三七總皂苷抑制缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞焦亡*

唐 標(biāo)， 唐文靜， 戴姿薇， 佘 旭， 鄧常清

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)院，長沙湖南410028）

腦缺血再灌注損傷作為缺血性腦卒中的重要環(huán)節(jié)，其損傷機(jī)制與線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激、興奮性毒性、凋亡、炎癥等多因素有關(guān)［1-2］。細(xì)胞焦亡（pyroptosis）作為一種炎癥相關(guān)的細(xì)胞死亡方式，參與了腦缺血再灌注中的炎癥反應(yīng)。當(dāng)細(xì)胞焦亡啟動(dòng)后，gasdermin D（GSDMD）作為細(xì)胞焦亡的執(zhí)行分子，其被活化后的GSDMD N 端片段（GSDMD N-terminal fragment，GSDMD-N）會(huì)形成聚合物并與細(xì)胞膜上的脂質(zhì)分子形成孔道，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹破裂，釋放大量促炎因子，加重炎癥反應(yīng)［3］。已有研究表明，腦缺血再灌注誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡，抑制細(xì)胞焦亡能減輕腦缺血再灌注損傷，細(xì)胞焦亡成為腦缺血再灌注損傷干預(yù)的重要靶點(diǎn)［4-6］。

三七是治療心腦血管疾病的名貴中藥，三七總皂苷（Panax notoginsengsaponins，PNS）是三七的主要有效成分，含多種單體皂苷，其制劑如血栓通注射液、血塞通注射液等在心腦血管疾病的防治中被廣泛應(yīng)用［7-8］。已有大量的研究揭示PNS及其有效成分具有抗炎、抗血栓、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管新生、減輕腦缺血損傷等多方面的作用，但是其對細(xì)胞焦亡的調(diào)控作用和機(jī)制還不明確［9-11］。因此，本研究采用缺氧缺糖/復(fù)氧復(fù)糖（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R）構(gòu)建體外腦缺血再灌注SH-SY5Y 細(xì)胞模型，觀察PNS對OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞焦亡的影響，探討PNS 對OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞焦亡的調(diào)控機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 細(xì)胞株 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y 購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。

1.2 藥物及主要試劑 PNS（中國成都曼斯特生物科技有限公司，批號(hào)MUST-14122912，純度≥98%）；高糖 DMEM 和無糖DMEM 培養(yǎng)液（Gibco）；CCK-8 試劑盒（大連美侖生物技術(shù)有限公司）；兔抗人caspase-1、caspase-4 和 GSDMD 單克隆抗體（Cell Signaling Technology）；鼠抗人β-actin 單克隆抗體（Sigma）；山羊抗兔II 抗和山羊抗鼠II 抗（Merck Millipore）；人白細(xì)胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）ELISA 檢測試劑盒、細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）細(xì)胞毒性檢測試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；人IL-18 ELISA 檢測試劑盒（上海嵐派生物科技有限公司）；兔抗人caspase-1 前體（procaspase-1）多克隆抗體和鼠抗人caspase-4前體（procaspase-4）單克隆抗體（Proteintech）。

1.3 主要儀器 CO2培養(yǎng)箱（長沙奇美儀器有限公司）；自動(dòng)酶標(biāo)儀（BioTek）；電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀和凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad）；缺氧培養(yǎng)氣室MC-101 和混合氣閥（Billups-Rothenberg）。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞用含10%胎牛血清和雙抗的高糖DMEM 培養(yǎng)液，放置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長狀況，待細(xì)胞匯合度為90%左右時(shí)，用0.25%的胰蛋白酶消化收集細(xì)胞并傳代，取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

2.2 SH-SY5Y 細(xì)胞OGD/R 模型的建立 參照文獻(xiàn)［12］，各組 OGD/R 預(yù)處理的細(xì)胞，以無糖 DMEM 培養(yǎng)液輕輕沖洗一遍，每孔加入37℃預(yù)熱的無糖DMEM 培養(yǎng)液，放入缺氧培養(yǎng)氣室中，持續(xù)通入95%N2和5% CO2的混合氣體，1.5 L/min，持續(xù)6 min，以保證缺氧培養(yǎng)氣室內(nèi)缺氧環(huán)境的穩(wěn)定和完全，通氣結(jié)束后，關(guān)閉缺氧培養(yǎng)氣室，放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h；OGD處理結(jié)束后，各組細(xì)胞換回高糖DMEM培養(yǎng)液，并于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，進(jìn)行復(fù)氧復(fù)糖24 h。

