茂名地區(qū)漢族人群MTHFRC677T基因多態(tài)性研究

陳紅玲 蕭飛 譚滿勝

[摘要] 目的 探討茂名地區(qū)漢族人群亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T位點(diǎn)的基因多態(tài)性。方法 采用PCR-熒光探針法 ，分析方便選取2018年2—8月間2 803例茂名地區(qū)來茂名市人民醫(yī)院就診漢族人群的外周血樣本亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T基因型，并與其他6地區(qū)漢族人群的數(shù)據(jù)比較。結(jié)果 茂名地區(qū)人群中亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）677T等位基因頻率（22.21%）與瓊海漢族（22.11%）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而與惠州漢族（29.53%）、湘潭漢族（34.98%）、湖北漢族（34.64%）、廊坊漢族（58.29%）、延邊漢族（55.06%）地區(qū)的人群等位基因頻率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 漢族人群亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）C677T基因多態(tài)性分布具有地區(qū)差異，由南向北亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）677T等位基因的頻率逐漸增高。

[關(guān)鍵詞] 亞甲基四氫葉酸還原酶;基因多態(tài)性;基因頻率

[Abstract] Objective To investigate the gene polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C677T locus in Han population in Maoming area. Methods The PCR-fluorescent probe method was used to analyze the methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C677T gene in peripheral blood samples of 2 803 Han people who came to Maoming People's Hospital from Maoming District between February? and August 2018. And compared with the data of the Han population in the other 6 regions. Results The frequency of methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） 677T allele in population of Maoming area was not statistically significant （P>0.05）. Compared with Qionghai Han population （22.11%）， there were statistically significant differences in allele frequencies（22.21%） between the populations of the Hans in Huizhou （29.53%）， Xiangtans （34.98%）， Hubeis （34.64%）， Hans in Langfang （58.29%）， and Hans in Yanbian （55.06%） （P<0.05）. Conclusion The distribution of （MTHFR） C677T gene polymorphism in the Han population has regional differences， and the frequency of the MTHFR 677T allele has gradually increased from south to north.

[Key words] Methylenetetrahydrofolate reductase; Gene polymorphism; Gene frequency

基因的多態(tài)性在生物群體中十分常見，基因的多態(tài)性可產(chǎn)生具有不同功能的蛋白，這就導(dǎo)致了機(jī)體對(duì)某種疾病的易感性或者對(duì)某些藥物的反應(yīng)出現(xiàn)差異[1]。研究某個(gè)基因的多態(tài)性產(chǎn)生的功能差異有重要的醫(yī)學(xué)意義，這可有助于人們預(yù)防疾病及指導(dǎo)臨床用藥[2]。該研究方便選取2018年2—8月間就診于茂名市人民醫(yī)院產(chǎn)檢孕婦及體檢人員進(jìn)行了茂名地區(qū)漢族人群的MTHFRC677T基因型多態(tài)性研究，旨在探討該地區(qū)漢族人群MTHFR C677T基因多態(tài)性的分布情況及分子遺傳學(xué)特征，為個(gè)體化的孕期增補(bǔ)葉酸及葉酸個(gè)體化治療高Hcy心血管疾病提供依據(jù)，報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選取就診于茂名市人民醫(yī)院產(chǎn)檢孕婦及體檢人員2 803例，男：女=1 415：1 388，年齡18～45歲，平均年齡為35.4歲，納入標(biāo)準(zhǔn)為漢族且無基礎(chǔ)疾病;該次試驗(yàn)過程上報(bào)該院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行，試驗(yàn)開始前將試驗(yàn)內(nèi)容告知患者及其家屬并簽署知情同意書。

1.2? 儀器與試劑

試劑：全血基因組提取試劑盒（西安天隆科技有限公司）;? MTHFR C677T基因檢測(cè)試劑盒（深圳奧薩醫(yī)藥有限公司）;

儀器：提取儀（西安天隆科技有限公司）;? 擴(kuò)增儀（宏石熒光定量擴(kuò)增儀slan-96P）;

1.3? 方法

1.3.1? 樣本采集及DNA制備? 采集病例1 mLEDTA抗凝靜脈血，-80℃可長(zhǎng)期保存，樣本禁止反復(fù)凍融。全血標(biāo)本、陰性質(zhì)控和陽性同時(shí)使用西安天隆科技有限公司核酸提取試劑進(jìn)行提取，具體操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。樣本DNA在2～8℃可以貯存1周或-2 0℃貯存1個(gè)月，反復(fù)凍存不超過3次。

1.3.2? PCR擴(kuò)增? 取DNA 樣本4 μL、PCR擴(kuò)增混合液10 μL，雙蒸水0.75 μL、探針0.25 μL、加入PCR反應(yīng)管中混勻蓋好，將上述 PCR 反應(yīng)管放入熒光定量 PCR 儀中擴(kuò)增，選擇等位基因模塊，熒光信號(hào)的收集定為 FAM 和 VIC，數(shù)據(jù)的采集定在 60℃程序設(shè)置? ，陰性質(zhì)控和陽性同時(shí)進(jìn)行。見表1。

1.3.3? 結(jié)果判讀? 由儀器對(duì)結(jié)果進(jìn)行自動(dòng)判讀，具體操作按照產(chǎn)品說明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.4? 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，Hardy-Weiberg平衡定律計(jì)算各基因型個(gè)體數(shù)的期望值，組間基因型頻率及等位基因頻率用（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示茂名地區(qū)漢族人群中MTHFR 677CC、677CT和677TT基因型比率分別為60.19%、35.21%和4.60%，其中MTHFR 677C和677T等位基因在該人群中的分布頻率分別為77.79%和22.21%，見表2。

