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    降低LST培養(yǎng)基滅菌后內(nèi)置小倒管的氣泡殘留率

    2020-07-31 09:48曾佳艷鄧嘉慧陳美娟黃璐芳吳學(xué)妍
    食品界 2020年6期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)置氣泡排氣

    曾佳艷 鄧嘉慧 陳美娟 黃璐芳 吳學(xué)妍

    在食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789- 2016[1]大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法和致瀉大腸埃希氏菌檢測時,所用培養(yǎng)基乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)、煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)等這些需要用小倒管(杜氏管)考察產(chǎn)氣的培養(yǎng)基,經(jīng)過滅菌后,會有小氣泡未排空而留在小倒管內(nèi)的現(xiàn)象發(fā)生,導(dǎo)致培養(yǎng)基不能使用。考慮到重復(fù)滅菌會破壞培養(yǎng)基的有效成分,對于殘留氣泡的此類培養(yǎng)基只能廢棄,這樣的浪費(fèi)直接造成了檢測成本的增加,同時也增加了檢測人員的工作量。此外大腸菌群MPN計(jì)數(shù)法大多數(shù)都是多管發(fā)酵法,用的培養(yǎng)基量大,分裝的培養(yǎng)基管數(shù)較多,滅菌后小倒管里的氣泡排不盡,不能實(shí)現(xiàn)完全滅菌[2],會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。高壓蒸汽滅菌是常用的重要滅菌法,使用該法進(jìn)行滅菌時需要排出滅菌器中的冷空氣,然后維持一定壓力達(dá)預(yù)定時間,才能保證滅菌成功[3]。在滅菌過程中,最大限度地排除冷空氣,才能更好地保證滅菌效果。本文從排氣方面因素結(jié)合其他影響LST培養(yǎng)基滅菌后內(nèi)置小倒管的氣泡殘留率的因素作出分析,找出安全有效的方法降低內(nèi)置小倒管的氣泡殘留率,達(dá)到節(jié)約檢測成本、減少人員工作量、保證結(jié)果準(zhǔn)確性的目的。

    1. 儀器與試劑

    1.1 儀器與材料

    LX-B75L型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器(合肥華泰醫(yī)療設(shè)備有限公司);BT-300EA蠕動泵(重慶杰恒蠕動泵有限公司)。

    1.2 試藥與試劑

    月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)(北京三藥生物科技公司);實(shí)驗(yàn)用水(二級水)。

    1.3 培養(yǎng)基配制和滅菌

    取本品35.6g,加1L蒸餾水,加熱溶解,分裝于有倒管的試管中,每管10ml,雙料稱樣量加倍。121℃高壓滅菌15min。

    2. 結(jié)果與討論

    2.1 滅菌鍋的影響

    為了考察不同滅菌鍋的性能是否對結(jié)果有影響,通過對兩個相同型號的1號鍋和2號鍋進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對比,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者之間并沒有很大的差異,說明同型號的不同滅菌鍋的性能相對穩(wěn)定,對結(jié)果無影響。

    2.2 倒管口徑大小的影響

    在分裝培養(yǎng)基時,盡量避免內(nèi)置的小倒管內(nèi)有氣泡。在加熱加壓的滅菌過程中,液體培養(yǎng)基沸騰會帶動內(nèi)置小倒管浮動。在同一立式壓力蒸汽滅菌鍋中,分裝培養(yǎng)基放入同數(shù)量的小倒管(管口直徑5.82mm)和大倒管(管口直徑6.80mm)進(jìn)行滅菌,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者之間無明顯差異。

    2.3 排氣壓力的影響

    本實(shí)驗(yàn)的滅菌條件為:121℃高壓滅菌15min,滅菌過程當(dāng)鍋內(nèi)溫度到達(dá)100℃時有冷空氣排出,關(guān)閉放氣閥,升溫、升壓至0.05MPa,人工排氣10min,重復(fù)兩次,升溫升壓滅菌。在其它條件不變的情況下,考察分別在0.03MPa、0.05MPa和0.08MPa壓力排氣對小倒管的氣泡殘留率的影響(見圖1),結(jié)果顯示:隨著排氣壓力的增加,小倒管的氣泡殘留率明顯降低。

