。本方法簡(jiǎn)單快捷，精密度好，可用于控制麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。

關(guān)鍵詞 ? ?麻黃魚(yú)腥草散;鹽酸麻黃堿;鹽酸偽麻黃堿;含量測(cè)定;HPLC

中圖分類號(hào) ? ?Q946.88 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ? ?A

文章編號(hào) ? 1007-5739（2020）15-0213-02 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

Abstract ? ?The contents of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Mahuang Yuxingcao powder were determined by HPLC. Using C18 column （5 μm， 4.6 mm×150 mm） at room temperature， acetonitrile-0.02 mol/L phosphoric acid solution （5∶95，V/V） was used as mobile phase， the detection wavelength was 210 nm， the flow rate was 1.0 mL/min. The result showed that the linear range of ephedrine hydrochloride was 5-200 μg/mL （R2=0.999 9）， the average recovery was 92.13% and the relative standard deviation was 2.93%. The linear range of pseudoephedrine hydro-chloride was 5-200 μg/mL （R2=0.999 9）， the average recovery was 93.64% and the relative standard deviation was 4.05%. The method is simple， rapid and accurate， and can be used to control the content of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Mahuang Yuxingcao powder.

Key words ? ?Mahuang Yuxingcao powder; ephedrine hydrochloride; pseudoephedrine hydrochloride; content determination;HPLC

麻黃魚(yú)腥草散為獸藥中常用中藥散劑，收載于《中國(guó)獸藥典》2015年版二部，由麻黃、黃芩、魚(yú)腥草、穿心蓮和板藍(lán)根組成，具有宣泄肺熱、平喘止咳的功效，臨床主要用于肺熱咳嗽、雞支原體病的治療[1-2]。近年來(lái)，關(guān)于麻黃生物堿毒副作用的報(bào)道日趨增多[3]。因此，嚴(yán)格控制其質(zhì)量也越來(lái)越重要。目前，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)麻黃、黃芩、魚(yú)腥草、穿心蓮和板藍(lán)根進(jìn)行顯微鑒別和鹽酸麻黃堿的薄層色譜鑒別，不能很好地控制其質(zhì)量。有報(bào)道建立高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷、穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量以控制黃芩、穿心蓮的質(zhì)量[4-6]。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-10]，建立了測(cè)定麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的高效液相色譜法以控制其中麻黃質(zhì)量。結(jié)果表明，本方法具有結(jié)果準(zhǔn)確、快速分離、操作簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好等特點(diǎn)，提升了麻黃魚(yú)腥草散的質(zhì)量，為全面有效地控制其質(zhì)量提供了技術(shù)參考。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?試驗(yàn)材料及設(shè)備

1.1.1 ? ?儀器和設(shè)備。U3000高效液相色譜儀，配紫外檢測(cè)器，美國(guó)賽默飛;電子天平，BT-125D，德國(guó)賽多利斯;超純水器，Milipo Simplicity，美國(guó)密理博;超聲波儀，KQ-300DV，昆山市超聲儀器有限公司。

1.1.2 ? ?試劑和材料。乙腈，為色譜純;磷酸、三乙胺，為分析純;水，為超純水，實(shí)驗(yàn)室自制。對(duì)照品：鹽酸麻黃堿，含量100.0%，批號(hào)171241-201809;鹽酸偽麻黃堿，含量99.8%，批號(hào)171237-201510，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。麻黃魚(yú)腥草散3批，批號(hào)分別為20190601、20190602、20190603，來(lái)源于安徽XX動(dòng)物藥業(yè)有限公司。

1.2 ? ?試驗(yàn)方法

1.2.1 ? ?溶液制備。①對(duì)照品溶液制備。分別稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品約10 mg，精密稱定，放入10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液，每1 mL含鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿各1 mg。②供試品溶液制備。取麻黃魚(yú)腥草散約3 g，精密稱定，放入50 mL量瓶中，加1.44%磷酸溶液45 mL，超聲25 min，放至室溫，加1.44%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻。過(guò)濾，取濾液1 mL置于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。③陰性對(duì)照溶液制備。按處方及制法制備不含麻黃的陰性制劑，按 ②方法，制備相應(yīng)的陰性對(duì)照溶液。

1.2.2 ? ?色譜條件。色譜柱為C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）;流動(dòng)相為乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（含0.06%三乙胺）（5∶95， V/V）;流速1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm;進(jìn)樣量20 μL。

1.2.3 ? ?專屬性試驗(yàn)。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按1.2.2色譜條件測(cè)定。

1.2.4 ? ?線性關(guān)系考察。吸取對(duì)照品貯備溶液0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL，分別置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為5、10、20、50、100、200 μg/mL的對(duì)照品系列溶液，分別取20 μL注入高效液相色譜儀，在1.2.2色譜條件下測(cè)定。

1.2.5 ? ?穩(wěn)定性試驗(yàn)。取供試品溶液，在0、2、4、8、12、24 h，按1.2.2色譜條件測(cè)定峰面積計(jì)算。

1.2.6 ? ?精密度試驗(yàn)。取麻黃魚(yú)腥草散（批號(hào)為20190601），按1.2.1中②方法制備供試品溶液，按1.2.2色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算。

