回春散預(yù)防和治療熱性驚厥實驗研究*

★ 吳蘭生 張志明 羅紅婷（.廣東健泉大健康產(chǎn)業(yè)開發(fā)股份有限公司 廣東 佛山 5800；.順德職業(yè)技術(shù)學(xué)院 廣東 佛山 58300）

熱性驚厥（FC）是小兒時期最常見的驚厥性疾患，約占小兒驚厥的50%，在6歲以下的發(fā)病率近5%。因發(fā)生驚厥可能會導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷，而神經(jīng)元的損傷是不可以修復(fù)，從而將影響到某些發(fā)育障礙。因此預(yù)防和治療熱性驚厥的安全藥品是現(xiàn)代兒科學(xué)的研究熱點?；卮荷⒃从凇毒葱尢盟幷f》中的“小兒回春丹”，收錄于中醫(yī)院校本科教材《方劑學(xué)》（開竅劑“涼開節(jié)”）中［1］，其湯頭歌為“回春丹中用四香，蔻枳星夏并牛黃；鉤蠶陳貝麻全蝎，朱砂草竹共大黃”。同時回春散也被收錄于《兒科中醫(yī)醫(yī)療技術(shù)及中成藥用藥指導(dǎo)》中的“上呼吸道感染”治療用藥［2］。其適應(yīng)癥為用于小兒驚風(fēng)，感冒發(fā)熱等。臨床多有使用，但其作用機制不完全清楚。本實驗通過藥理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)其作用機制與大腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量改變控制有關(guān)。

1 受試藥物和試劑

回春散，生產(chǎn)單位：國藥集團馮了性（佛山）藥業(yè)有限公司，批號：190001；規(guī)格：0.3 g/袋，3袋/盒。地西泮片，生產(chǎn)單位：，批號，規(guī)格。Υ-氨基丁酸（GABA）酶聯(lián)免疫測試盒，生產(chǎn)單位：南京建成生物工程研究所，批號：H16820190507。谷氨酸（Glu）測試盒，生產(chǎn)單位：南京建成生物工程研究所，批號：20190523。

2 試驗動物和分組

購入21 d幼齡SD大鼠，生產(chǎn)單位：廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號為：SCXK（粵）2018-0002，廣東省科學(xué)技術(shù)廳頒發(fā)。在動物房正常飼養(yǎng)2 d，溫度20.0℃～25.4℃；濕度65.8%～71.0%。以熱水浴方法誘導(dǎo)高熱驚厥，最終溫度確認(rèn)為46℃，此次篩選的試驗大鼠均在5 min內(nèi)發(fā)生驚厥，隨機將選出的75只大鼠分成5組：正常組，模型組，地西泮組，回春散低劑量組，回春散高劑量組。

3 主要儀器

水浴槽（自制，將40 cm×40 cm×50 cm分成4個小格，置于恒溫水箱中）；BS-110S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；TG-16W臺式微量高速離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司）。

4 劑量設(shè)計和實驗方法

將選出的75只大鼠，正常組以室溫進行水?。?］，模型組和用藥組水浴的溫度為46℃。正常組和模型組灌胃生理鹽水，每日2次，連續(xù)2 d。其他3組給藥劑量如下：地西泮組：2.632 mg/kg灌胃（相當(dāng)于兒童0.5 mg/kg臨床用量等效量），每日2次，連續(xù)2 d；回春散低劑量組：108 mg/kg灌胃（相當(dāng)于兒童20 mg/kg臨床用量等效量），每日2次，連續(xù)2 d；回春散高劑量組：354 mg/kg灌胃（相當(dāng)于兒童60 mg/kg臨床用量等效量），每日2次，連續(xù)2 d。將分組的大鼠連續(xù)灌胃2 d后，將模型組和用藥組分別進行46℃熱水浴實驗，時間為6 min，對于6 min未有驚厥發(fā)作視為不發(fā)生驚厥。在此過程中觀察每組大鼠驚厥潛伏期（指大鼠放入熱水中即刻至發(fā)生驚厥的時間，單位：秒）、驚厥持續(xù)時間（指大鼠由剛開始發(fā)生驚厥至驚厥停止的時間，單位：秒）和驚厥級別［4］。驚厥級別依發(fā)生的嚴(yán)重程度，具體分為：0級，沒有發(fā)生驚厥；I級，點頭，眨眼等面部抽動行為；II級，有節(jié)律性的點頭；III級，前肢陣攣，抽搐；IV級，全身強直；V級，全身強直，跌倒。隨后將所有大鼠斷頭處死，迅速取出大腦，稱量后置組織冷凍管中用液氮快速冷凍，隨后于-80℃低溫冰箱中保存待用。

