滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫及抗應(yīng)激的影響

趙 敏 ， 席慶凱 ， 劉天驥 ， 李洪琴 ， 韓朋志 ， 孫春華 ， 燕 磊 *

（1.山東新希望六和集團(tuán)有限公司，山東青島266061；2.四川新希望六和科技創(chuàng)新有限公司，四川成都 610101）

滸苔（Enteromorpha）屬綠藻門（Chlorophyta）、石莼目（Ulvales）、石莼科（Ulvaceae），適應(yīng)能力和自然繁殖能力較強(qiáng)，是一種野生藻類資源的優(yōu)勢(shì)種，廣泛分布在我國(guó)東南沿海（王建偉等，2007）。近年來(lái)，由于全球氣候變暖及水體富營(yíng)養(yǎng)化，導(dǎo)致滸苔等海洋綠藻大量增殖，形成“綠潮”，給沿岸生態(tài)環(huán)境構(gòu)成極大危害（孫修濤等，2008）。滸苔營(yíng)養(yǎng)全面，膳食纖維、礦物質(zhì)及必需氨基酸含量豐富，且含有滸苔多糖、多肽、生物堿、皂苷、多酚、葉綠素等生物活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌及提高免疫力等多種生物學(xué)功能，是一種極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的海洋藻類食品及飼料資源（林英庭等，2015）。如何科學(xué)合理利用滸苔資源，增加其生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益已成為當(dāng)前亟待解決的重要任務(wù)。目前已有學(xué)者圍繞食品添加劑（朱蘭蘭等，2009）、藥用（孫文等，2011）、飼料（楊心愿，2018；劉開(kāi)永，2004）等方向開(kāi)展相關(guān)研究，而在水產(chǎn)飼料中添加適宜比例的滸苔粉，能夠促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料效率（盧青，2015）。然而目前鮮有關(guān)于滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦作用效果的研究，因此本研究將滸苔粉添加到飼料中飼喂對(duì)蝦，研究其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫及抗應(yīng)激的影響，以期為滸苔粉在對(duì)蝦飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 滸苔粉及飼料配方 本試驗(yàn)所用滸苔粉由青島海大生物集團(tuán)有限公司提供，其他試驗(yàn)原料由公司內(nèi)部提供。試驗(yàn)配制2種飼料，在對(duì)照組基礎(chǔ)上用2%滸苔粉替代米糠粕。試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 本試驗(yàn)在新希望飼料研究院即墨特水養(yǎng)殖基地進(jìn)行，試驗(yàn)對(duì)蝦選取初始體質(zhì)量為2.7 g體格壯、活力好、規(guī)格整齊、無(wú)明顯疾病的對(duì)蝦35000尾，隨機(jī)分成2個(gè)處理，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3500尾對(duì)蝦，每個(gè)養(yǎng)殖池面積為15 m2。分別投喂以上兩種飼料，即對(duì)照組、滸苔粉組飼料。試驗(yàn)周期為70 d。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）%

飼養(yǎng)管理參照劉君華（2017）的研究方法，每日投料 4 次（06:00、10:00、14:00、18:00），每周對(duì)投餌量進(jìn)行調(diào)整。水池內(nèi)配置充氧設(shè)施，并定時(shí)開(kāi)啟，以保證蝦池中溶解氧＞5 mg/L，鹽度為31‰自然海水，水溫23～32℃，pH 7.5～8.5，氨氮濃度低于1.0 mg/L，亞硝酸鹽濃度低于0.01 mg/L。

1.3 樣品收集 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)蝦禁食24 h，然后計(jì)算每個(gè)水泥池試驗(yàn)蝦的數(shù)量并稱取總重量，用于計(jì)算試驗(yàn)蝦存活率 （SR）、末重（FBW）、質(zhì)量增加率（WG）、特定生長(zhǎng)率（SGR）和飼料轉(zhuǎn)化率（FE）。生長(zhǎng)性能計(jì)算公式如下：

