保健食品中違禁藥物檢驗(yàn)技術(shù)研究進(jìn)展

陳東洋, 張 昊, 馮家力, 曾棟

(湖南省疾病預(yù)防控制中心, 湖南 長(zhǎng)沙 410005)

保健食品是具有特定保健功能,適用于特定人群食用的食品,具有調(diào)節(jié)人體功能的作用。當(dāng)前,在我國(guó)保健食品的申報(bào)功能有減肥、輔助降血糖、緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力、改善睡眠、輔助降血壓和營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑等28項(xiàng)。隨著生活水平的提高和老齡化社會(huì)的到來(lái),消費(fèi)者日益注重自身保健,對(duì)保健食品的消費(fèi)也越來(lái)越大。但當(dāng)前我國(guó)保健食品市場(chǎng)制售假冒偽劣產(chǎn)品、虛假夸大宣傳保健品功效和欺詐式出售產(chǎn)品現(xiàn)象屢屢發(fā)生。尤其有生產(chǎn)企業(yè)受利益驅(qū)使,在保健食品中非法添加違禁藥物,給消費(fèi)者身體健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅,極大影響保健食品產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[1]。對(duì)保健食品中違禁藥物進(jìn)行有效監(jiān)管,建立高效、可靠的保健食品中違禁藥物檢測(cè)方法已成為行業(yè)亟待解決的焦點(diǎn)問(wèn)題。本文梳理了國(guó)內(nèi)外保健食品中違禁藥物的使用現(xiàn)狀及檢測(cè)方法研究進(jìn)展,為保健食品安全評(píng)價(jià)技術(shù)發(fā)展方向提供參考。

1 保健食品違禁藥物非法添加概況

目前在我國(guó)涉及增強(qiáng)免疫力、緩解體力疲勞、輔助降血壓、輔助降血脂和減肥類保健食品非法添加現(xiàn)象最為突出[2]。孫鑫貴等[3]在國(guó)家衛(wèi)生監(jiān)督抽檢中發(fā)現(xiàn)減肥、緩解體力疲勞和輔助降血脂類保健食品中違禁藥物的總檢出率達(dá)到14.5%,在24個(gè)陽(yáng)性樣品中,聯(lián)合使用違禁藥物的樣品為11個(gè),占比達(dá)45.8%。而隨著消費(fèi)人群的增大,其他類別如輔助改善記憶類、改善生長(zhǎng)發(fā)育類、改善營(yíng)養(yǎng)性貧血類、美容養(yǎng)顏類等保健食品也受到越來(lái)越多消費(fèi)者的青睞,違禁藥物非法添加也時(shí)有報(bào)道。這些情況引起了社會(huì)對(duì)保健食品中違禁藥物的極大關(guān)注。將違禁藥物非法添加納入保健食品安全評(píng)價(jià)勢(shì)在必行。為此,國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局制定了《保健食品中可能非法添加的物質(zhì)名單(第一批)》,羅列了減肥、輔助降血糖、緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力、改善睡眠和輔助降血壓6類功能產(chǎn)品中可能非法添加的藥物名稱[4]。本文根據(jù)藥效學(xué)特性和國(guó)家食藥總局制定的名單將保健食品中可能非法添加的藥物列于表1。

表 1 (續(xù))

