黑龍江省規(guī)?；膛龈苯Y核病血清學調查

(黑龍江省農墾科學院畜牧獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150038)

牛副結核病是由副結核分枝桿菌（MAP）引起的以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進行性消瘦為特征的人畜共患傳染病，是被我國農業(yè)農村部列為二類多種動物共患病的一種傳染病[1,2]。該病主要由消化道感染，處于排菌期的牛通過糞便、乳汁排菌，其他易感牛只通過糞口途徑感染該菌。該病的潛伏期很長，從感染到出現臨床癥狀一般需要2～3年。該病目前呈世界性分布，養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達的國家，如英國、法國、丹麥、荷蘭、德國等國尤為多見[3～5]。我國最早在內蒙古發(fā)現并確診了奶牛副結核病的發(fā)生，此后遼寧、黑龍江、內蒙古、貴州、陜西、河北等地區(qū)相繼報道了本病的流行；近年來本病幾乎遍及東北、西北、華北等地區(qū)[6～8]。據調查，副結核病正在世界范圍內逐漸傳入新的地區(qū)，對牛羊養(yǎng)殖業(yè)來說已經是一個危害廣泛、急迫的國際問題。近年來由于奶牛和肉牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，生產規(guī)模越來越大，集約化程度越來越高，牛流動范圍越來越廣，副結核病的發(fā)生呈擴大的趨勢，全世界已經有168個國家和地區(qū)報道此病發(fā)生。

為掌握黑龍江省奶牛副結核病流行現狀，為更好地控制該病的流行傳播提供科學依據，筆者于2018-2019年針對黑龍江省規(guī)?；鲞M行了血清學調查研究，本研究共采集9個牧場的泌乳牛和育成牛血清進行了檢測，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

表1 2019年各調查牧場DHI指標

2018年，在黑龍江省不同地區(qū)選取9個規(guī)?；膛鲞M行了調研。被檢牛只進行尾靜脈采血，分離血清后-20℃保存，用于實驗室檢測。2019年在相同牛場隨機重復采樣。由于犢牛血清很難檢測到抗體陽性，本試驗所采樣品均為泌乳牛和成母牛，采樣牛場均未免疫副結核分枝桿菌疫苗。采樣同時對相應牛場進行了生產情況的調查，具體情況見表1，由于編號為6、7的兩個牛場沒有參加奶牛生產性能測定（DHI），所以數據缺失。

1.2 檢測試劑盒

牛副結核分枝桿菌抗體檢測試劑盒，購于美國IDEXX公司。

1.3 結果判定

試驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。陽性對照平均值（PC）≥0.350，且陽性對照平均值（PC）與陰性對照平均值（NCA450）的比值≥3.00的條件下，檢測結果有效，否則試驗不成立，需按操作說明書進行重復實驗。

按照以下公式計算并進行結果判定：樣品S/P≤45% ，判為 MAP 抗體陰性；當45＜S/P＜55%，判為可疑；S/P≥55%，判為 MAP 抗體陽性。

式中，PC為陽性對照值；NCA450為陰性對照值。

2 結果

2.1 參與調查的規(guī)?；膛龈苯Y核感染率

表2 2018-2019年黑龍江省規(guī)?；膛龈苯Y核檢測結果

本次調查共檢測9個牛場，所有牛場均檢測出血清陽性牛，被檢牛場副結核感染率100% 。

2018年共檢測樣品7 494份，陽性355份，陽性率4.74%。陽性率最低的牛場為0.66%，最高的為9.33%。

2019年共檢測樣品7 541份，陽性325份，陽性率4.31%。檢測結果表明，除5號、8號和9號牛場外，其余牛場樣品陽性率都略有增加。檢測結果見表2。

2.2 副結核抗體陽性率與牛場DHI指標相關性分析

本次調查共有7個牧場為DHI參測場，測定的項目包括日平均產奶量、305d產奶量、平均乳脂率和平均乳蛋白率（表3）。通過表3可以看出產奶量最高的3號牛場（305d產奶量11.44t）抗體陽性率5.5%，產奶量最低的4號場（305d產奶量8.12t）抗體陽性率3.0%?？贵w陽性率與牧場生產性能數據見表3。

