芳香化酶對(duì)雞胚胎發(fā)育的影響

李首芝　何勇

摘 要：為了探討芳香化酶對(duì)雞胚胎發(fā)育的影響，設(shè)置試驗(yàn)組和對(duì)照組，在雞胚孵化到第5天時(shí)，將無精蛋和死胚蛋淘汰出孵化器，對(duì)試驗(yàn)組胚胎采用芳香化酶揮發(fā)滲透處理直到雛雞出殼。結(jié)果表明，芳香化酶處理可以加快胚胎發(fā)育，使小雞出殼時(shí)間提前;試驗(yàn)組胚胎死亡數(shù)增加，出殼率低于對(duì)照組，卡方分析，χ2=12.424，P（Sig.）=0.000<0.01，呈差異極顯著;從第19天開始出殼到第22天出殼終止，試驗(yàn)組和對(duì)照組雛雞的出殼死亡率差異不顯著（P>0.05）。

關(guān)鍵詞：芳香化酶;雞胚發(fā)育;出殼率;死亡率

中圖分類號(hào) S831.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2020）13-0074-03

芳香化酶廣泛存在于卵巢、肝臟和乳腺癌細(xì)胞中，主要催化睪酮轉(zhuǎn)化為雌二醇，催化雄烯二酮為雌酮。在非哺乳類脊椎動(dòng)物，雌性發(fā)育早于雄性，雌激素在雌性性別決定和分化中起著重要作用。用芳香化酶抑制劑或雌激素受體拮抗劑均可成功地誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)，這在鳥類、爬行類、部分兩棲類和魚類均得到了證明。隨著對(duì)芳香化酶研究的深入，人們?cè)絹碓揭庾R(shí)到芳香化酶具有遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出生殖方面的一般代謝作用[1]。研究發(fā)現(xiàn)，芳香化酶在加強(qiáng)糖、脂、骨代謝，卵泡生長等方面發(fā)揮著重要作用[1]。雞胚胎發(fā)育不僅受到種蛋品質(zhì)的影響，也受到孵化溫度、相對(duì)濕度、翻蛋頻率和涼蛋次數(shù)的影響。本試驗(yàn)在控制種蛋品質(zhì)、孵化溫度、相對(duì)濕度、翻蛋頻率和涼蛋次數(shù)等條件下，采用芳香化酶處理胚胎，旨在探討芳香化酶處理對(duì)雞胚胎發(fā)育的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 種蛋購于貴州省貴州大學(xué)種雞場，雞品種為貴州黃，種蛋大小、形狀、蛋殼厚度、色澤具有一致性。芳香化酶（50μL/瓶，上海博湖生物科技有限公司）;雙系統(tǒng)全自動(dòng)孵化機(jī)（DZ47-63，山東省德州市德城區(qū)召鵬孵化設(shè)備廠）;高錳酸鉀、甲醛等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 孵化前的準(zhǔn)備 將孵化器蛋盤用清水洗凈后放入孵化器內(nèi)，再用甲醛熏蒸消毒30min。種蛋先用35℃溫水清洗，去掉蛋殼上的雜質(zhì)，再用0.2%的高錳酸鉀水浸泡消毒0.5min左右，撿出種蛋用毛巾擦干水分，待入機(jī)孵化。