表 1 常見(jiàn)保健食品中可能非法添加的藥物

另一方面,根據(jù)近年的保健食品產(chǎn)品監(jiān)測(cè)情況及文獻(xiàn)資料來(lái)看,保健食品違禁藥物非法添加逐漸呈現(xiàn)新的特點(diǎn):(1)保健食品非法添加的藥物化學(xué)成分越來(lái)越復(fù)雜,主要包括處方藥、已退市藥物、現(xiàn)有藥物結(jié)構(gòu)類似物、尚未批準(zhǔn)的新型藥物和先導(dǎo)化合物等。尤其是新型藥物和通過(guò)對(duì)現(xiàn)有藥物結(jié)構(gòu)進(jìn)行微小修飾獲得的結(jié)構(gòu)類似物給非法添加的鑒定帶來(lái)極大困難;(2)添加方式從過(guò)去單一組分大劑量加入轉(zhuǎn)變?yōu)橐活惤M分或多類組分小劑量復(fù)合添加。因此建立和完善多組分非法添加的檢測(cè)方法已成行業(yè)的熱點(diǎn);(3)原料中帶入的非法添加。很多產(chǎn)品使用的原料是從專門從事提取物生產(chǎn)的企業(yè)購(gòu)買后直接用于保健食品的,對(duì)提取物的生產(chǎn)環(huán)境、加工工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚缺乏控制規(guī)范,存在一定的安全隱患,對(duì)原料的質(zhì)量亟待關(guān)注。但國(guó)內(nèi)保健食品違禁藥物非法添加的檢測(cè)方法研制起步較晚,主要是對(duì)少數(shù)在監(jiān)測(cè)范圍內(nèi)的藥物進(jìn)行方法建立,對(duì)新藥物、藥物結(jié)構(gòu)類似物的定性定量仍較為薄弱。大部分檢測(cè)方法直接借鑒藥典、食品的方法,而保健食品基質(zhì)復(fù)雜,干擾多,方法專屬性強(qiáng),這些已成為保健食品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的阻礙。

2 保健食品中違禁藥物分析技術(shù)

近年來(lái),國(guó)內(nèi)外研究者對(duì)保健食品中違禁藥物的測(cè)定做了大量的研究。檢測(cè)方法主要有薄層色譜法(TLC)、毛細(xì)管電泳法(CE)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(HPLC-MS)等。其中色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)綜合了色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏性和能夠提供化合物分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)勢(shì)獲得了越來(lái)越多的應(yīng)用。而為了篩查新型藥物、先導(dǎo)化合物和藥物結(jié)構(gòu)類似物等非法添加,結(jié)構(gòu)分析設(shè)備如紅外光譜(IR)、核磁共振(NMR)、拉曼光譜、高分辨質(zhì)譜(HRMS)等紛紛被引入用于新物質(zhì)的鑒定,尤其是LC-HRMS技術(shù)獲得越來(lái)越多的重視。HRMS能進(jìn)行相對(duì)分子質(zhì)量的精確測(cè)定,且能提供多級(jí)質(zhì)譜碎片離子信息,通過(guò)精確質(zhì)量數(shù)的檢索匹配及多級(jí)特征碎片離子確證,為未知化合物的篩查提供可能。

2.1 減肥類保健食品

減肥類保健食品是非法添加較為嚴(yán)重的類別。早期添加的藥物主要為食欲抑制劑[5]和瀉藥,本課題組[6]針對(duì)早期應(yīng)用的紫外法和間接碘量法難以準(zhǔn)確測(cè)定含復(fù)雜基質(zhì)保健食品中痕量酚酞的不足,通過(guò)優(yōu)化檢測(cè)波長(zhǎng)、顯色液和pH,建立準(zhǔn)確、靈敏的比色分析方法,并在市場(chǎng)抽查的20個(gè)減肥類保健食品中檢出含有酚酞樣品2個(gè);Gilard等[7]通過(guò)LC、NMR、MS和IR技術(shù)從購(gòu)自中國(guó)的減肥藥中篩查出了羅卡西林。此外,輔助性治療藥如能量消耗劑、吸收阻滯劑、利尿劑、雙胍類降糖藥等也紛紛被檢出[8]。本課題組[9,10]通過(guò)優(yōu)化色譜條件和質(zhì)譜條件,解析違禁藥物的分子斷裂方式,建立了靈敏、準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)的LC-MS/MS和GC-MS測(cè)定減肥類保健食品中西布曲明、芬氟拉明、馬吲哚和酚酞等違禁藥物,發(fā)現(xiàn)有樣品存在混合加入違禁藥物的情況;郭常川等[11]建立了篩查保健食品非法添加的15種減肥類藥物的LC-Orbitrap HRMS法和TraceFinder篩查數(shù)據(jù)庫(kù)。檢測(cè)范圍涉及利尿劑、中樞興奮藥、食欲抑制劑、瀉藥等藥物,方法可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)、高精度定性定量。