2.3 細(xì)胞活力檢測 取生長狀態(tài)良好、匯合度為90% 的 SH-SY5Y 細(xì)胞，接種于 96 孔板，每孔 1×104個(gè)細(xì)胞，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，用含10%胎牛血清的高糖DMEM 培養(yǎng)液培養(yǎng)4 h。待細(xì)胞貼壁后，棄去原培，加入無血清培養(yǎng)液，培養(yǎng)24 h。同步化后，再棄原液，加入含藥培養(yǎng)液100 μL（PNS濃度參照文獻(xiàn)選擇40、80、160、320、640 和1 280 mg/L［10-11］），同時(shí)設(shè)置不含藥物、含培養(yǎng)液和細(xì)胞的空白對照（control）組，干預(yù)24 h。24 h 之后棄去原培養(yǎng)液，加含10%CCK-8 的培養(yǎng)液100 μL，另設(shè)空白孔（不含細(xì)胞，只含10%CCK-8的培養(yǎng)液）。在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育1 h 后，用酶標(biāo)儀檢測其在450 nm 處的吸光度（absorbance，A）。實(shí)驗(yàn)每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔，重復(fù)3次。細(xì)胞相對活力（%）=（樣品平均A值-空白孔平均A值）/（空白對照組平均A值-空白孔平均A值）×100%。

