急性淋巴細(xì)胞白血病患者miR-429表達(dá)分析

余蕙君 黃婷婷 潘楠楠

【摘要】 目的 探討急性淋巴細(xì)胞白血病患者miR-429表達(dá)情況。方法 選取30例急性淋巴細(xì)胞白血病患者作為觀察組， 另選同期30例健康體檢者作為對(duì)照組。比較兩組研究對(duì)象miR-429表達(dá)水平;比較觀察組miR-429不同表達(dá)水平患者年齡、性別、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、乳酸脫氫酶、骨髓原始細(xì)胞比例、危險(xiǎn)分級(jí)、生存時(shí)間。結(jié)果 觀察組miR-429表達(dá)水平（2.48±0.15）高于對(duì)照組的（0.92±0.06）， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組30例患者中miR-429低表達(dá)16例， 高表達(dá)14例。miR-429高表達(dá)患者年齡、性別、血紅蛋白水平與miR-429低表達(dá)患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;miR-429高表達(dá)患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳酸脫氫酶、骨髓原始細(xì)胞比例、危險(xiǎn)分級(jí)均高于miR-429低表達(dá)患者， 生存時(shí)間短于miR-429低表達(dá)患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 miR-429表達(dá)和急性淋巴細(xì)胞白血病患者的預(yù)后有密切關(guān)系， 可以作為評(píng)價(jià)預(yù)后的參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 急性淋巴細(xì)胞白血病;miR-429;預(yù)后;白細(xì)胞;骨髓原始細(xì)胞比例;危險(xiǎn)分級(jí)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.20.016

【Abstract】 Objective ? To discuss the expression of miR-429 in acute lymphoblastic leukemia patients. Methods ? There were 30 acute lymphoblastic leukemia patients selected as the observation group， and concurrent 30 healthy examinees as the control group. The expression of miR-429 of the two groups was compared. The age， gender， white blood cell count， hemoglobin， lactate dehydrogenase， bone marrow primordial cells ratio， risk classification， and survival time of patients with different expression levels of miR-429 in the observation group were compared. Results ? The expression of miR-429 （2.48±0.15） of the observation group was higher than that of the control group （0.92±0.06）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Among the 30 patients in the observation group， 16 cases had low expression of miR-429 and 14 cases had high expression of miR-429. There was no statistically significant difference in age， gender， hemoglobin of miR-429 high expression patients compared with miR-429 low expression patients （P>0.05）. White blood cell count， lactate dehydrogenase， bone marrow primordial cells ratio and risk classification of patients with high expression of miR-429 were higher than those of patients with low expression of miR-429， and survival time was shorter than that of patients with high expression of miR-429， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ? The expression of mir-429 is closely related to the prognosis of patients with acute lymphoblastic leukemia， which can be used as a reference index to evaluate the prognosis.

【Key words】 Acute lymphoblastic leukemia; miR-429; Prognosis; White blood cells; Bone marrow primordial cells ratio; Hazard classification

急性淋巴細(xì)胞白血病屬于血液系統(tǒng)疾病， 是患者的骨髓造血干細(xì)胞、淋巴祖細(xì)胞發(fā)生異常分化和惡性增殖， 其臨床癥狀是貧血、發(fā)熱和感染[1]。急性淋巴細(xì)胞白血病可以分為B淋巴細(xì)胞白血病、T淋巴細(xì)胞白血病， 屬于兒童、青少年高發(fā)性腫瘤[2]。急性淋巴細(xì)胞白血病的臨床治療效果有一定程度的提高， 但是仍有患者的預(yù)后很差， 有效的探尋其發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的敏感指標(biāo)， 對(duì)于提高治療效果有重要意義。miRNA是一種內(nèi)源性非編碼RNA分子， 其包含18～24個(gè)內(nèi)源性堿基， 可以特異性調(diào)節(jié)目的基因表達(dá)， 對(duì)于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要影響。miR-429在不同類型腫瘤疾病中均有異常性表達(dá)， 其和疾病的惡性程度有關(guān)聯(lián)性。資料顯示[3]， 肺癌患者的病灶組織中miR-429水平較低時(shí)， 其臨床效果較好， 提示其可以作為腫瘤預(yù)后的觀察指標(biāo)。但是目前關(guān)于急性淋巴細(xì)胞白血病患者miR-429表達(dá)的研究， 卻鮮有報(bào)道。本研究分析30例急性淋巴細(xì)胞白血病患者的臨床資料， 擬探討急性淋巴細(xì)胞白血病患者miR-429表達(dá)情況， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2016年3月～2018年3月的30例急性淋巴細(xì)胞白血病患者作為觀察組， 其中男13例， 女17例;同時(shí)選取同期30例健康體檢者作為對(duì)照組， 其中男20例， 女10例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①兩組研究對(duì)象的一般資料完整;②經(jīng)過骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)對(duì)患者進(jìn)行確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已經(jīng)在其他醫(yī)療結(jié)構(gòu)接受急性淋巴細(xì)胞白血病患者;②心、肝、腎嚴(yán)重功能不全者;③藥物過敏者;④未按照要求完成治療者。

1. 2 儀器與方法

1. 2. 1 試劑與儀器 ①胎牛血清;②TRLZOL試劑;③淋巴細(xì)胞分離液;④逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）試劑盒;⑤細(xì)胞培養(yǎng)板;⑥AriaMx定量PCR儀;⑦高速冷凍離心機(jī);⑧ZCZY-CS8搖床。

