不同水平的苜蓿皂苷對肉雞生長性能、腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)及免疫功能影響

杜 敏

（青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，青海西寧 812100）

近幾年，隨著我國畜牧業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展，肉用動物養(yǎng)殖數(shù)量呈現(xiàn)逐年升高，尤其是肉雞的養(yǎng)殖，成為畜牧業(yè)主要的組成結(jié)構(gòu)之一，但在肉雞的養(yǎng)殖過程中不合理的使用抗生素，導(dǎo)致肉雞腸道內(nèi)微生物菌群失衡及免疫功能降低，同時造成雞肉中的藥物殘留，成為人們生活中食品公共衛(wèi)生問題（胡斌，2019；付麗，2015）。苜蓿是我國重要的優(yōu)質(zhì)牧草之一，苜蓿中富含皂苷、類黃酮、葉蛋白、多糖和膳食纖維等多種生物活性成分，且營養(yǎng)豐富、消化率高，被稱為 “牧草之王”（孫娟娟，2019；李剛，2019）。苜蓿皂苷是苜蓿中重要的活性物質(zhì)之一，該物質(zhì)具調(diào)節(jié)脂類代謝、降低膽固醇、抗癌、抗氧化和提高機體免疫力等多種作用及功能 （陳培英，2015）。許多研究表明，苜蓿皂苷具有提高免疫力、抗氧化及促進生長作用，被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中（陳燕繪，2014）。本試驗在21日齡的白羽肉雞基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的苜蓿皂苷提取物，研究其對白羽肉雞生長性能、腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)及免疫功能影響，為進一步苜蓿皂苷提取物在臨床中推廣應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 苜蓿皂苷（純度≥65%）購自寧夏凱源生物技術(shù)有限公司；大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌鑒別培養(yǎng)基均購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司；禽流感H9抗原、新城疫抗原、AI、ND陽性血清均購自中國藥品食品監(jiān)察所。

1.2 基礎(chǔ)日糧配比 參照NRC（2008）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制基礎(chǔ)日糧，采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧飼喂，其日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗設(shè)計與管理 采用單因素設(shè)計試驗，試驗選擇體重相近的21日齡白羽肉雞360只隨機分成4組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)30只，1組為空白對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗2、3、4組在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%的苜蓿皂苷，試驗期為21 d。每個重復(fù)組單獨飼養(yǎng)，自由采食和飲水。按常規(guī)的飼養(yǎng)管理方式進行飼養(yǎng)與管理、疫苗免疫及環(huán)境消毒。

表1 日糧組成與營養(yǎng)水平

1.4 指標(biāo)測定及方法

1.4.1 生長性能 記錄每個重復(fù)組在試驗開始與結(jié)束的體重及試驗期間的采食料量和耗料量，測定生長性能指標(biāo)平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.4.2 腸道微生物菌群 參照王顯峰 （2019）報道方法，試驗結(jié)束前5 d，每個重復(fù)組采集新鮮糞便大約50 g，用鑒別培養(yǎng)基檢測糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌的數(shù)量，其中大腸桿菌在37℃下恒溫需氧培養(yǎng)12～24 h后計數(shù)，乳酸桿菌和雙歧桿菌37℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)24～48 h后計數(shù)，記錄每克糞便中菌群總數(shù)，用對數(shù)（lg cfu/g）表示。

1.4.3 免疫指標(biāo) 試驗結(jié)束，每個組隨機抽取10只試驗肉雞翅下靜脈采血，37℃孵育30 min，離心分離血清，-20℃保存。參照仇薪鑫（2019）報道方法，用血凝抑制試驗測定其試驗肉雞新城疫、禽流感抗體效價水平。

1.5 數(shù)據(jù)分析 試驗結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析，采用Duncan’s法進行差異顯著性分析，以P＜0.05表示差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 苜蓿皂苷對肉雞生長性能的影響 由表2可知，在試驗期間，試驗2、3、4組的ADFI均高于1組，差異性不顯著 （P＞0.05）；試驗3、4組的ADG較1組相比分別提高9.9%、14.2%，差異性顯著 （P＜0.05），試驗2組高于1組，差異性不顯著（P＞ 0.05），試驗 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著 （P＞0.05）；試驗3、4組的F/G較 1組相比分別降低17.1%、18.5%，差異性顯著 （P＜0.05），試驗2組低于1組，差異性不顯著（P＞0.05），試驗 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞ 0.05）。