另一實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對照組、OGD/R 處理組及PNS干預(yù)組，亦進(jìn)行細(xì)胞活力檢測。各組細(xì)胞經(jīng)接種培養(yǎng)、同步化后，空白對照組不做處理繼續(xù)正常培養(yǎng)，OGD/R 處理組及PNS 干預(yù)組進(jìn)行OGD 處理。OGD處理2 h后，OGD/R 處理組換以高糖DMEM 培養(yǎng)液進(jìn)行復(fù)氧復(fù)糖24 h；PNS 干預(yù)組換以含PNS（根據(jù)細(xì)胞活力檢測部分結(jié)果選擇無顯著細(xì)胞毒性的濃度:40、80、160和320 mg/L）的高糖DMEM 培養(yǎng)液進(jìn)行復(fù)氧復(fù)糖24 h。各組中任何一組的任何一次換液，空白對照組也均平行換液，以排除換液對細(xì)胞損傷的影響。復(fù)氧復(fù)糖結(jié)束后進(jìn)行CCK-8 實(shí)驗(yàn)，檢測方法和分析同上。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4 LDH 漏出率檢測 各組細(xì)胞接種于96 孔板中，試驗(yàn)設(shè)空白對照組、OGD/R 處理組及PNS 干預(yù)組，同時(shí)設(shè)空白孔（不接種細(xì)胞，只加培養(yǎng)液），空白對照組設(shè)6 個(gè)復(fù)孔，其他組每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，各組處理方式同前。處理結(jié)束后，選取空白對照組中的3個(gè)復(fù)孔加入10 μL LDH 釋放試劑，作為樣品細(xì)胞最大酶活性對照孔，其他組每孔加入10 μL 培養(yǎng)液，繼續(xù)于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h后，將細(xì)胞培養(yǎng)板用多孔板離心機(jī)400×g離心5 min。分別取各孔的上清液60 μL，加入到新的96 孔板相應(yīng)孔中，各孔再分別加入60 μL LDH 檢測工作液，輕輕混勻后，室溫避光孵育30 min，在490 nm處測定A值。LDH漏出率（%）=（樣品平均A值-空白孔平均A值）/（細(xì)胞最大酶活性孔平均A值-空白孔平均A值）×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.5 Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide，PI）染色檢測 Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜并結(jié)合DNA 的藍(lán)色熒光染料，可通過完整的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核顯藍(lán)光；PI是一種可以嵌合到雙鏈DNA 和RNA 的堿基對中并與之結(jié)合的熒光染料，無堿基特異性，僅能通過受損的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核顯紅光。各組細(xì)胞接種于24 孔板，每孔1×105個(gè)細(xì)胞，分組和處理同前。處理后各孔加入5 μL Hoechst 33342 染色液和5 μL PI染色液，混勻，于4℃染色20 min，熒光顯微鏡下觀察，隨機(jī)選取3 個(gè)非重疊的視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中的細(xì)胞總數(shù)及紅色熒光細(xì)胞數(shù)，參照文獻(xiàn)計(jì)算PI 陽性細(xì)胞比例［13］。PI 陽性細(xì)胞比例（%）=紅色熒光細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.6 Western blot 檢測焦亡相關(guān)蛋白 各組細(xì)胞接種于6 孔板內(nèi)，每孔5×105個(gè)細(xì)胞，分組和處理同前。處理結(jié)束后去上清，用預(yù)冷PBS 洗1 次，每孔加含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的裂解液50 μL，冰上裂解30 min，邊裂解并用移液槍輕柔吹打，促進(jìn)細(xì)胞裂解。裂解后，4℃、2 400×g離心10 min，取出含有組織總蛋白的上清液。加上樣緩沖液后于沸水浴加熱10 min，以使蛋白充分變性。經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，將膜與 I 抗［GSDMD（1∶1 000）、caspase-1（1∶1 000）、caspase-4（1∶1 000）、procaspase-1（1∶500）、procaspase-4（1∶500）和β-actin（1∶5 000）抗體］置于4℃孵育過夜，用 TBST 緩沖液洗膜后，將II 抗（1∶10 000 稀釋）與膜于室溫?fù)u床上孵育60 min。ECL 顯色曝光，用Quantity One 灰度分析軟件進(jìn)行圖像定量分析，計(jì)算目的蛋白積分吸光度（integrated absorbance，IA）與內(nèi)參照蛋白IA的比值，以此表示蛋白相對含量。每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.7 ELISA 法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清 IL-1β 和 IL-18 含量 細(xì)胞接種于24 孔板，分組和處理同前。處理結(jié)束后，細(xì)胞培養(yǎng)上清100×g離心5 min，取上清，按照試劑盒說明書進(jìn)行檢測。試劑盒于室溫下平衡20 min后，將樣品或稀釋好的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品按照每孔100 μL 加入相應(yīng)孔中，每孔設(shè)置1 個(gè)復(fù)孔。同時(shí)設(shè)置本底校正孔，即空白孔，設(shè)置方法為該孔只加TMB溶液和終止液。用封板膜封住反應(yīng)孔，室溫孵育120 min后，洗板5次，且最后一次置于厚吸水紙上拍干；每孔加入生物素化抗體100 μL，封孔后室溫孵育60 min，洗板5 次；每孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素100 μL，室溫避光孵育20 min，洗板5次；每孔加入TMB顯色液100 μL，室溫避光孵育20 min；每孔加入終止液50 μL，混勻后立即在450 nm 處測定A值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和A值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過樣品A值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。服從正態(tài)分布的多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較方差齊時(shí)采用最小顯著差異（least significant difference，LSD）法，方差不齊時(shí)采用Dunnett法；若不服從正態(tài)分布，則采用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 PNS提高OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞活力

CCK-8 結(jié)果顯示，40、80、160 及320 mg/L 的PNS對細(xì)胞活力無明顯影響（P＞0.05），說明該濃度范圍的 PNS 無細(xì)胞毒性，640 及 1 280 mg/L 的 PNS 顯著降低細(xì)胞活力（P＜0.01），因此選擇≤320 mg/L 的濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；此外，OGD/R處理后的SH-SY5Y細(xì)胞活力顯著降低（P＜0.01），而80、160 及320 mg/L 的PNS顯著提高OGD/R 處理后的SH-SY5Y 細(xì)胞活力（P＜0.05或P＜0.01），40 mg/L的PNS對OGD/R處理后的SH-SY5Y 細(xì)胞活力無明顯影響（P＞0.05），因此選擇80、160及320 mg/L的PNS進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，見圖1。