質(zhì)量增加率/%=（W2-W1）×100/W1；

特定生長(zhǎng)率/（%/d）=（LnW2-LnW1）/T×100；

飼料轉(zhuǎn)化率/%=F/（W2-W1）；

成活率/%=終末蝦尾數(shù)/初始蝦尾數(shù)×100。

式中：T為試驗(yàn)天數(shù)；W2為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各處理蝦的平均體質(zhì)量，g；W1為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各處理蝦的平均體質(zhì)量，g；F為試驗(yàn)期間所用飼料總重。

試驗(yàn)結(jié)束前2 d，用氯化銨配制不同氨氮濃度（2.0、1.7、1.4、1.1、0.8、0.5 mg/L）的水體 環(huán)境進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，確定該養(yǎng)殖條件下試驗(yàn)蝦在36 h對(duì)氨氮的半致死濃度。統(tǒng)一配制預(yù)試驗(yàn)得到半致死濃度的氨氮水體，每個(gè)重復(fù)取20尾蝦進(jìn)行12、24、36、48 h的攻毒試驗(yàn)，并測(cè)定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)試驗(yàn)蝦的死亡率。

試驗(yàn)結(jié)束后，每池隨機(jī)選取6尾試驗(yàn)蝦取肝胰臟，并置于-80℃冰箱保存，用于分析胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。

1.4 樣品分析 將飼料樣品烘干 （105℃）至恒重，采用凱式定氮法 （VELP，UDK142 automatic distillation unit，意大利）測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量，索氏抽提法測(cè)定脂肪含量（SOX416，Gerhardt，瑞典），失重法測(cè)定灰分含量；肝胰臟樣品送至南京建成生物科技有限公司測(cè)定相關(guān)酶活性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，差異顯著水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能和飼料效率 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和飼料效率的影響如表2所示，其中滸苔粉組終末均重、質(zhì)量增加率、特定生長(zhǎng)率均高于對(duì)照組，但兩個(gè)試驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；滸苔粉組飼料轉(zhuǎn)化率和成活率較對(duì)照組提高109.7%和 36.4%（P＜0.05）。

表2 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和飼料效率的影響

2.2 消化酶活性指標(biāo) 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化酶活性的影響如表3所示，添加滸苔粉有提高胰蛋白酶活性的趨勢(shì)（P=0.057）；滸苔粉組脂肪酶和淀粉酶活性較對(duì)照組提高47.1%和26.5%（P＜ 0.05）。

表3 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化酶活性的影響U/mg prot

2.3 免疫酶活性指標(biāo) 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫酶活性的影響如表4所示，滸苔粉組超氧化物歧化酶活性較對(duì)照組提高31.9%（P＜0.05）；滸苔粉組酚氧化酶活性高于對(duì)照組，但兩個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫酶活性的影響

2.4 氨氮耐受性 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦氨氮耐受性的影響如表5所示，滸苔粉組12 h死亡率、36 h死亡率及48 h死亡率低于對(duì)照組，但各試驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；滸苔粉組24 h死亡率較對(duì)照組降低58.8%（P＜0.05）。