表3 2019年副結核抗體陽性率與牧場生產性能數據匯總

使用CORREL 函數分別計算副結核陽性率與平均產奶量、305d產奶量、平均乳脂率、平均乳蛋白的相關系數，結果見表4。

表4 副結核陽性率與牛場生產性能相關性分析

由表4可以看出，副結核陽性率與日平均產奶量和305d產奶量呈正相關，與平均乳脂率和平均乳蛋白率呈現低水平負相關。

2.3 副結核抗體陽性牛與陰性牛生產性能比較分析

根據2019年副結核抗體檢測結果，篩選8號牛場2013年和2014年出生的牛只，泌乳牛均為第三胎次的DHI監(jiān)測數據；篩選9號牛場2013年和2016年出生牛只，分別為第三胎次和第一胎次的DHI監(jiān)測數據。使用CNDHL數據分析軟件對DHI監(jiān)測數據進行分析得出如下結果：

通過篩選，8號牛場2013年牛只中副結核抗體陽性牛共有11頭，抗體陰性牛196頭；2014年牛只中副結核抗體陽性牛共有5頭，抗體陰性牛134頭（表5）。

9號牛場2013年牛只中副結核抗體陽性牛共有16頭，抗體陰性牛196頭；2016年牛只中副結核抗體陽性牛共有8頭，抗體陰性牛165頭（表6）。

表5 8號牛場2019年DHI監(jiān)測數據

表6 9號牛場2019年DHI監(jiān)測數據

監(jiān)測數據使用SPSS軟件進行雙尾t檢驗分析，使用graphpad prism 8軟件分析作圖，得出結果如圖1～4。

圖1 8號牛場2013年出生牛

圖2 8號牛場2014年出生牛

圖3 9號牛場2013年出生牛

圖4 9號牛場2016年出生牛

由圖1和圖2可以看出，8號牛場副結核抗體陰性牛305d奶量、成年當量、平均乳脂率平均乳蛋白率均高于陽性牛，差異不顯著（P＞0.05）。

由圖3和圖4可以看出，9號牛場副結核抗體陰性牛305d奶量、成年當量高于陽性牛其中2013年牛只結果差異顯著（P＜0.01）；副結核抗體陰性的牛平均乳脂率和平均乳蛋白率均低于陽性牛，其中2013年牛只結果差異顯著（P＜0.01）。

3 討論

3.1 本試驗采用血清學ELISA方法于2018-2019年間對黑龍江省奶牛場進行了副結核的血清學調查，檢測的牛場中副結核陽性率100%，說明黑龍江地區(qū)規(guī)?；銎毡榇嬖谀膛８苯Y核病。兩年間，除去5號、8號和9號牛場，其他6個牛場的陽性率均有不同程度的增加，分別增加了1.1、2.74、0.04、0.27、1.26、0.42個百分點，說明該病的感染在持續(xù)發(fā)生。由于絕大多數的感染牛無癥狀，而臨床發(fā)病牛的生產能力降低，在確診之前已經被淘汰了，所以副結核感染導致的牛只淘汰率很難估計，使該病在奶牛場的隱性感染不能引起管理者的重視，并未采取相應的防治措施是牛場感染率增加的首要原因。

2018年陽性率僅為0.66%的2號牛場是建場時間很短的新場，該場在檢出副結核陽性后并沒有引起足夠的重視。由于檢出牛沒有明顯副結核癥狀，牛場沒有采取相關防治措施，導致2019年陽性數明顯增多，陽性率增加到3.4%。

5號、8號和9號牛場為本研究項目的合作牛場，通過幾次檢測篩查淘汰陽性牛只和初步實施防控措施，2019年的陽性率較2018年均有不同程度的下降，分別由5.28%、3.56%和9.33%下降到2.3%、3.0%和4.85%。說明雖然副結核在奶牛養(yǎng)殖場普遍存在，但是通過對引入牛的嚴格檢測、對牛場的定期篩查盡早診斷淘汰病牛、科學的飼養(yǎng)管理等措施，最終是可以實現牛場副結核轉陰的目標的。