為躲避監(jiān)管,違禁藥物添加劑量一般較低,對(duì)保健食品中違禁藥物進(jìn)行富集和純化十分必要。馬微等[12]針對(duì)瀉藥、能量消耗劑、吸收阻滯劑、利尿劑和雙胍類共20種違禁藥物建立了基質(zhì)分散固相萃取-HPLC-MS/MS,樣品用乙醇-丙酮(7∶3, v/v)超聲提取,經(jīng)N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷凈化,以T3柱分離,采用LC-MS/MS測(cè)定,方法分析速度快,為減肥類保健食品違禁添加提供高通量分析平臺(tái)。本課題組[13]通過(guò)C18小柱對(duì)保健食品中的馬吲哚進(jìn)行固相萃取,再進(jìn)行GC-MS分析,方法表明經(jīng)過(guò)固相萃取能有效去除雜質(zhì),建立的方法抗干擾能力強(qiáng),檢出限為0.02 mg/kg,回收率為94.2%～102%。Ki等[14]針對(duì)非法添加的痕量利尿劑,分別采用固相萃取法(親水親脂型(HLB)柱和混合型弱陰離子交換反相型(WAX)柱), QuEChERS法和pH控制-液液萃取法凈化待測(cè)物,建立了減肥類保健食品中35種磺胺類藥物的UPLC-Q-TOF-MS法。結(jié)果表明m/z77.965 0和79.981 2分別對(duì)應(yīng)[SO2N]-和[SO2NH2]-,是磺胺類藥物的常見(jiàn)離子,中性離子丟失碎片(HCl和SO2)也是該藥物常見(jiàn)的特征,通過(guò)提取常見(jiàn)離子峰和中性丟失掃描可快速鑒別磺胺類藥物;pH控制-液液萃取前處理能獲得較高的回收率(80.1%～108%)和較低的基質(zhì)效應(yīng),方法的檢出限為0.04～11.18 ng/g。

為應(yīng)對(duì)新藥物、藥物衍生物在減肥類保健食品中的添加,多種定性定量檢測(cè)設(shè)備的聯(lián)合使用已成為未來(lái)分析的趨勢(shì)。Yun等[15]通過(guò)LC-UV在減肥類保健食品中發(fā)現(xiàn)與氯化西布曲明特征光譜類似的未知物,經(jīng)HPLC-Q-TOF-MS確定該化合物分子式為C18H27Cl2N,進(jìn)一步通過(guò)紅外光譜儀和核磁共振儀設(shè)備進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析鑒別出西布曲明新的類似物。

隨著檢測(cè)任務(wù)的急劇增加,快速和高通量檢測(cè)技術(shù)逐漸受到檢測(cè)行業(yè)的重視。Chai課題組[16]將薄層色譜和拉曼色譜聯(lián)用對(duì)減肥類保健食品中4種麻黃堿類藥物進(jìn)行定性和定量測(cè)定,方法檢出限為0.01 mg/mL。測(cè)定結(jié)果與HPLC-Q-TOF-MS的測(cè)定結(jié)果吻合。此方法為現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)麻黃堿類非法添加提供可能。Song等[17]采用流動(dòng)注射MS/MS快速篩查減肥類保健食品中西布曲明、N-去甲基西布曲明、雙去甲基西布曲明和酚酞,方法檢出限為0.3～0.6 ng/mL,回收率為92%～95%, 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為7%～9%。通過(guò)此方法對(duì)70個(gè)保健食品樣品進(jìn)行篩查,發(fā)現(xiàn)11個(gè)樣品含有違禁藥物,經(jīng)LC-MS/MS確證,除一個(gè)樣品受基質(zhì)干擾結(jié)果有偏差外,其他結(jié)果一致。Mai等[18]通過(guò)便攜式毛細(xì)管電泳-非接觸式電導(dǎo)檢測(cè)法快速測(cè)定保健食品中4種安非他命類藥物。樣品經(jīng)甲醇超聲提取,稀釋進(jìn)樣。在優(yōu)化后的電泳條件下,4種待測(cè)物的檢出為10～500 μg/kg。實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果與GC-MS結(jié)果吻合,表明開發(fā)的方法能用于安非他命藥物的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