1.2.2 試驗(yàn)分組與種蛋孵化 試驗(yàn)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，試驗(yàn)組種蛋98個(gè)，對(duì)照組種蛋39個(gè)。試驗(yàn)組和對(duì)照組分別置于不同的孵化機(jī)中，孵化機(jī)放在同一實(shí)驗(yàn)室，外界環(huán)境相同，孵化機(jī)內(nèi)溫度、相對(duì)濕度、翻蛋頻率一致，孵化溫度和濕度設(shè)置見表1。孵化到第5天時(shí)，通過照蛋，將無精蛋和死胚蛋挑出，并將盛有芳香化酶的塑料瓶固定在試驗(yàn)組孵化器蛋盤中心位置，孵化過程中將瓶口打開，讓芳香化酶能從瓶內(nèi)揮發(fā)出來，彌散到孵化器內(nèi)，通過蛋殼氣孔緩慢滲入胚胎，直到胚胎孵化完成，雛雞出殼為止。孵化第19天和第20天，每天涼蛋2次，每次25min左右。雛雞出殼后立即轉(zhuǎn)移到36℃保溫箱中，幾個(gè)小時(shí)后，給予飲水，投喂少量雛雞飼料。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 從雛雞出殼的第1天開始記錄，記錄不同處理方式下雛雞出殼早晚，雛雞每天出殼數(shù)和雛雞出殼后的死亡數(shù)，將已破殼未出雛的弱雛判定為死胚，試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)雛雞出殼時(shí)間與出殼率的影響 從第19天開始雛雞出殼，出殼一直持續(xù)到第22天，對(duì)照組和試驗(yàn)組雛雞出殼率見表2。從表2可以看出，試驗(yàn)組出殼時(shí)間比對(duì)照組提前，孵化第19天，試驗(yàn)組出殼率為3.30%，對(duì)照組為0，孵化第20天，試驗(yàn)組出殼率為51.65%，對(duì)照組為35.14%，孵化第21天，試驗(yàn)組出殼率出現(xiàn)明顯降低，為3.30%，對(duì)照組出殼率達(dá)到最高48.65%，表現(xiàn)為試驗(yàn)組出殼時(shí)間早于對(duì)照組。從第19～22天，試驗(yàn)組總出殼率低于對(duì)照組，試驗(yàn)組為61.54%，對(duì)照組為95.59%。采用χ2檢驗(yàn)，比較總出殼率差異顯著性，結(jié)果見表3、表4。試驗(yàn)組98個(gè)種蛋，對(duì)照組39個(gè)種蛋，孵化第5天，通過照蛋，挑出無精蛋和死胚蛋，將試驗(yàn)組91個(gè)發(fā)育正常胚胎和對(duì)照組37發(fā)育正常胚胎繼續(xù)進(jìn)行孵化。從表3看出，試驗(yàn)組91個(gè)胚胎，出殼數(shù)56，對(duì)照組37個(gè)胚胎，出殼數(shù)35。從表4可以看出，df=1，χ2=12.424，P（Sig。）=0.000<0.01，試驗(yàn)組出殼率極顯著低于對(duì)照組。試驗(yàn)表明，芳香化酶對(duì)胚胎具有損傷致死作用。

2.2 對(duì)雛雞死亡率的影響 試驗(yàn)組和對(duì)照組從孵化第19～22天的雛雞死亡統(tǒng)計(jì)見表5。從表5可以看出，孵化第19天和第22天，試驗(yàn)組和對(duì)照組均未出現(xiàn)死亡，孵化第20天，試驗(yàn)組死亡率18.00%，對(duì)照組死亡率15.38%，孵化第21天，僅有對(duì)照組出現(xiàn)死亡。采用卡方分析第19～22天總死亡數(shù)，結(jié)果見表6、表7。從表7可以看出，χ2=0.505，P（Sig。）=0.478>0.05，試驗(yàn)組和對(duì)照組死亡率差異不顯著，表明芳香化酶處理可以增加胚胎死亡，但對(duì)小雞出殼后的死亡率不會(huì)造成影響。

