新疆褐牛同期發(fā)情和同期排卵—定時輸精效果

劉建明， 褚洪忠， 陳幻喜， 楊光維， 李 濤， 施巧婷， 徐照學， 乃比江*

(1.伊犁州畜牧科學研究所，新疆 伊寧 835000；2.尼勒克縣烏贊鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，新疆 尼勒克 835700；3.河南省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)所，鄭州 450008)

牛同期發(fā)情技術(shù)是利用外源性激素直接作用于卵巢，人為的調(diào)控母牛發(fā)情周期進程，使群體母牛集中在某一時段同時發(fā)情[1]。同期發(fā)情對規(guī)?；鰜碚f便于生產(chǎn)管理，促進母牛群發(fā)情，使乏情母牛出現(xiàn)性周期活動，是開展胚胎移植必要的過程，也便于培養(yǎng)人工授精技術(shù)人員[2]。對于牧區(qū)牛群來說，通過同期發(fā)情處理，可將母牛群集中到配種點，解決部分偏遠牧區(qū)交通不便的問題。同期排卵—定時輸精技術(shù)是在同期發(fā)情基礎上發(fā)展的繁殖新技術(shù)，就是利用促性腺激素釋放激素(GnRH)、前列腺素(PG)等外源生殖激素處理母畜，根據(jù)排卵時間直接輸精，而不再需要觀察母畜發(fā)情，從而降低了工作量，也解決了養(yǎng)殖戶不會觀察牛只發(fā)情，錯配、漏配的問題，并可提高母畜的利用率和受胎率[3]。近年來，國內(nèi)外學者在奶牛、肉羊、生豬上廣泛開展了同期排卵—定時輸精技術(shù)試驗，取得了較好的效果[4]，但同期排卵—定時輸精技術(shù)在不同品種、不同方法上應用效果卻鮮有報道。

新疆褐牛主要分布在新疆天山北部、塔額盆地，是新中國成立以來我國自主培育的第1個乳肉兼用牛品種，具有抗病力強、適宜放牧等特點，深受廣大農(nóng)牧民養(yǎng)殖戶的喜愛[5]。近年來，隨著人工授精冷配技術(shù)在新疆褐牛上廣泛應用，有力推動了新疆褐牛的繁殖效率和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。但在新疆褐牛實際生產(chǎn)中，仍然存在母牛產(chǎn)后不發(fā)情，乏情，配種受胎率低，產(chǎn)犢間隔長的問題，除在生產(chǎn)管理、營養(yǎng)飼料等原因外，發(fā)情鑒定和輸精時間的把握是造成新疆褐牛繁殖效率低的重要原因。本試驗通過比較同期發(fā)情和同期排卵—定時輸精不同處理方法在新疆褐牛上的應用效果，旨在探索新疆褐牛效果最佳、成本最低的同期發(fā)情處理方法和同期排卵—定時輸精方法，為新疆褐牛生產(chǎn)實際提供指導，也為解決牧區(qū)人工授精推廣難提供方法，同時也為加快新疆褐牛選育提高和新品系選育步伐提供新的繁殖技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 試驗地點

試驗地點選擇新疆伊犁州尼勒克縣2個新疆褐牛養(yǎng)殖合作社(I、Ⅱ)。

1.2 試驗動物

選擇養(yǎng)殖合作社I中2胎以上45頭新疆褐牛健康、膘情較好母牛開展不同同期發(fā)情處理方法比較試驗，選擇養(yǎng)殖合作社Ⅱ中2胎以上20頭新疆褐牛健康、膘情較好母牛開展不同同期排卵—定時輸精處理方法比較試驗，2個養(yǎng)殖合作社均采用TMR飼糧飼喂，散欄飼養(yǎng)，自由采食、飲水。

1.3 試驗藥品及凍精

孕酮為CUE-MATE孕酮栓，新西蘭產(chǎn)，含1.56 g孕酮；前列腺素為氯前列腺烯醇(PGF2α)，寧波三生生物科技有限公司產(chǎn)，0.5 mg，GnRH類似物促黃體素釋放激素A3(LHRH-A3)，寧波三生生物科技有限公司，25 μg。凍精為北京奶牛中心產(chǎn)美系褐牛凍精和德國寶牛育種中心產(chǎn)德系褐牛凍精。

1.4 同期發(fā)情、同期排卵—定時輸精處理分組

試驗牛分為5組，即A、B、C、D、E組，A、B、C組為3種同期發(fā)情處理方法組，D、E組為2種同期排卵—定時輸精處理組。

A組：PG(PGF2α)+PG(PGF2α)法處理方法，即2次PG法，在母牛發(fā)情周期的任意一天，注射0.5 mg，2 mL PGF2α，記為第0天，在第11天再注射0.5 mg，2 mL PGF2α，之后開始仔細觀察發(fā)情情況，并做好發(fā)情時間、發(fā)情情況記錄。