2.2 緩解體力疲勞及增強(qiáng)免疫力類保健食品

緩解體力疲勞類及增強(qiáng)免疫力類保健食品違禁藥物主要為西地那非、伐地那非等磷酸二酯酶-5抑制劑(PDE-5)[19], LC、GC-MS和LC-MS是其主要測(cè)定方法。林芳等[20]針對(duì)食藥局頒布的《保健食品中可能非法添加的物質(zhì)名單(第一批)》抗疲勞類及增強(qiáng)免疫力類保健食品中可能添加的藥物建立UPLC測(cè)定方法,方法回收率為90.1%～106.5%, RSD為0.7%～4.9%,檢出限為2～3 ng。方法通過(guò)藥物的特征光譜確證,無(wú)需前處理,簡(jiǎn)便、快捷,可作為抗疲勞類及增強(qiáng)免疫力類保健食品中違禁藥物的快速檢測(cè)方法。Marriort等[21]采用GC-MS/MS測(cè)定保健食品中西地那非及其衍生物(二甲基西地那非、蒙莫西地那非、硫代西地那非、硫代甲基西地那非和硫代蒙莫西地那非)。比較了電子離子化和化學(xué)離子化兩種電離方式對(duì)結(jié)果的影響,在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下11 min內(nèi)完成了分離和測(cè)定6種PDE-5,方法無(wú)需衍生化,前處理簡(jiǎn)單快速。結(jié)果表明采用化學(xué)電離方式能獲得較好的方法性能,方法檢出限為0.03～1.5 mg/kg,回收率為83.4%～108.8%。季申等[22]采用UPLC-Q-TOF-MS定性篩查保健食品中102種西地那非及其相關(guān)功效成分,方法通過(guò)甲醇超聲提取樣品,采用ESI源,Q-TOF-MS作檢測(cè)器,正離子模式檢測(cè),與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間、母離子和碎片離子精確相對(duì)分子質(zhì)量、元素組成進(jìn)行比對(duì),準(zhǔn)確定性,同時(shí)歸納了其中98種PDE-5質(zhì)譜碎片裂解規(guī)律,為可疑物的鑒定提供了參考。PDE-5極易通過(guò)化學(xué)修飾改變部分官能團(tuán)在不改變功能的前提下躲避監(jiān)管,給準(zhǔn)確測(cè)定帶來(lái)很大困難[23]。目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò)50種PDE-5[24],而且數(shù)目仍在增加,因此如何快速鑒定該類藥物極為關(guān)鍵。2012年,Jankovics等[25]在監(jiān)測(cè)保健食品中伐地那非時(shí)首次篩查出其衍生物羥基硫代伐地那非。在通過(guò)LC-UV-MS/MS進(jìn)行測(cè)定時(shí)獲得相鄰兩個(gè)色譜峰1和2。分別采用正離子和負(fù)離子模式掃描,測(cè)得1和2的相對(duì)分子質(zhì)量分別為504和520,進(jìn)一步進(jìn)行碎片分析,1和2表現(xiàn)出類似的碎片離子,通過(guò)與伐地那非碎片進(jìn)行比較,鑒定出1為羥基伐地那非,且推測(cè)2和1的區(qū)別僅為C=O鍵被C=S鍵取代,通過(guò)紫外光譜得知2相對(duì)1光譜出現(xiàn)紅移,2含有發(fā)色基團(tuán),一定程度證實(shí)了推測(cè)。進(jìn)一步通過(guò)1H和13C核磁共振進(jìn)行分析,在13C譜中1和2在咪唑并三嗪位置出現(xiàn)較大的差別,可證實(shí)為C=O鍵被C=S取代,這些同樣在HRMS和紅外光譜中得到證實(shí),因此2可確認(rèn)為羥基硫代伐地那非。同樣,Shin等[26]和Kim等[27]采用NMR和TOF-MS鑒別出了西地那非和他達(dá)那非的亞甲基衍生物蒙莫西地那非和蒙莫他達(dá)那非。這些結(jié)果為違禁藥物衍生物的鑒別提供了有益參考。