1.2.7 ? ?準(zhǔn)確度試驗(yàn)。取已知含量的麻黃魚(yú)腥草散，研細(xì)，稱取6份，每份約1.5 g，分別加入一定的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品貯備溶液，按1.2.1中②方法制備、1.2.2色譜條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算。

1.2.8 ? ?樣品測(cè)定。取麻黃魚(yú)腥草散3批（批號(hào)分別為20190601、20190602、20190603），分別按1.2.1中②方法制備，按1.2.2色譜條件測(cè)定，以峰面積用外標(biāo)法計(jì)算。

2 ? ?結(jié)果與分析

2.1 ? ?專屬性試驗(yàn)

鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿峰與其他相鄰峰分離良好，陰性對(duì)照色譜在與對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，專屬性強(qiáng)，能滿足檢測(cè)要求，見(jiàn)圖1～3。

2.2 ? ?線性關(guān)系

以峰面積Y為縱坐標(biāo)，以濃度x（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：Y鹽酸麻黃堿=0.123 4x+0.096 3，R2=0.999 9;Y鹽酸偽麻黃堿=0.123 8x+0.067 3，R2=0.999 9。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在5～200 μg/mL濃度范圍內(nèi)，與其對(duì)應(yīng)的峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3 ? ?穩(wěn)定性試驗(yàn)

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）分別為0.42%、0.59%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，說(shuō)明該方法穩(wěn)定性較好。

2.4 ? ?精密度試驗(yàn)

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）分別為0.28%、0.39%，說(shuō)明該方法精密度良好。

2.5 ? ?準(zhǔn)確度試驗(yàn)

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回收率分別為87.82%～96.04%、90.34%～100.20%，平均回收率分別為92.13%、93.64%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.93%、4.05%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 ? ?樣品測(cè)定

3批麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿的含量分別為0.827、0.813、0.836 mg/g，鹽酸偽麻黃堿的含量分別為0.516、0.535、0.529 mg/g，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 ? ?結(jié)論與討論

3.1 ? ?質(zhì)控成分的選擇

麻黃魚(yú)腥草散為《中國(guó)獸藥典》2015年版二部[1]收載品種，具有宣泄肺熱、平喘止咳的功效，臨床主要用于肺熱咳嗽、雞毒支原體病的治療[11]。處方中含有麻黃、黃芩、魚(yú)腥草、穿心蓮和板藍(lán)根，其中麻黃具有解表散寒、宣肺平喘、利水消腫等功能，在整個(gè)方劑中起主要治療作用?！吨袊?guó)獸藥典》2015年版二部[1]僅有顯微鑒別和鹽酸麻黃堿的薄層色譜鑒別，選擇測(cè)定其中麻黃有效成分有助于對(duì)麻黃魚(yú)腥草散進(jìn)行質(zhì)量控制。麻黃主要成分為多種生物堿，如鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸麻黃次堿以及黃酮類化合物等。鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿均有緩解支氣管平滑肌痙攣的作用[3]?！吨袊?guó)獸藥典》2015年版二部[1]以及《中國(guó)藥典》2015年版一部[12]均對(duì)麻黃中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量有具體要求，二者總量不得少于0.80%。因此，選擇鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為其中質(zhì)控方法之一。本方法采用HPLC法測(cè)定麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，操作便捷快捷，且二者在5～200 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性均能達(dá)到要求。

3.2 ? ?提取方法的選擇

本試驗(yàn)比較了1.44%磷酸溶液[1]、乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（5∶95）[9，11]、乙腈-0.2 mol/L磷酸溶液[10，12]等3種提取溶劑，分別以超聲方式進(jìn)行提取20、25、30 min。最終選擇1.44%磷酸溶液作為提取溶液、超聲提取25 min為本試驗(yàn)方法，結(jié)果證明該方法提取效果好、速度快，操作簡(jiǎn)單，系統(tǒng)適應(yīng)性好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。

3.3 ? ?流動(dòng)相的選擇

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在210 nm有最大吸收峰，本試驗(yàn)選擇210 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。甲醇在210 nm處有少量紫外吸收[8]，選擇用乙腈作為有機(jī)相，考察了不同比例的乙腈對(duì)分離效果的影響，通過(guò)調(diào)整有機(jī)相比例不斷優(yōu)化分離度和檢測(cè)效率。隨著乙腈比例的提高，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時(shí)間不斷縮短，在滿足分離度要求的前提下，最終選擇了乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液作為流動(dòng)相，保留時(shí)間較短，分離度符合要求。進(jìn)一步優(yōu)化后發(fā)現(xiàn)，在磷酸溶液中添加0.06%三乙胺，可使制劑中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分離良好，峰形更佳，減少拖尾及其他雜質(zhì)峰的干擾。

本研究選擇高效液相色譜法測(cè)定麻黃魚(yú)腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，方法快捷簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好、回收率高，可有效控制該制劑中麻黃的含量，為麻黃魚(yú)腥草散標(biāo)準(zhǔn)修訂提供參考。

4 ? ?參考文獻(xiàn)

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