與其他6地區(qū)數(shù)據(jù)分析比較顯示， 茂名地區(qū)漢族人群中MTHFR 677T等位基因頻率為22.21%，與瓊海漢族（22.11%）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而與惠州漢族（29.53%）、湘潭漢族（34.98%）、湖北漢族[（34.64%）、廊坊漢族（58.29%）、延邊漢族（55.06%）地區(qū)的人群等位基因頻率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3? 討論

葉酸對(duì)細(xì)胞的分裂生長(zhǎng)及核酸、氨基酸、蛋白質(zhì)的合成起著重要的作用[3]。 MTHFR C677T基因型不同，機(jī)體對(duì)葉酸的代謝能力不同[4]。因此研究了解該地區(qū)漢族人群的MTHFR C677T基因型是十分必要的，結(jié)果顯示該位點(diǎn)等位基因頻率存在地區(qū)差異性，與相關(guān)研究結(jié)果一致[5-7]：該研究中， 茂名地區(qū)漢族人群MTHFR基因C677T的等位基因頻率為22.21%。這與肖雁等[8]的研究結(jié)果是一致的，其研究結(jié)果顯示，漢族MTHFR 677T等位基因頻率為22.8%。茂名地區(qū)漢族人群中MTHFR C677T基因型分布與其他6個(gè)地區(qū)數(shù)據(jù)比較分析結(jié)果顯示，該地區(qū)漢族的MTHFR C677T基因型分布與瓊海漢族差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而與惠州漢族、湘潭漢族、湖北漢族、廊坊漢族、延邊漢族]地區(qū)的漢族人群等位基因頻率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明漢族人群中MTHFR C677T基因型分布及等位基因頻率存在地域差異。該研究結(jié)果顯示MTHFR C677T基因型地區(qū)分布呈漸變趨勢(shì)，即由南向北677T等位基因的頻率越來越高。同時(shí)，多個(gè)項(xiàng)目的研究表明;葉酸的代謝水平不同會(huì)導(dǎo)致機(jī)體血清Hcy水平出現(xiàn)差異，繼而引起各類心腦系統(tǒng)疾病，對(duì)于心血管科的個(gè)體化用藥，未發(fā)現(xiàn)葉酸能力有風(fēng)險(xiǎn)者無需服用葉酸，葉酸利用能力有風(fēng)險(xiǎn)，高同型半胱氨酸血癥患者需最低補(bǔ)充葉酸650 ug/d，待服用2周后可將半胱氨酸水平降至最低，此外MTHFR的多態(tài)性能夠?qū)θ~酸的代謝產(chǎn)生影響進(jìn)而導(dǎo)致高同型半胱氨酸的出現(xiàn)，近年來許多研究都表明：高同型半胱氨酸與主動(dòng)脈夾層、腦中風(fēng)、心肌梗死等心腦血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)，其中高同型半胱氨酸能夠通過DNMT1使Cyclin A的低甲基化進(jìn)而抑制內(nèi)皮干細(xì)胞的增殖而對(duì)血管的修復(fù)功能造成損壞，該情況能夠解釋高同型半胱氨酸與心腦血管疾病的發(fā)病率之間存在的聯(lián)系。臨床中許多疾病也有一些地域性的差異，不同地區(qū)的氣候、微量元素以及飲食習(xí)慣等因素都會(huì)導(dǎo)致某一族群對(duì)某種疾病出現(xiàn)不同的易感性，例如大部分鼻咽癌患者都是出現(xiàn)在中國，鼻咽癌的發(fā)生與某些基因的多態(tài)性顯著相關(guān)。因此猜測(cè)亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR） 的多態(tài)性在中國出現(xiàn)南北地域的差異與這些地方的氣候、微量元素以及飲食習(xí)慣等因素密切相關(guān)，進(jìn)一步說明這些基因的多態(tài)性與這些因素的關(guān)系在疾病的一級(jí)預(yù)防中顯得十分重要，遺憾的是明確的證據(jù)仍需要臨床中進(jìn)一步的流行病研究證實(shí)。但是通過檢測(cè)人群中的MTHFRC677T的多態(tài)性可能發(fā)現(xiàn)心血管疾病、惡性腫瘤的高危人群，從而指導(dǎo)臨床對(duì)這些患者的隨訪及早期干預(yù)，這對(duì)降低這類疾病所帶來的社會(huì)負(fù)面影響是非常可觀的。

4? 結(jié)論

該研究顯示茂名地區(qū)漢族人群MTHFR 677C基因分布頻率（77.79%）顯著高于MTHFR677T基因分布頻率（22.21%），不同于其他地區(qū)的MTHFR C677T基因多態(tài)性分布特征。綜上所述，通過遺傳檢測(cè)與葉酸代謝能力相關(guān)的基因位點(diǎn)多態(tài)性。篩選出有葉酸代謝障礙的高危人群，進(jìn)行個(gè)體化的補(bǔ)充葉酸以有利于進(jìn)一步降低茂名地區(qū)新生兒出生的缺陷率。個(gè)體化利用葉酸調(diào)節(jié)心腦疾病患者的血清的Hcy含量。通過對(duì)茂名地區(qū)漢族人群進(jìn)行遺傳篩查，針對(duì)存在葉酸代謝障礙遺傳風(fēng)險(xiǎn)的人群個(gè)體化用藥、為茂名地區(qū)孕婦個(gè)體化補(bǔ)充葉酸提供證據(jù)及作為心腦血管患者服用葉酸的依據(jù)。

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（收稿日期：2020-02-17）