針對(duì)PDE-5衍生物多為未知物,很難購(gòu)得相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品,易造成漏檢、未檢出等假陰性結(jié)果的困境,采用LC-HRMS檢驗(yàn)技術(shù),通過(guò)建立譜庫(kù),進(jìn)行精確質(zhì)量數(shù)的檢索匹配及多級(jí)特征碎片離子確證,進(jìn)行無(wú)靶向篩查,可以節(jié)約大量的標(biāo)準(zhǔn)品。Damiano等[28]建立了UPLC-TOF-MS法測(cè)定保健食品中他達(dá)那非、伐地那非和西地那非,方法檢出限低至0.001 μg/mL,回收率為87.6%～105.7%, RSD為1.5%～13.2%,并在無(wú)對(duì)照品的情況下用TOF-MS法在樣品中成功鑒定出西地那非硫代和硫代二甲基衍生物;王美玲等[29]利用HPLC-離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜儀建立了保健食品中28種PDE-5測(cè)定方法,篩查檢出限為0.2～7.0 μg/L,回收率為31.0%～114.0%, RSD為2.5%～14.9%,通過(guò)譜庫(kù)檢索、分子式預(yù)測(cè)及多級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖鑒定,在不使用標(biāo)準(zhǔn)品的情況下能獲得準(zhǔn)確篩查結(jié)果。

2.3 改善睡眠類保健食品

隨著生活節(jié)奏的加快,生活壓力的增大,越來(lái)越多的人受到失眠的困擾,因此改善睡眠類的保健食品亦是非法添加的主要目標(biāo)之一。苯二氮卓類、巴比妥類等精神藥物具有鎮(zhèn)定催眠,安神抗焦慮的作用,常被非法添加至鎮(zhèn)靜安神的保健食品中。嚴(yán)愛(ài)花等[30]建立了保健食品中22種苯二氮卓類藥物同時(shí)測(cè)定的LC-MS/MS,通過(guò)內(nèi)標(biāo)法定量消除干擾物對(duì)離子化的影響,方法檢出限為0.008 5～0.062 μg/L,回收率為58.0%～116.5%, RSD為2.4%～12.2%。潘小紅等[31]通過(guò)系統(tǒng)比較不同的色譜柱、流動(dòng)相的種類及比例,獲得最佳的色譜條件,同時(shí)優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)對(duì)22種改善睡眠類違禁藥物進(jìn)行分析,利用TOF-MS給出待測(cè)物的精確相對(duì)分子質(zhì)量,有效排除假陽(yáng)性結(jié)果。

此外,同一類藥物往往具有相同的主核單元,因此通過(guò)解析其裂解規(guī)律,獲得通用碎片離子,可快速篩查違禁藥物。盧麗等[32]和董喆等[33]通過(guò)LC-離子阱質(zhì)譜法解析苯二氮卓類、巴比妥類等鎮(zhèn)靜劑質(zhì)譜裂解規(guī)律,建立二級(jí)質(zhì)譜圖譜庫(kù),實(shí)現(xiàn)對(duì)違禁藥物的快速定性篩查。Baek等[34]通過(guò)LC-ESI-TOF-MS鑒定保健食品中21種不同類型H1-抗組胺藥物(烴胺類、吩噻嗪類、哌嗪類等),闡述其碰撞誘導(dǎo)解離路徑,21種H1-抗組胺藥物解離方式基本一致,為H1-抗組胺藥物快速鑒定提供理論支持。

另一方面,現(xiàn)場(chǎng)快檢技術(shù)亦逐漸引起關(guān)注,李靜輝等[35]通過(guò)薄層色譜分離,拉曼光譜組分鑒別,快速篩查改善睡眠類保健食品中的三唑侖、艾司唑侖、氯硝西泮和奧沙西泮。方法抗干擾能力強(qiáng),基質(zhì)對(duì)待測(cè)物幾乎沒(méi)有干擾,4種化合物的檢出限為1～4 μg;葉雅真等[36]采用電噴霧-離子遷移譜快速篩查保健食品中的地西泮、咪達(dá)唑侖、硝西泮、阿普唑侖和巴比妥5種鎮(zhèn)定安神類藥物,采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法排除保健食品復(fù)雜基質(zhì)帶來(lái)的干擾,方法檢出限為0.20～8.0 mg/L,回收率為78.7%～113.8%, RSD小于10%。這些方法為鎮(zhèn)靜催眠違禁藥物的現(xiàn)場(chǎng)快速鑒定提供了技術(shù)支持。