B組：PG(PGF2α)法處理方法，即1次PG法，在母牛發(fā)情周期的任意一天，注射0.5 mg，2 mL PGF2α，之后觀察發(fā)情，并做好發(fā)情時間、發(fā)情情況記錄。

C組：孕酮(CIDR)+PG(PGF2α)法處理方法，即在母牛發(fā)情周期的任意一天，陰道埋CIDR栓，記為第0天，在第11天去栓，再注射0.5 mg，2 mL PGF2α，之后開始仔細觀察發(fā)情情況，并做好發(fā)情時間、發(fā)情情況記錄。

D組：GnRH(LHRH-A3)+PG(PGF2α)+GnRH(LHRH-A3)+AI，即在母牛發(fā)情周期的任意一天，注射LHRH-A3，記為第0天，第7天再注射PGF2α，在48 h后注射LHRH-A3，16～24 h內(nèi)進行人工授精配種。

E組：孕酮(CIDR)+GnRH(LHRH-A3)+PG(PGF2α)+GnRH(LHRH-A3)+AI，即在母牛發(fā)情周期的任意一天埋植CIDR栓，并同時注射LHRH-A3，記為第0天，第7天撤CIDR栓，并同時注射PGF2α，48 h后再注射LHRH-A3，16 h后進行人工授精配種。

1.5 妊娠檢測

人工授精配種后60 d后用直腸B超法進行妊娠診斷，統(tǒng)計懷胎率。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

原始數(shù)據(jù)經(jīng)過Excel軟件進行整理，用SPSS 19.0軟件進行卡方檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同同期發(fā)情處理方法母牛發(fā)情情況分析

由表1可知，3種不同同期發(fā)情處理方法母牛主要集中在12～24 h內(nèi)發(fā)情，其中12～24 h內(nèi)A組和C組處理方法母牛發(fā)情率極顯著高于B組處理方法(P<0.01)，C組比A組高出32.3%，A組和C組處理方法差異不顯著(P>0.05)；24～48 h內(nèi)C組處理方法母牛發(fā)情率最高，顯著高于A組處理方法(P<0.05)，極顯著高于B組處理方法(P<0.01)，A組處理方法極顯著高于B組處理方法(P<0.05)；48～72 h內(nèi)A組處理方法顯著高于B組和C組(P<0.05)，3種處理方法總發(fā)情率中C組最高為93.3%，A組為86.7%，B組最低為40.0%，C組與A組總發(fā)情率極顯著高于B組(P<0.01)。

表1 同期發(fā)情率分析

2.2 不同同期發(fā)情處理方法母牛發(fā)情后配種妊娠情況分析

由表2可知，經(jīng)3種同情發(fā)情處理后的3組中發(fā)情母牛數(shù)分別為13頭，6頭，14頭，對3組發(fā)情母牛進行人工授精配種，60 d后經(jīng)直腸B超妊娠檢測定胎，A、B、C 3組情期受胎頭數(shù)分別為9頭，4頭，10頭，受胎率分別為69.2%，66.7%，71.4%，三者差異不顯著(P<0.05)。

表2 同期發(fā)情配種妊娠情況分析

2.3 不同同期排卵—定時輸精方法母牛配種妊娠情況分析

由表3可知，2種不同同期排卵—定時輸精方法在輸精時E組母牛全部發(fā)情，發(fā)情率達100%，D組發(fā)情率達到90%，發(fā)情母牛按照處理方法要求配種時間前，經(jīng)直腸檢查排卵情況，D組排卵5頭，E組排卵6頭，排卵率分別為50%，60%，二者差異顯著(P<0.05)，發(fā)情排卵率二者差異不顯著(P>0.05)，經(jīng)人工授精冷配后，60 d B超妊娠檢測定胎，總懷胎率D組與E組相同，均為50%。

