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    RGB顏色空間下數(shù)字圖像比色分析測定肌氨酸的研究

    2020-08-04 10:20:37陳國榕胡靖朱琴
    數(shù)碼世界 2020年7期
    關(guān)鍵詞:比色法手機(jī)

    陳國榕  胡靖 朱琴

    摘要:在堿性條件下,氧化石墨烯與1,2-萘醌-4-磺酸鈉作用,隨后和肌氨酸反應(yīng),溶液由無色變?yōu)槌赛S色。用安卓智能手機(jī)搭載免費(fèi)的取色軟件Color Grab在自制測試盒拍攝待測溶液,獲得RGB 顏色空間數(shù)值進(jìn)行定量分析。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下,探討不同數(shù)學(xué)模型對實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果的影響。該方法具有較高的靈敏度、選擇性和重現(xiàn)性,手機(jī)測試盒攜帶方便,易于實(shí)現(xiàn)快速現(xiàn)場測定需求。

    關(guān)鍵詞:肌氨酸? 手機(jī)? RGB? 比色法

    1 引言

    氨基酸作為生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位,是構(gòu)成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì),具有各種功能性側(cè)鏈基團(tuán)的小分子,由于其結(jié)構(gòu),決定了氨基酸在生理過程中作用的多樣性。因此,采用新型方法測定氨基酸的含量在人體健康、疾病診斷和治療方面顯得尤為重要。肌氨酸,簡稱肌酐,作為氨基酸的一種,是反映腎小球?yàn)V過功能的指標(biāo)之一,頗受臨床醫(yī)生重視。本研究的目的是開發(fā)一種快速、簡單、靈敏、實(shí)時(shí)檢測肌氨酸的方法。

    基于數(shù)字圖像比色分析的原理是通過拍攝裝置獲得待測物的圖像信息,將獲得的圖像信息基于圖像處理軟件處理,后獲得待測物的色彩參數(shù)值,建立色彩參數(shù)值與待測物濃度的定量關(guān)系。常用的拍攝裝置有網(wǎng)頁攝像頭、數(shù)碼相機(jī)、手機(jī)等。本研究采用自行設(shè)計(jì)的密閉手機(jī)測試盒,搭載安卓手機(jī)軟件Color Grab 拍攝顯色后的肌氨酸溶液,提取色彩參數(shù)值,然后通過Excel 等軟件處理,建立與肌氨酸濃度的定量關(guān)系。

    2 材料與方法

    2.1 儀器和試劑

    2.1.1 試劑

    氧化石墨烯(分析純,北京材料有限公司),1,2-萘醌-4-磺酸鈉鹽(分析純,阿拉丁化學(xué)試劑公司),肌氨酸(分析純,阿拉丁化學(xué)試劑公司),氫氧化鈉(分析純,天津市凱通化學(xué)試劑有限公司),硼酸(分析純,天津市凱通化學(xué)試劑有限公司),實(shí)驗(yàn)室用水為二次蒸餾水。

    2.1.2 儀器與設(shè)備

    智能手機(jī)華為暢玩 4X(型號 Che1-CL10;攝像頭像素:1300 萬),紫外可見分光光度計(jì)(U-T6新世紀(jì),北京普析通用儀器有限責(zé)任公司),pH酸度計(jì)(PHS-3C,北京分析儀器有限公司),加熱板(DB-1,上海電器有限公司),離心機(jī)(80-1,上海電器有限公司),超聲波清洗器(KH-500TDB,北京分析儀器有限公司),密閉測試盒(實(shí)驗(yàn)室自制),Color Grab軟件。

    2.2 實(shí)驗(yàn)方法

    將一定量的氧化石墨烯置于比色管中,在超聲器中超聲 5個(gè)小時(shí)。隨之加入一定體積的 1,2-萘醌-4-磺酸鈉工作液,稀釋至8 mL,將超聲好的氧化石墨烯加入其中,充分振蕩。隨后加入肌氨酸溶液和3.0 mL 2mol/L pH為10的氫氧化鈉-硼酸緩沖溶液,定容至15.0 mL,放置20 min,待顯色穩(wěn)定后進(jìn)行拍照取色(圖1)。手機(jī)取色軟件Color Grab 來獲取溶液顏色的不同的色彩參數(shù),在微軟 Excel 2007上進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 pH 的影響

    實(shí)驗(yàn)研究了pH從3.0-12.0之間對測定結(jié)果的影響,結(jié)果如圖2 所示。結(jié)果表明,色彩參數(shù)R值的變化很小,基本不變,而色彩參數(shù)G、B值在pH為10時(shí)達(dá)到最低值。因此,本研究采用pH值為10.0進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

    3.2 氧化石墨烯用量的影響

    實(shí)驗(yàn)研究了氧化石墨烯用量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明,色彩參數(shù)R值的變化很小,而當(dāng)用量達(dá)到20μg/mL 時(shí),色彩參數(shù)G、B值達(dá)到最低值。因此,在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中選取20μg/mL的氧化石墨烯用量。

    3.3 干擾氨基酸測定

    實(shí)驗(yàn)研究了谷氨酸,酪氨酸,苯丙氨酸、色氨酸、甘氨酸、天門冬氨酸、蘇氨酸對肌氨酸測定的干擾。在紫外可見光度法法中,結(jié)果顯示,只有與肌氨酸反應(yīng)在486nm處出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰,測定結(jié)果如表1所示。

    3.4 RGB色彩空間下不同數(shù)學(xué)模型對測定結(jié)果的影響

    在RGB顏色空間中,整理以下式1-7的數(shù)學(xué)模型,探討不同數(shù)學(xué)模型與肌氨酸濃度的定量關(guān)系,結(jié)果列于表2中。

    測定結(jié)果表明,Itotal、的線性范圍比IG、IB寬,最低檢出限也更低; 從斜率來看,IB的斜率絕對值比 IG大,反映出IB的靈敏度高。在去除試劑空白的影響,IG、IB的檢測范圍變寬,最低檢出限降低,而Itotal、的最低檢出限增大。AG、AB、Atotal三個(gè)數(shù)值比較得到,AG的檢測范圍最寬,最低檢出限低。綜合比較測定結(jié)果, Itotal、|IG-IGblank|、|IB-IBblank|、AG這幾種數(shù)學(xué)模型可以應(yīng)用于實(shí)際定量測定。

    4 結(jié)論

    基于肌氨酸與1,2-萘醌-4-磺酸鈉以及氧化石墨烯的顯色反應(yīng),本試驗(yàn)通過智能手機(jī)數(shù)字圖像比色分析,研究了肌氨酸的濃度與RGB色彩模式下建立的不同數(shù)學(xué)模型的定量關(guān)系。該方法便捷,設(shè)備裝置簡單、成本花費(fèi)較少,可以實(shí)現(xiàn)肌氨酸的實(shí)時(shí)監(jiān)測。

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    本文由重慶文理學(xué)院塔尖計(jì)劃項(xiàng)目(P2019HH07)資助

    作者簡介

    陳國榕,(1992年—),女、寧夏石嘴山人、助理實(shí)驗(yàn)師、主要從事數(shù)字圖像比色分析技術(shù)應(yīng)用。通訊作者:胡靖,E-mail:9986hujing@163.com。

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