2.4 輔助降“三高”類保健食品

高血壓、高血脂和高血糖為我國(guó)高發(fā)慢性疾病,易引發(fā)心腦血管疾病,嚴(yán)重危害患者健康,因此輔助降“三高”類保健食品深受消費(fèi)者的青睞。

根據(jù)藥效學(xué)特性及已篩查出的非法添加,目前輔助降血壓類保健食品存在的違禁藥物主要包括:利尿劑如吲達(dá)帕胺、氫氯噻嗪等;鈣拮抗劑如硝苯地平、尼莫地平等;腎上腺素受體阻斷劑如阿替洛爾、美托洛爾等;血管擴(kuò)充藥和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑等。孫夏榮等[37]建立HPLC-MS/MS測(cè)定保健食品中20種降壓類藥物,在30批保健食品中測(cè)出5批含有比索洛爾、氨氯地平、尼群地平和氫氯噻嗪。丁寶月等[38]通過(guò)UPLC-MS/MS快速測(cè)定降壓類保健食品中34種化學(xué)藥物。在5批輔助降血壓類保健食品中檢出4批添加了化學(xué)藥物,包括卡托普利、尼群地平、苯磺酸氨氯地平、氫氯噻嗪、馬來(lái)酸依那普利和硝苯地平。而輔助降血糖保健食品中常見(jiàn)違禁藥物主要包括磺脲類、格列奈類、雙胍類和噻唑烷二酮類,其中格列苯脲最為常見(jiàn),其次為鹽酸二甲雙胍和鹽酸苯乙雙胍,其他如格列美脲、格列齊特和羅格列酮也偶有報(bào)道[39]。吳楊等[40]和Fu等[41]在保健食品中均檢出格列苯脲。而在降血脂保健食品方面,他汀類藥物是目前最有效的降血脂藥物,是輔助降血脂類保健食品非法添加的首選。2018年,在《國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》中將煙酸、洛伐他汀、辛伐他汀列入日常監(jiān)督抽檢項(xiàng)目。同年,全國(guó)食品保健食品欺詐和虛假宣傳整治工作領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室將美伐他汀、洛伐他汀羥酸鈉鹽、去羥基洛伐他汀作為輔助降血脂食品抽檢風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)項(xiàng)目。姜樹銀等[42]將Q-Orbitrap高分辨質(zhì)譜法應(yīng)用于保健食品中煙酸、洛伐他汀和辛伐他汀的篩查、確證和定量,通過(guò)建立的方法在38批樣品中檢出2批陽(yáng)性樣品,非法添加均為洛伐他汀。李曉蕾等[43]檢測(cè)了20批保健食品,發(fā)現(xiàn)主要添加的藥物為煙酸和洛伐他汀。

綜上,測(cè)定輔助降“三高”類保健食品中違禁藥物的方法主要有LC和LC-MS/MS,尤其LC-HRMS在違禁藥物篩查方面的應(yīng)用越來(lái)越廣,一般采用一級(jí)質(zhì)譜快速篩查,二級(jí)和多級(jí)質(zhì)譜確證,從而對(duì)目標(biāo)物定性定量分析;同時(shí),通過(guò)解析待測(cè)物的裂解規(guī)律為含有同類母核的結(jié)構(gòu)改性物的初篩提供參考依據(jù)?，F(xiàn)將測(cè)定輔助降“三高”類保健食品中違禁藥物的典型檢測(cè)技術(shù)總結(jié)見(jiàn)表2。