3.2 本研究的結果顯示副結核陽性率與牛場的整體生產性能呈較低正相關性，與乳成分（平均乳脂率和平均乳蛋白率）呈較低負相關。這是因為抗體陽性率的檢出只能說明副結核在牛群中存在，但處于哪個階段不能確定，不能代表牛群的現階段健康水平；由于每個牧場的飼養(yǎng)管理水平不同，測試牛存在胎次、品種等因素的差異，因此單純的通過每個牧場的生產性能比較并不能說明副結核抗體陽性率對牛場的影響。筆者接下來會選取2個有代表性的牛場進行跟蹤調查，通過同一牛場的縱向比較，在剔除影響因素后，再確定副結核對生產性能的影響。

3.3 通過對同一牛場（8、9號牛場）同一批次牛只進行同胎次的生產水平比較分析，研究結果表明無論是一胎次的牛只還是三胎次的牛只，副結核抗體陰性牛305d奶量和成年當量均高于陽性牛，說明副結核病對奶牛的產奶量存在負面影響。通常情況下，產奶量和乳脂率、乳蛋白率等乳成分指標是負相關關系，即產奶量高時乳成分相對降低，所以會出現9號牛場2013年牛只乳成分陰性牛低于于陽性牛的情況。以上結論基于2019年DHI監(jiān)測數據分析得出，今后還需要長時間的數據跟蹤進行比較分析以期得到更翔實準確的結論。

3.4 副結核實驗室診斷方法目前主要有細菌培養(yǎng)、PCR檢測、ELISA檢測幾種方法，細菌培養(yǎng)方法準確度高但是耗時長，培養(yǎng)難度大，對實驗條件要求高；PCR檢測特異性好，但容易出現假陰性，檢測成本較高，也需要相應的實驗條件；ELISA方法具有操作簡單、敏感、快速等優(yōu)點，相對于細菌培養(yǎng)和PCR檢測更適于進行大批量的樣品篩查，建議作為牛場副結核病的常規(guī)檢測方法。

3.5 副結核分枝桿菌對外界環(huán)境的抵抗力比較強，在被污染的牧場、廄肥中可存活數月至1年。直射陽光下可存活10個月。但對濕熱的抵抗力比較弱，60℃30min、85℃15min即可將其殺滅。此外，3%～5%的苯酚溶液、5%的來蘇兒溶液、4%的福爾馬林溶液10min可將其滅活，10%～20%的漂白粉、5%的氫氧化鈉溶液2h也可以殺滅該菌。在飼養(yǎng)管理中檢測到有副結核病陽性的牛群，對被污染的畜舍、運動場、欄桿等，可以根據現場情況應用以上幾種消毒劑采取噴霧、浸泡或沖洗的辦法進行徹底的消毒殺菌。

4 結語

副結核病可造成奶牛體重下降、產乳量降低及其他多種疾病的發(fā)生，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經濟損失。被副結核分枝桿菌污染的牛奶極易將病原傳染給犢牛與人類，嚴重影響?zhàn)B殖業(yè)的健康發(fā)展，更嚴重地威脅著公共衛(wèi)生安全，需要引起足夠重視。由于目前沒有特效藥物及有效的疫苗能夠控制副結核病，所以針對感染的畜群及時檢出和淘汰陽性牛是控制該病行之有效的辦法。應堅持對牛群定期進行血清學診斷，對有臨床癥狀的病牛，立即淘汰處理。對血清學抗體陽性但無臨床癥狀的牛應隔離飼養(yǎng)，其所產的犢牛不飼喂該母牛的初乳。進口?；蛲獾匾M牛時，應進行副結核檢疫，凡是陽性抗體牛一律不準進場，從根源上消滅副結核病的傳播。