表5 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦氨氮耐受性的影響%

3 討論

3.1 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能及飼料效率的影響 滸苔中含有豐富的鮮味氨基酸（徐大倫，2004）、甜菜堿（Li-jun 等，2002）及二甲基-β-丙酸噻亭（DM-SP）（王亮，2012）等對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有誘食作用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在飼料中添加一定量的滸苔粉可以提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能及飼料利用率（單俊偉等，2016；李永等，2012）。 Asino 等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加滸苔可以顯著提高大黃魚(yú) （Larimichthys crocea）的特定生長(zhǎng)率，而且大黃魚(yú)的存活率均達(dá)到97%以上。閆杰等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，添加滸苔粉可以顯著提高梭魚(yú)（Lizahaematocheila）的特定生長(zhǎng)率，降低飼料系數(shù)。另有研究表明，在飼料中添加一定量的滸苔粉可以提高大菱鲆（Scophthalmus maximus）的生長(zhǎng)性能、存活率及飼料效率（李紅艷等，2016；盧青等，2015）。本研究發(fā)現(xiàn)，滸苔粉組終末均重、質(zhì)量增加率及特定生長(zhǎng)率均高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05），而滸苔粉組飼料轉(zhuǎn)化率及成活率均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），這與王萬(wàn)騫等（2015）的研究結(jié)果一致。這可能是滸苔中多種誘食成分能夠很好的促進(jìn)對(duì)蝦攝食，而且滸苔本身營(yíng)養(yǎng)成分可以滿足對(duì)蝦的生長(zhǎng)需求，從而攝食滸苔粉飼料的對(duì)蝦生長(zhǎng)性能及飼料效率表現(xiàn)較優(yōu)，這與楊小強(qiáng)等（2000）發(fā)現(xiàn)的養(yǎng)殖在生有滸苔等海藻的室外水泥池對(duì)蝦的生長(zhǎng)速度明顯要快于養(yǎng)殖在室內(nèi)水池中的對(duì)蝦相符合；另外，滸苔對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)的促進(jìn)作用機(jī)制也可能是由滸苔內(nèi)含有的多糖類、脂類、萜類等多種生物活性物質(zhì)共同作用的結(jié)果（Cho，2010）。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，滸苔粉組對(duì)蝦胰蛋白酶活性高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05），而滸苔粉組脂肪酶和淀粉酶活性顯著高于對(duì)照組 （P＜0.05）。這與杜恒裔等（2019）研究發(fā)現(xiàn)的飼糧中添加0.2%滸苔多糖可顯著提高肉雞空腸內(nèi)容物糜蛋白酶、胰蛋白酶和脂肪酶活性一致。

3.2 滸苔粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫及抗應(yīng)激的影響眾所周知，免疫學(xué)指標(biāo)能夠反映機(jī)體的免疫功能和生理狀況，超氧化物歧化酶可反映機(jī)體清除多余自由基的能力，是一種重要的抗氧化酶；酚氧化酶活性與機(jī)體免疫能力呈正向相關(guān)，酚氧化酶活性高，機(jī)體抵抗細(xì)菌感染的能力強(qiáng) （Palmer等，2010；Mucklow 等，2004）。 研究表明，滸苔粉可以提高海參 （Apostichopus japonicas）（李猛等，2017）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）（單俊等，2016）、 花鱸 （Lateolabrax japonicus）（高瞻等，2015）等水產(chǎn)動(dòng)物的免疫能力。本研究發(fā)現(xiàn)，滸苔粉組超氧化物歧化酶活性顯著高于對(duì)照組 （P＜0.05），這與秦博等（2015）在海參中的研究結(jié)果一致。這可能是因?yàn)闈G苔粉中的滸苔多糖是一種廣譜的非特異性免疫刺激劑，提高了對(duì)蝦機(jī)體免疫能力。對(duì)蝦高密度養(yǎng)殖環(huán)境中，糞便、殘餌分解不充分均會(huì)導(dǎo)致水體氨氮濃度過(guò)高，進(jìn)而引起蝦體內(nèi)多種酶的活力異常、機(jī)體代謝功能失常、免疫力下降、獲得氧的能力降低等，從而影響對(duì)蝦生長(zhǎng)，最終誘發(fā)對(duì)蝦死亡（李永，2012）。已有研究表明，脊尾白蝦（梁俊平等，2012）、斑節(jié)對(duì)蝦（李永等，2012）、克氏原螯蝦（鐘君偉等2013）等蝦的死亡率都隨著氨氮濃度的升高或者中毒時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加。本研究發(fā)現(xiàn)，在氨氮應(yīng)激試驗(yàn)中，滸苔粉組死亡率低于對(duì)照組，推測(cè)可能是滸苔粉中豐富的滸苔多糖能夠有效地清除自由基，增加機(jī)體抗菌、抗病毒能力，進(jìn)而提高了機(jī)體免疫力，這與徐大論等（2006）的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，飼料中添加滸苔粉能改善凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、免疫及抗應(yīng)激能力。