對于保存的大腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量測定方法如下：準(zhǔn)確地稱組織質(zhì)量，按質(zhì)量（g）：體積（mL）=1∶9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下勻漿，2 500轉(zhuǎn)/min，離心10 min，取上清液，按檢測試劑盒說明書檢測Υ-氨基丁酸（GABA）及谷氨酸（Glu）含量［5］。

5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），兩組間比較用t檢驗，P＜0.05時，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

6 結(jié)果

6.1 各組大鼠驚厥程度比較 在常溫水中水浴，無驚厥現(xiàn)象的發(fā)生。該水浴溫度無出現(xiàn)死亡，但無用藥組發(fā)生驚厥非常明顯，用藥組與模型組比較：地西泮組P＜0.01，回春散低劑量組P＜0.01，回春散高劑量組P＜0.01，結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠驚厥程度比較（n=15）

6.2 各組大鼠驚厥潛伏期、驚厥持續(xù)時間比較 各用藥組與模型組比較，驚厥潛伏期、驚厥持續(xù)時間均有顯著差異：地西泮組P＜0.01，回春散低劑量組P＜0.01，回春散高劑量組P＜0.01。各用藥組有差異，但無顯示差異，P＞0.05，結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠驚厥潛伏期、驚厥持續(xù)時間比較（±s ，n=15）

表2 各組大鼠驚厥潛伏期、驚厥持續(xù)時間比較（±s ，n=15）

注：與模型組比較，*P＜0.01。

組別 潛伏期 持續(xù)時間模型組 240.3±31.2 138.7±22.6地西泮組 290.1±29.5* 99.7±13.2*回春散低劑量組 282.9±27.6* 105.2±16.7*回春散高劑量組 283.1±30.6* 101.3±13.5*

6.3 各組大鼠大腦皮質(zhì)GABA和Glu檢測 各用藥組與模型組比較，大鼠大腦皮質(zhì)組織的GABA和Glu均有顯著差異：地西泮組P＜0.01，回春散低劑量組P＜0.01，回春散高劑量組P＜0.01。各用藥組有差異，但無顯示差異，P＞0.05，結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠大腦皮質(zhì)GABA和Glu檢測結(jié)果（ ±s，n=15）

表3 各組大鼠大腦皮質(zhì)GABA和Glu檢測結(jié)果（ ±s，n=15）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 Glu（μmol/gprot） GABA（nmol/gprot）正常組 80.2±8.9** 16.2±2.5**模型組 112.0±9.6 7.6±1.5地西泮組 86.5±8.5** 14.8±2.6**回春散低劑量組 90.1±8.7* 13.9±2.0**回春散高劑量組 86.1±9.0** 14.3±2.1**

7 討論

有研究表明興奮性氨基酸遞質(zhì)與抑制性氨基酸遞質(zhì)平衡失調(diào)在熱性驚厥（FC）發(fā)病機制中起到關(guān)鍵性作用，在驚厥發(fā)生前期，大腦皮質(zhì)組織內(nèi)的抑制性氨基酸遞質(zhì)（GABA）水平降低， 興奮性氨基酸遞質(zhì)（Glu）水平升高［6］。

回春散為上市多年的產(chǎn)品，在臨床上廣泛用于小兒驚風(fēng)，感冒發(fā)熱等癥狀，是作為小兒發(fā)熱腦保護的首選用藥。本實驗通過熱水浴誘發(fā)驚厥，觀察到臨床經(jīng)典用藥地西泮具有明顯地降低驚厥的作用，回春散兩個劑量組也有明顯地降低驚厥的作用，在大鼠驚厥程度、驚厥潛伏期和驚厥持續(xù)時間都有明顯改善。在用藥組中，對于大腦皮質(zhì)組織內(nèi)的GABA明顯提高，同時降低了Glu水平，該實驗結(jié)果與已報道的一些實驗整體結(jié)果一致。在結(jié)果中，回春散低劑量組與高劑量組在檢驗的數(shù)據(jù)中雖然有些差異，但無顯著性的差異，這可能與整個處方有關(guān)或其中某個有效物質(zhì)并沒有量效關(guān)系，具體作用機制需進一步研究。

通過本實驗的整體研究，回春散可以延長熱性驚厥大鼠驚厥潛伏期，縮短驚厥持續(xù)時間，減輕驚厥嚴(yán)重程度，同時升高GABA水平，降低Glu水平，起到預(yù)防和治療小兒驚風(fēng)，熱性驚厥的作用。