2 PNS 降低 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞 LDH 漏出率

OGD/R 處理后的 SH-SY5Y 細(xì)胞 LDH 漏出率顯著升高（P＜0.01），而 80、160 及320 mg/L 的PNS 干預(yù)能顯著降低OGD/R 處理后的SH-SY5Y 細(xì)胞LDH 漏出率（P＜0.05或P＜0.01），見圖2。

Figure 1.The effect of PNS on the viability of SH-SY5Y cells.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs control group； #P＜0.05，##P＜0.01 vs OGD/R group.圖1 PNS對SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響

Figure 2.The effect of PNS on the LDH leakage of SH-SY5Y cells.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs control group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs OGD/R group.圖2 PNS對SH-SY5Y細(xì)胞LDH漏出率的影響

3 PNS 降低 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞 PI 染色陽性細(xì)胞比例

Hoechst 33342/PI 染色結(jié)果顯示，control 組少見紅色熒光，OGD/R 處理后的SH-SY5Y 細(xì)胞紅色熒光增加，PI 陽性細(xì)胞顯著增加（P＜0.01）；與OGD/R 組比較，PNS 組細(xì)胞紅色熒光減少，PI 陽性細(xì)胞顯著減少（P＜0.01），見圖3。

4 PNS降低OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞GSDMD和GSDMD-N蛋白表達(dá)

Western blot 結(jié)果顯示，與 control 組比較，OGD/R組細(xì)胞GSDMD 和GSDMD-N 蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.01）；與 OGD/R 組比較，PNS 組 GSDMD 和 GSDMDN蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.01），見圖4。

5 PNS 降低 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞 caspase-1和caspase-4蛋白表達(dá)

Western blot 結(jié)果顯示，與 control 組比較，OGD/R處理后的 SH-SY5Y 細(xì)胞 procaspase-1、procaspase-4、caspase-1 和caspase-4 蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.01）；與 OGD/R 組比較，PNS 組細(xì)胞 caspase-1 和 caspase-4蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01），但procaspase-1 和procaspase-4 蛋白的表達(dá)無顯著變化（P＞0.05），見圖5。

6 PNS抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞IL-1β和IL-18分泌

ELISA 結(jié)果顯示，與 control 組比較，OGD/R 組細(xì)胞培養(yǎng)上清中 IL-1β 和 IL-18 含量顯著增加（P＜0.01）；與 OGD/R 組比較，PNS 組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β和IL-18含量顯著降低（P＜0.05 或P＜0.01），見圖6。

討 論

OGD/R 是構(gòu)建腦缺血再灌注體外模型的常用方法［14-15］。本研究以 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞構(gòu)建腦缺血再灌注體外模型，探討PNS 對OGD/R 誘導(dǎo)的細(xì)胞焦亡的調(diào)控作用和機(jī)制，結(jié)果顯示，OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞活力明顯降低，而PNS 干預(yù)能顯著提高OGD/R 誘導(dǎo)SH-SY5Y 細(xì)胞活力。前期有大量體內(nèi)、體外研究探討PNS 在腦缺血再灌注中的保護(hù)作用，其結(jié)果均表明PNS 能減輕腦缺血再灌注損傷［9-11］。

細(xì)胞焦亡是一種炎癥相關(guān)的細(xì)胞死亡方式，介導(dǎo)了腦缺血再灌注損傷的發(fā)生和發(fā)展過程［16］，因此本研究從細(xì)胞焦亡途徑探討PNS 抗腦缺血再灌注損傷機(jī)制。細(xì)胞焦亡的主要特征為細(xì)胞膜穿孔，通透性變大，細(xì)胞焦亡執(zhí)行蛋白GSDMD 被活化［3］。本研究結(jié)果顯示OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞LDH 漏出率明顯升高，PI染色紅色熒光增強(qiáng)，PI陽性細(xì)胞比例明顯升高，表明細(xì)胞膜通透性增加，同時(shí)結(jié)果顯示OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞GSDMD 蛋白及其主要活化產(chǎn)物GSDMD-N 的表達(dá)明顯增加，這與已有研究結(jié)果一致［4］，再結(jié)合OGD/R 可誘導(dǎo)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞和 PC12 細(xì)胞焦亡的報(bào)道［5，17］，表明 OGD/R 可誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞焦亡。而PNS干預(yù)后LDH漏出率明顯降低，PI染色紅色熒光減弱，PI陽性細(xì)胞比例顯著降低，細(xì)胞GSDMD 蛋白及其主要活化產(chǎn)物GSDMD-N的表達(dá)明顯減少，結(jié)合抑制GSDMD 可以抑制細(xì)胞焦亡、減輕腦缺血再灌注損傷的報(bào)道［4-5］，提示PNS可能通過抑制細(xì)胞焦亡減輕OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞損傷。