3 討論

3.1 雞胚孵化時(shí)間 芳香化酶主要功能是催化睪酮轉(zhuǎn)化為雌二醇，催化雄烯二酮為雌酮。研究發(fā)現(xiàn)，芳香化酶在糖穩(wěn)態(tài)、脂質(zhì)平衡、腦功能、卵泡生長、骨代謝和排卵過程等方面均發(fā)揮著重要作用[1]。芳香化酶作為人體雌激素合成的關(guān)鍵酶，在人體的生長發(fā)育中也扮演著重要角色。先天性的芳香化酶缺乏綜合征，對(duì)后代將產(chǎn)生極大的不良影響[2-4]。試驗(yàn)組出殼時(shí)間比對(duì)照組提前，孵化第19天，試驗(yàn)組出殼率為3.30%，而對(duì)照組為0，孵化第20天，試驗(yàn)組出殼率為51.65%，而對(duì)照組僅有35.14%。這可能與芳香化酶促進(jìn)胚胎發(fā)育有關(guān)，試驗(yàn)組胚胎從第5天開始，由于芳香化酶從瓶中揮發(fā)出來之后與蛋殼接觸，通過蛋殼氣孔滲透到胚胎，提高了胚胎內(nèi)芳香化酶含量。芳香化酶含量的提高，可能加快了代謝速度，也有可能因?yàn)榇x加快，進(jìn)一步確保了胚胎內(nèi)部溫度的恒定，最終縮短了胚胎的發(fā)育時(shí)間。另一種假設(shè)是：芳香化酶作為一種對(duì)胚胎具有損傷性的外界環(huán)境因素，物種為了抵抗不利的外界環(huán)境，加快胚胎發(fā)育速度，確保物種繁衍生息。

3.2 雛雞出殼率 雞胚在孵化過程中的死亡，主要與種蛋品質(zhì)和孵化條件有關(guān)。本試驗(yàn)種蛋來源于貴州大學(xué)科研種雞場，雞群采食飼料相同，雞群飼養(yǎng)環(huán)境相同，種蛋保存時(shí)間、保存條件和運(yùn)輸方式相同，種蛋大小、形狀、蛋殼厚度、色澤具有一致性，可以基本排除種蛋之間的差異。孵化條件方面，試驗(yàn)組和對(duì)照組的孵化溫度相同、相對(duì)濕度相同，通風(fēng)換氣等措施也相同一致。為了減小種蛋為非受精蛋而影響出殼率，本試驗(yàn)孵化到第5天，通過照蛋，將無精蛋和死胚蛋已經(jīng)全部挑出?？ǚ椒治?，χ2=12.424，P（Sig.）=0.000<0.01，對(duì)照組出殼率極顯著高于試驗(yàn)組。說明從孵化第5天起，試驗(yàn)組和對(duì)照組胚胎死亡數(shù)不同，最終導(dǎo)致出殼率之間的差異。芳香化酶最廣為人知的是其在生殖、生殖系統(tǒng)疾病以及雌激素敏感性疾病中的作用。近年來隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)芳香化酶與糖代謝紊亂存在關(guān)聯(lián)。芳香化酶表達(dá)上調(diào)是代謝綜合征發(fā)病原因之一，其機(jī)制為芳香化酶的表達(dá)上調(diào)，使過量雌二醇與胰島素結(jié)合，導(dǎo)致胰島素下游信號(hào)傳導(dǎo)異常，從而導(dǎo)致代謝綜合征[5]。另一研究也證明，過量雌二醇會(huì)直接與胰島素和胰島素受體結(jié)合，干擾胰島素與胰島素受體結(jié)合，從而導(dǎo)致胰島素抵抗[6]。試驗(yàn)組胚胎死亡率高，很可能與芳香化酶改變了胚胎內(nèi)雌激素含量有關(guān)，胚胎發(fā)育后期，雌激素與胰島素結(jié)合，改變了胰島素的正常分泌，導(dǎo)致糖代謝綜合征，出現(xiàn)胚胎死亡。

3.3 雛雞死亡率 雛雞出殼后，將小雞從孵化機(jī)轉(zhuǎn)移到溫度為36℃的保溫箱內(nèi)，并給予適當(dāng)飼料和飲水，注意防止踩踏、溺水等情況造成死亡。通過統(tǒng)計(jì)，第19～22天，試驗(yàn)組雛雞的平均死亡率為18.00%，對(duì)照組雛雞的平均死亡率為18.95%。方卡分析，χ2=0.543，P（Sig。）=0.461>0.05，差異不顯著，說明芳香化酶對(duì)雛雞出殼后的存活率沒有影響，這可能與芳香化酶半衰期短，代謝速度快有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

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（責(zé)編：張宏民）