表2 苜蓿皂苷對肉雞生長性能測定結(jié)果

2.2 苜蓿皂苷對肉雞腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響由表3可知，試驗期間，試驗3、4組糞便中大腸桿菌的含量較1組相比分別降低21.6%、22.5%，差異性顯著 （P＜0.05），試驗2組低于1組，差異性不顯著（P＞ 0.05），試驗 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞ 0.05）；試驗 3、4組糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌的含量較1組相比分別提高28.5%、38.1%、25.1%、25.4%，差異性顯著 （P＜ 0.05），試驗 2組高于 1 組，差異性不顯著（P＞ 0.05），試驗 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。

表3 苜蓿皂苷對肉雞腸道微生物結(jié)構(gòu)測定結(jié)果lg cfu/g

2.3 苜蓿皂苷對肉雞免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，試驗3、4組試驗肉雞血清中AI、ND抗體效價水平較1組相比分別提高25.7%、26.8%、30.1%、31.1%，差異性顯著 （P＜ 0.05），試驗 2組高于 1 組，差異性不顯著（P＜ 0.05），試驗 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。

表4 苜蓿皂苷對肉雞免疫指標(biāo)檢測結(jié)果log2

3 討論

苜蓿皂苷是由苜蓿中提取的生物活性物質(zhì)，該物質(zhì)具調(diào)節(jié)脂類代謝、提高機體免疫力、促進生長等多種作用及功能，被廣泛應(yīng)用（陳培英，2014）。本試驗研究表明，試驗2、3、4組的ADFI均高于1組（P＞0.05），試驗3、4組的ADG較1組相比分別提高9.9%、14.2%（P＜0.05），試驗3、4組的 F/G較 1組相比分別降低 17.1%、18.5%（P＜0.05），說明不同水平的苜蓿皂苷添加，可以有效提高白羽肉雞的平均日增重、降低料肉比。苜蓿皂苷為生物活性物質(zhì)，可以調(diào)節(jié)白羽肉雞腸道消化酶合成與分泌，促進白羽肉雞對飼料中營養(yǎng)物質(zhì)消化與吸收，提高其飼料中營養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)的利用率，因而提高平均日增重、降低料肉比，進而提高其生長性能。

相關(guān)研究表明，動物腸道菌群主要包含多種致病菌和非致病菌群，大腸桿菌是存在動物腸道中的正常菌群，當(dāng)外界條件改變時，腸道中大腸桿菌可以轉(zhuǎn)化為致病菌，破壞腸道菌群平衡，引起動物的腹瀉、敗血癥等，嚴重者可導(dǎo)致死亡，因此腸道中菌群結(jié)構(gòu)的平衡，對動物健康具有重要意義（王顯峰，2019）。本試驗研究表明，試驗3、4組糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌的含量較 1組相比分別提高 28.5%、38.1%、25.1%、25.4% （P＜0.05），試驗3、4組糞便中大腸桿菌的含量較1組相比分別降低21.6%、22.5% （P＜0.05），說明不同水平的苜蓿皂苷添加，可以降低肉雞腸道內(nèi)大腸桿菌等有害微生物生長，提高乳酸菌和雙歧桿菌等益生菌的生長，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)平衡，維持白羽肉雞腸道健康。苜蓿皂苷調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的機理尚未明確，有待進一步研究。

禽流感（AI）、新城疫（ND）等病毒性疾病是危害養(yǎng)雞業(yè)主要傳染性疾病之一，AI、ND可以感染不同日齡的雞，其感染率和死亡率均較高，可造成巨大的經(jīng)濟損失，本病目前無有效的藥物可以預(yù)防，主要通過疫苗進行預(yù)防，AI、ND抗體水平的變化是反映機體體液免疫的狀態(tài)指標(biāo)之一（仇薪鑫，2019；蔡艷，2018）。 本試驗結(jié)果顯示，試驗3、4組試驗肉雞血清中AI、ND抗體效價水平較1組相比分別提高 25.7%、26.8%、30.1%、31.1%（P＜0.05）。說明不同水平的苜蓿皂苷添加可以提高肉雞血清中AI、ND抗體效價水平，能有效的降低禽流感（AI）、新城疫病的發(fā)生。可能由于苜蓿皂苷添加可以激活肉雞體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，促進體內(nèi)的抗體分泌，提高禽流感（AI）、新城疫（ND）抗體水平，因而提高其機體的免疫機能。

4 結(jié)論

日糧中添加不同水平的苜蓿皂苷可以提高白羽肉雞的生長性能和免疫機能、改善其腸道菌群結(jié)構(gòu)，本試驗條件下，以添加1.5%為適宜。