Figure 3.The effect of PNS on SH-SY5Y cells with Hoechst 33342/PI staining.A:Hoechst 33342/PI staining in SH-SY5Y cells of each group（scale bar=50 μm）；B:the percentage of the PI positive cells to total cells.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs control group；##P＜0.01 vs OGD/R group.圖3 PNS對SH-SY5Y細(xì)胞Hoechst 33342/PI染色的影響

Figure 4.The effect of PNS on protein expression of GSDMD and GSDMD-N in SH-SY5Y cells.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs control group；##P＜0.01 vs OGD/R group.圖4 PNS對SH-SY5Y細(xì)胞GSDMD和GSDMD-N蛋白表達(dá)水平的影響

Figure 5.The effect of PNS on protein expression of caspase-1 and caspase-4 in SH-SY5Y cells.The protein levels of procaspase-1，caspase-1，procaspase-4 and caspase-4 in each group were detected by Western blot.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs control group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs OGD/R group.圖5 PNS對SH-SY5Y細(xì)胞caspase-1和caspase-4蛋白表達(dá)水平的影響

Figure 6.The effect of PNS on the levels of IL-1β（A）and IL-18（B）in the supernatants.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs control group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs OGD/R group.圖6 PNS對SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β和IL-18含量的影響

GSDMD 的 活 化 由 caspase-1/4/5/11 介 導(dǎo) ，caspase-4/5 為小鼠 caspase-11 在人體中的同源蛋白［18］。本研究進(jìn)一步觀察了PNS對OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞 caspase-1、caspase-4、procaspase-1 和 procaspase-4 表達(dá)的影響，結(jié)果顯示 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞 caspase-1、caspase-4、procaspase-1 和 procaspase-4的表達(dá)明顯增加，這與已有研究報(bào)道一致［19］，表明OGD/R 可誘導(dǎo) caspase-1 和 caspase-4 活化。而 PNS干預(yù)對procaspase-1 和procaspase-4 的表達(dá)無顯著影響，但顯著降低caspase-1 和caspase-4 的表達(dá)，提示PNS 干預(yù)能抑制OGD/R 誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞caspase-1 和caspase-4 活化。已有研究證實(shí)，在小鼠腦缺血再灌注中存在caspase-1 和caspase-11 的活化，抑制其活化可減輕腦缺血再灌注損傷［19-20］，提示PNS可能通過抑制caspase-1 和caspase-4 的活化而抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞焦亡。

此外，caspase-1 和caspase-11 的活化將剪切IL-1β 和 IL-18 的前體，生成 IL-1β 和 IL-18，細(xì)胞焦亡發(fā)生導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷，IL-1β和IL-18被釋放［3］。本研究結(jié)果顯示OGD/R 處理后的SH-SY5Y 細(xì)胞培養(yǎng)上清中 IL-1β 和 IL-18 含量顯著增加，而 PNS 干預(yù)后細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β 和IL-18 含量顯著降低，表明PNS 能抑制 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞 IL-1β 和 IL-18的釋放。

已有研究報(bào)道，OGD/R 能誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡［4］。本研究結(jié)果揭示OGD/R 誘導(dǎo)SH-SY5Y 細(xì)胞焦亡，并且PNS 能抑制 caspase-1、caspase-4 和 GSDMD 的剪切活化，從而抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞焦亡。

綜上所述，OGD/R 可誘導(dǎo)SH-SY5Y 細(xì)胞焦亡，PNS 能減輕 OGD/R 誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞損傷，其機(jī)制與抑制細(xì)胞焦亡以及IL-1β和IL-18的釋放有關(guān)。