新型黃烷酮類芳香化酶抑制劑的合成及其活性研究

周雪亮，周 淵，陳天維，胡雯雯，孫榮泰

（徐州醫(yī)科大學(xué)，江蘇 徐州 221000）

芳香化酶CYP19是雌激素生物合成過程中的一個關(guān)鍵酶[1]，雌激素與多種常見的女性疾病（乳腺癌、卵巢癌等）的病理過程有著密切的聯(lián)系，抑制芳香化酶CYP19的活性可以抑制雌激素的生成，從而減少絕經(jīng)后婦女乳腺癌等疾病的發(fā)病率[2]。而以芳香化酶為靶標(biāo)的研究一直都是抑制劑研究的熱點，目前已有多個芳香化酶抑制劑進入臨床試驗階段或已上市[3]。

當(dāng)前，針對(-)-Pinostrobin衍生物的設(shè)計、合成及其生物活性研究目前仍是空白，構(gòu)效關(guān)系也一直尚未明確[4]。因此，本項目以合成先導(dǎo)化合物(-)-Pinostrobin為基本目標(biāo)，并對其A環(huán)，B環(huán)以及C環(huán)分別進行結(jié)構(gòu)修飾，采用分子對接的方法，利用簡單的原料，快速、簡便地合成一系列具有潛在抗芳香化酶CYP19活性的黃烷酮類化合物，合成得到的產(chǎn)物經(jīng)氫核磁共振譜等表征確認結(jié)構(gòu)，同時構(gòu)建可供活性篩選的化合物庫，為進一步研究其構(gòu)效關(guān)系，開發(fā)新型芳香化酶抑制劑奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器

反應(yīng)IKEA攪拌器中、溫控油浴下進行，薄層層析法（TLC）跟蹤檢測反應(yīng)進程。稱量樣品是用電子天平FA1204B進行稱量，化學(xué)反應(yīng)是用型號為MR Hei-Tec的磁力攪拌器完成的；TLC使用的GF2高效硅膠板及柱層析采用的硅膠（200-300目）均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；酶聯(lián)免疫法則是采用雌酮ELISA試劑盒直接檢測反應(yīng)體系中的雌酮濃度。

1.2 抗芳香化酶CYP19活性研究

實驗中采用人胎盤微粒體作為酶源，雄烯二酮作為底物，體外進行芳香化反應(yīng)，用酶聯(lián)免疫法(ELISA) 檢測生成的雌酮濃度。將體外反應(yīng)液加入96孔板中，20 μl／孔，加入一定濃度的黃烷酮類化合物后反應(yīng)30 min，用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為620 nm處測定每孔的光密度值，以阿那曲唑為陽性對照，并計算酶抑制率，作為化合物抑制活性的表征值。

2 結(jié) 果

2.1 黃烷酮類化合物反應(yīng)結(jié)果

2.2 抗芳香化酶CYP19活性研究結(jié)果

利用雌酮ELISA試劑盒直接檢測反應(yīng)體系中的雌酮濃度，用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為620 nm處測定每孔的光密度值，并計算相應(yīng)的黃烷酮類化合物酶抑制率。實驗在目標(biāo)化合物濃度為50 μmol/L的條件下進行，陽性對照為阿那曲唑，經(jīng)多次重復(fù)實驗及統(tǒng)計分析（n=3，P＜0.05），得到測試結(jié)果。實驗結(jié)果見表2。

表2 芳香化酶CYP19抑制活性結(jié)果（n=3，）

表2 芳香化酶CYP19抑制活性結(jié)果（n=3，）

編號 終濃度（μmol/L） 抑制率（%）1 50μmol/L 46.61±3.22 2 50μmol/L 47.35±4.21 3 50μmol/L 81.49±2.78 4 50μmol/L 86.45±3.92 5 50μmol/L 75.89±4.12 6 50μmol/L 85.21±3.91 7（阿那曲唑） 50μmol/L 95.68±2.59

3 討 論

黃烷酮類化合物可從自然界多種植物中提取分離得到，是一種具有“優(yōu)勢結(jié)構(gòu)”的物質(zhì)，(-)-Pinostrobin是其中的一種[5]，已有大量文獻表明，(-)-Pinostrobin具有多種生物活性作用，特別對芳香化酶CYP19有明顯的抑制作用[6]。

酶聯(lián)免疫活性測試表明，由(-)-Pinostrobin結(jié)構(gòu)衍生的黃烷酮類化合物對芳香化酶CYP19具有明顯的抑制作用，通過提高黃烷酮類化合物的濃度，酶抑制率顯著提高。當(dāng)終濃度為50 μmol/L時，化合物3、4、5、6酶抑制作用顯著提高，抑制率＞50%，其中化合物3、4、6酶抑制率＞80%，甚至接近陽性對照組，表明化合物3、4、6是具有潛在的藥物開發(fā)和研究價值的黃烷酮類化合物。

通過上述實驗，以先導(dǎo)化合物(-)-Pinostrobin為骨架衍生的黃烷酮類化合物簡單易得，反應(yīng)快速，產(chǎn)出率較高，結(jié)構(gòu)中含有A環(huán)、B環(huán)、C環(huán)三個活性環(huán)骨架，具有潛在抑制芳香化酶CYP19的活性作用。通過進一步生物活性篩選，對于抑制率＞80%的化合物，其進一步的構(gòu)效關(guān)系研究對開發(fā)新型芳香化酶抑制劑具有重要的價值和意義。