表3 不同同期排卵—定時輸精方法母牛配種妊娠情況分析

3 討 論

3.1 不同同期發(fā)情處理方法新疆褐牛母牛發(fā)情情況的影響

人工授精技術(shù)的廣泛應用，有力推動了優(yōu)質(zhì)種公牛遺傳物質(zhì)的推廣和地方牛品種改良、育種等進程[6]，同期發(fā)情技術(shù)可有效提高人工授精的效率，它是利用外源激素對母牛進行處理，以提高母牛發(fā)情的同步率。對規(guī)?；B(yǎng)殖場來說，利用同期發(fā)情技術(shù)，在預定的時間對待配母畜進行集中配種，查發(fā)情方便省力，產(chǎn)仔時間相近，統(tǒng)一管理，縮短產(chǎn)犢間隔，降低飼養(yǎng)成本，提高養(yǎng)殖效益[7]。對于牧區(qū)放牧新疆褐牛來說，利用同期發(fā)情技術(shù)，可有效提升牧區(qū)牛羊分群集中人工授精冷配點的工作效率，減少偏遠牧區(qū)人工授精推廣難的問題。母牛在1個發(fā)情周期中可分為黃體期和卵泡期過程，PG具有溶解黃體的作用，外源注射PG后引起黃體退化造成孕酮合成和分泌量降低，解除孕酮對卵泡發(fā)育的抑制作用，卵泡恢復發(fā)育形成新的優(yōu)勢卵泡，雌激素分泌量增加，母牛表現(xiàn)發(fā)情并排卵[2]。當運用CIDR栓埋植在母牛陰道中，持續(xù)、緩慢釋放孕酮，撤CIDR栓后，孕酮水平急速下降，解除孕酮對卵泡發(fā)育的抑制，而誘使母牛發(fā)情并排卵則。本試驗結(jié)果顯示，利用PG、CIDR等對母牛進行外源激素處理，2次PG法和CIDR+PG法在同期發(fā)情處理中都取得了較好的效果，2次PG法的成本要遠遠低于CIDR+PG法，因此，選用2次PG法在新疆褐牛上應用更為合適。1次PG法發(fā)情率低的主要原因是由于PGF2α對前5 d或無黃體的母牛處理無反應，這與李金輝等人的研究結(jié)果[8]相似。因此，若要進一步降低同期發(fā)情處理費用，利用1次PG法，首先應開展母牛直腸黃體情況檢測，進行選擇性處理。

3.2 不同同期發(fā)情處理方法新疆褐牛母牛配種妊娠情況的影響

同期發(fā)情處理后母牛配種妊娠懷胎率情況主要受配種時是否排卵的決定，同時也受到母牛膘情、飼養(yǎng)管理等方面的影響[9]。本試驗中試驗母牛為規(guī)模化養(yǎng)殖場的母牛，總體來說膘情較好，3組處理方法情期受胎率達到了66.7%以上，因此，同情發(fā)情處理技術(shù)在新疆褐牛上應用，在配種懷胎率方面可取得較好的效果，但首先要控制好母牛膘情。同時，本試驗中試驗牛數(shù)較少，且在5月份氣候較適宜，同期發(fā)情率較肖杰和高慶華等研究報道同期發(fā)情率82.5%，75%高[2,10]，配種懷胎率與李靜等人的研究[11]相似。

3.3 不同同期排卵—定時輸精方法新疆褐牛母牛配種妊娠情況的影響

家畜同期排卵—定時輸精(TAI)技術(shù)是在同期發(fā)情技術(shù)上發(fā)展而來的一種家畜繁殖新技術(shù)，母畜通過外源激素處理后，使其同期發(fā)情和同期排卵，在規(guī)定的時間內(nèi)直接人工輸精配種[2]。Pursley等首次報道了促性腺激素釋放激素和前列腺素處理母牛達到同期排卵的目的，并對該項技術(shù)進行命名同期排卵—定時輸精[12]。同期排卵的基本原理為母牛發(fā)情周期的任意一天注射GnRH，促進垂體分泌促卵泡素(FSH)和促黃體素(LH)，使卵巢上卵泡成熟并排卵，未妊娠，形成黃體，之后第7天再注射PGF2α誘導黃體溶解，黃體溶解使孕酮減低促進卵泡發(fā)育，48 h后母牛發(fā)情并注射GnRH，促進LH分泌，引起排卵。本試驗結(jié)果顯示，兩種處理方法中發(fā)情率都比較高，E組處理方法甚至達到了100%，直腸檢測排卵情況D組、E組處理方法都超過或為50%，說明同期排卵效果較好，總懷胎率方面兩者差異不顯著。因此，從生產(chǎn)成本上來說，D組方法更具有優(yōu)勢。本試驗中配種時間D組在16～24 h，E組在16 h，下一步在配種時間還有待于進一步研究，以提高新疆褐牛同期排卵—定時輸精懷胎率，得出最優(yōu)技術(shù)方案。

4 結(jié) 論

新疆褐牛同期發(fā)情處理應用2次PG(PGF2α)法、CIDR+PG法(PGF2α)都取得了較好的發(fā)情率(86.7%，93.3%)，但從處理成本上來說，2次PG(PGF2α)法更經(jīng)濟適用；若要進一步降低同期發(fā)情處理費用，利用1次PG法，首先應開展母牛直腸黃體情況檢測，進行選擇性處理。同期排卵—定時輸精宜采用GnRH(LHRH-A3)+PG(PGF2α)+GnRH(LHRH-A3)+AI方法，成本低，且受胎率較好，適宜在牧區(qū)集中人工授精冷配點推廣。