2.5 美容養(yǎng)顏類保健食品

在美白、祛痤瘡、祛黃褐斑、抗皺等功能保健食品中,激素的非法添加最為人關(guān)注[53]。激素目前大體可分為4類:糖皮質(zhì)激素、孕激素、雄激素和雌激素。糖皮質(zhì)激素有消炎和免疫抑制作用,可快速消除炎癥及某些感染類疾病的治療,HPLC-MS是其主要測(cè)定手段。陳麗波課題組[54]建立了UPLC-MS/MS測(cè)定保健食品中非法添加的38種糖皮質(zhì)激素。采用電噴霧正離子掃描方式,多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式測(cè)定,通過(guò)分子離子峰、二級(jí)碎片離子峰和保留時(shí)間定性,外標(biāo)法定量。方法前處理簡(jiǎn)單(直接超聲提取),靈敏度高(方法檢出限為0.3～1.6 μg/L)。通過(guò)優(yōu)化色譜、質(zhì)譜條件實(shí)現(xiàn)了糖皮質(zhì)激素藥物的快速篩查和定量檢測(cè)。Mu等[55]建立了SPE-UPLC-MS/MS測(cè)定抗皺美白類保健食品中30種激素。樣品經(jīng)乙酸乙腈溶液或丙酮水溶液提取后,經(jīng)ENVI-Carb/NH2凈化,UPLC-MS/MS測(cè)定;同時(shí)為了降低基質(zhì)干擾,采用基質(zhì)匹配工作曲線。該法具有較高的靈敏度(0.03～2 μg/kg)和回收率(74.7%～124.1%)。張亞峰等[56]采用HLB固相萃取柱凈化樣品,通過(guò)大氣壓化學(xué)電離-三重四極桿質(zhì)譜測(cè)定保健食品中14種性激素藥物,方法檢出限為0.099 0～2.09 μg/kg,加標(biāo)回收率為65.8%～118.8%。

2.6 其他方面

目前,聯(lián)合用藥降低單一藥物含量以躲避監(jiān)測(cè)是保健食品非法添加的發(fā)展趨勢(shì),因此建立多類別組分同時(shí)測(cè)定的方法是十分重要的。Kang等[57]使用基層較常配備的UPLC測(cè)定保健食品中20種抗痛風(fēng)及骨質(zhì)疏松藥物,方法檢出限為0.12～1.50 μg/mL,回收率為84.2%～106.6%,RSD≤2.92%,經(jīng)HPLC-Q-TOF確證陽(yáng)性樣品,結(jié)果吻合,為基層實(shí)驗(yàn)室測(cè)定以上藥物提供了技術(shù)參考。Carvalho課題組[58]采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離,非接觸電導(dǎo)檢測(cè)器和紫外檢測(cè)器聯(lián)用測(cè)定減肥類和緩解體力類保健食品中利尿劑、減食欲藥物、瀉藥和抗抑郁藥共11種化合物。有效解決了某些化合物無(wú)紫外發(fā)色基團(tuán)的局限,同時(shí)避免采用昂貴的質(zhì)譜設(shè)備。11種待測(cè)物非接觸電導(dǎo)檢測(cè)器的檢出限為2.03～3.30 mg/L,紫外檢測(cè)器的檢出限為4.80～13.20 mg/L。李優(yōu)等[59]采用QuEChERS法凈化,LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定保健食品中減肥、安眠、降血糖、降血壓、消炎止痛和抗疲勞類藥物,通過(guò)優(yōu)化QuEChERS凈化劑組合及采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正,有效去除基質(zhì)干擾及消除離子抑制,方法檢出限為0.010～1 mg/kg,回收率為63.1～115.7%。Oh等[60]對(duì)保健食品中156種非法添加(包括58種性功能障礙藥物、49種類固醇、26種合成類固醇和23種抗組胺藥物)進(jìn)行了快速定性定量分析,針對(duì)普通質(zhì)譜在超多組分、同分異構(gòu)體、化學(xué)衍生物分離和辨別的不足,采用了UPLC-Q-TOF-MS通過(guò)提取共同離子色譜進(jìn)行定性,內(nèi)標(biāo)法定量。方法檢出限為0.02～16.04 ng/mL, RSD為0.16%～13.50%,回收率為81.6%～124.7%。