1. 2. 2 方法 對(duì)兩組研究對(duì)象的骨髓樣本進(jìn)行采集， 將單個(gè)核細(xì)胞分離， 樣本液4.0 ml/份+相等體積淋巴細(xì)胞分離液， 4 ℃， 450 × g進(jìn)行離心， 時(shí)間為20 min，?制備樣本細(xì)胞液。RT-PCR檢測(cè)：提取細(xì)胞內(nèi)的總RNA， 以分光光度法對(duì)RNA質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估， 以反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。設(shè)置逆轉(zhuǎn)錄條件：①50℃ 15 min;②92℃ 2 min， 反應(yīng)產(chǎn)物放置在-20℃冷凍保存。設(shè)計(jì)miR-429引物。設(shè)置反應(yīng)條件：①以95℃預(yù)變性處理， 時(shí)間為5 min;②95℃變性處理， 時(shí)間為15 s， 56℃復(fù)性， 時(shí)間為20 s， 72℃延伸時(shí)間為45 s。從變性直到延伸32個(gè)循環(huán)， 采用2-△△CT法對(duì)miR-429相對(duì)的表達(dá)水平。2-△△CT>2.5， 提示miR-429高水平表達(dá)， 2-△△CT≤2.5， 提示miR-429低水平表達(dá)。

1. 3 觀察指標(biāo) ?比較兩組研究對(duì)象miR-429表達(dá)水平;比較觀察組miR-429不同表達(dá)水平患者年齡、性別、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、乳酸脫氫酶、骨髓原始細(xì)胞比例、危險(xiǎn)分級(jí)、生存時(shí)間。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn);等級(jí)計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組研究對(duì)象miR-429表達(dá)水平比較 觀察組miR-429表達(dá)水平高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 miR-429 水平與急性淋巴細(xì)胞白血病患者療效的關(guān)系 觀察組30例患者中miR-429低表達(dá)16例， 高表達(dá)14例。miR-429高表達(dá)患者年齡、性別、血紅蛋白水平與miR-429低表達(dá)患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;miR-429高表達(dá)患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳酸脫氫酶、骨髓原始細(xì)胞比例、危險(xiǎn)分級(jí)均高于miR-429低表達(dá)患者， 生存時(shí)間短于miR-429低表達(dá)患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

急性淋巴細(xì)胞白血病作為血液系統(tǒng)腫瘤性疾病， 其主要癥狀是貧血、感染和出血， 并且對(duì)于肝臟、脾臟和骨骼等形成浸潤， 危害患者的身體健康和生命安全。升高的miR-429 表達(dá)水平會(huì)造成急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖， 提高其遷移能力和耐藥性， 說明急性淋巴細(xì)胞白血病病情變化可能和miR-429 表達(dá)水平有一定的關(guān)聯(lián)性。有研究表明[4]， miR-429 表達(dá)水平和卵巢癌細(xì)胞的侵襲力、遷移能力有相關(guān)性， 也和病灶的惡性程度相關(guān)。急性淋巴細(xì)胞白血病臨床特征比較復(fù)雜， 其通過單一性少量的臨床指標(biāo)來指導(dǎo)臨床治療， 受到一定的限制。

miR-429 表達(dá)水平和急性淋巴細(xì)胞白血病的臨床療效有一定的相關(guān)性， 對(duì)其監(jiān)測(cè)利于觀察急性淋巴細(xì)胞白血病的臨床效果。本研究中， 觀察組miR-429表達(dá)水平高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組30例患者中miR-429低表達(dá)16例， 高表達(dá)14例。miR-429高表達(dá)患者年齡、性別、血紅蛋白水平與miR-429低表達(dá)患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;miR-429高表達(dá)患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳酸脫氫酶、骨髓原始細(xì)胞比例、危險(xiǎn)分級(jí)均高于miR-429低表達(dá)患者， 生存時(shí)間短于miR-429低表達(dá)患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示急性淋巴細(xì)胞白血病臨床造血干細(xì)胞分化障礙和miR-429 表達(dá)水平有一定的關(guān)系， miR-429高表達(dá)還可以增加腫瘤細(xì)胞的惡性程度， 提高患者的危險(xiǎn)分級(jí)， 降低機(jī)體免疫功能和代謝水平的損傷， 進(jìn)而影響白細(xì)胞水平、乳酸脫氫酶。體外的細(xì)胞研究表明[5-7]， miR-429 高表達(dá)水平對(duì)于急性淋巴細(xì)胞白血病患者的PI3K-AKT信號(hào)通路形成干擾， 進(jìn)而影響白血病細(xì)胞的增殖， 促使白細(xì)胞對(duì)于藥物形成耐藥性， 影響臨床療效。既往研究中， 治療效果不佳或者生存期較短的急性淋巴細(xì)胞白血病患者miR-429 處于高表達(dá)水平， 而生存期較長的患者， miR-429 處于低表達(dá)水平， 此結(jié)果和本研究基本一致。

綜上所述， miR-429表達(dá)和急性淋巴細(xì)胞白血病患者預(yù)后有密切關(guān)系， 可以作為評(píng)價(jià)預(yù)后的參考指標(biāo)。

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[收稿日期：2020-04-09]