    2.4 排氣時間的影響

    在人工排氣壓力為0.05MPa,排氣次數(shù)2次的條件下,考察不同的排氣時間5min、10min、15min對小倒管的氣泡殘留率的影響(見圖2),因排氣時間20min過長,會導(dǎo)致滅菌鍋水位不夠而停止滅菌,故不考慮。結(jié)果顯示:隨著排氣時間的增加,小倒管的氣泡殘留率明顯降低,15min較10min降低了超過了50%。故在此條件下,選擇排氣時間15min,可獲得比較滿意的結(jié)果。

    2.5 排氣次數(shù)的影響

    在人工排氣壓力為0.05MPa,排氣時間10min的條件下,考察不同的排氣次數(shù)1次、2次對小倒管的氣泡殘留率的影響(見圖3),由于排氣3次會導(dǎo)致滅菌鍋水位不夠而停止滅菌,故不考慮。結(jié)果顯示:隨著排氣次數(shù)的增加,小倒管的氣泡殘留率也相應(yīng)降低。

    2.6 滅菌條件優(yōu)化

    通過對以上五個方面因素的探討和分析,發(fā)現(xiàn)排氣的壓力、時間和次數(shù)對降低LST培養(yǎng)基滅菌后內(nèi)置小倒管的氣泡殘留率有顯著的影響,因此對滅菌條件進(jìn)行優(yōu)化。考察分別在排氣壓力0.03MPa、0.05MPa和0.08MPa,人工排氣15min,排氣2次的滅菌條件下,對小倒管的氣泡殘留率的影響(見表1)。結(jié)果表明,三個排氣壓力之間無明顯差異。在確定了人工排氣15min,排氣2次的條件下,排氣壓力的選擇對于降低小倒管的氣泡殘留率的作用較小??紤]到滅菌鍋的壓力與安全問題,最終選擇排氣壓力0.03MPa,人工排氣15min,排氣2次的滅菌排氣方案。

    采用以上確認(rèn)的滅菌排氣方案,進(jìn)行了20天的實(shí)驗(yàn)(見圖1),結(jié)果顯示:LST培養(yǎng)基滅菌后內(nèi)置小倒管的氣泡殘留率控制在10%以內(nèi),已達(dá)到預(yù)期值。

    3. 結(jié)論

    本文從同型號不同滅菌鍋的性能、倒管口徑大小、排氣壓力、排氣時間和排氣次數(shù)等因素考慮,通過比對實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在單因素變化的條件下,找出排氣壓力、排氣時間和排氣次數(shù)為關(guān)鍵影響因素,然后優(yōu)化滅菌條件,考慮到滅菌鍋的壓力與安全問題,最終選擇排氣壓力0.03MPa,人工排氣15min,排氣2次的滅菌排氣方案。

    由于不同品牌不同型號的滅菌鍋性能不同,本文的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和優(yōu)化方法只限于L立式高壓滅菌鍋。由于考慮到每種培養(yǎng)基的配方不一樣,本文的優(yōu)化方法也只限于LST培養(yǎng)基,對于其它培養(yǎng)基的滅菌僅供參考。

    參考文獻(xiàn):

    [1]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB4789.1~40-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

    [2]黃啟紅、李光宏等。淺談影響內(nèi)置小倒管培養(yǎng)基滅菌的因素[R] .現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志.2012 (2):36-37.

    [3]唐欣昀、張明、趙海泉等.高壓蒸汽滅菌器中溫度和壓力的關(guān)系[Q] .微生物學(xué)通報.2003(3):14.

    作者簡介

    曾佳艷,中級職稱,主要研究方向?yàn)槭称匪幤肺⑸餀z測及其方法研究

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