在檢測(cè)技術(shù)上,隨著檢測(cè)儀器的發(fā)展,一些新技術(shù)也在保健食品檢測(cè)中得以應(yīng)用。如離子遷移譜,其不需要真空系統(tǒng),且靈敏度很高,在小型化和微型化方面具有獨(dú)特之處,可以用于現(xiàn)場(chǎng)在線分析。Jiang等[61]采用離子遷移譜與電噴霧離子化方法快速檢測(cè)抗風(fēng)濕保健品中非甾體類抗炎藥物。待測(cè)物在3 min內(nèi)完成測(cè)定,樣品經(jīng)甲醇提取、過(guò)膜后進(jìn)樣分析,無(wú)需前處理,方法靈敏(檢出限低至0.06～0.33 μg/L)、穩(wěn)定(RSD為0.9～3.3%),能應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)快速鑒定對(duì)乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生、雙氯芬酸鈉和茚甲新5種抗炎性藥物。

除了非法添加外,保健食品原料的安全性也值得關(guān)注[62]。保健食品的原料來(lái)源廣,植物性、動(dòng)物性及礦物質(zhì)等皆可用于保健食品,而且目前缺乏嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),亦為保健食品安全添加了諸多風(fēng)險(xiǎn)。如螺旋藻類保健食品中微囊藻毒素的存在[63],以中藥等為原料的保健食品中抗生素的添加[64,65],原料可能存在的農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等。此外,保健食品接觸材料的安全也需要行業(yè)的關(guān)注,主要為不合格材料的應(yīng)用如不合格膠囊殼及生產(chǎn)企業(yè)將添加劑、藥物添加至膠囊中以躲避監(jiān)測(cè)或包裝材料有害物質(zhì)遷移等。

3 結(jié)論與展望

保健食品安全是制約保健食品行業(yè)可持續(xù)發(fā)展的核心因素,其中違禁藥物非法添加是消費(fèi)者關(guān)注的焦點(diǎn)。近年來(lái)保健食品違禁藥物非法添加呈現(xiàn)出新的特點(diǎn)給檢測(cè)技術(shù)提出更高的要求。但當(dāng)前國(guó)內(nèi)對(duì)保健食品違禁藥物檢測(cè)方法的研制主要集中在消費(fèi)較廣的減肥、增強(qiáng)免疫力、降血壓、降血糖、改善睡眠等類別上,其他功能保健食品的研究仍較為薄弱。隨著消費(fèi)人群的增加,其他功能保健食品非法添加的檢測(cè)技術(shù)需及時(shí)跟進(jìn)。其次,目前方法檢測(cè)項(xiàng)目范圍較窄,專屬性不夠,尤其是非靶向新藥物或藥物結(jié)構(gòu)類似物的定性篩查技術(shù)仍有待增強(qiáng)。傳統(tǒng)的LC、LC-MS和GC-MS難以滿足新物質(zhì)鑒定要求,需要NMR、IR、HRMS等結(jié)構(gòu)鑒別能力強(qiáng)的設(shè)備聯(lián)合應(yīng)用。這些都已成為保健食品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的阻礙。

因此,保健食品非法添加的檢測(cè)未來(lái)研究可能在以下幾個(gè)方面展開:(1)加強(qiáng)目前研究較為薄弱的其他類別保健食品違禁藥物的檢驗(yàn)技術(shù)能力,增加檢驗(yàn)指標(biāo)和檢驗(yàn)技術(shù)儲(chǔ)備。如近期報(bào)道的輔助改善記憶類的“聰明藥”、改善營(yíng)養(yǎng)性貧血類、改善皮膚類等保健食品的非法添加。(2)提高保健食品原料質(zhì)量控制檢測(cè)技術(shù)能力。以中藥及其提取物為原料是我國(guó)保健食品的特色,其可能存在的非法添加及農(nóng)藥殘留等的監(jiān)測(cè)是亟待解決的問(wèn)題;接觸材料、輔料的安全,食品和藥用兩用保健食品的獸藥殘留,甚至是抗生素的殘留都值得關(guān)注。(3)未知物的鑒定。包括新藥、藥物結(jié)構(gòu)改性物的鑒別。采用多分析設(shè)備的聯(lián)合使用,引入IR、NMR等解析化合物結(jié)構(gòu)的儀器有助于新的非法添加物的發(fā)現(xiàn),尤其LC-HRMS在添加藥物衍生物、未知藥物的鑒定上將有越來(lái)越重要的應(yīng)用。