不同方法炮制當(dāng)歸化學(xué)成分分析

王素霞

（河南省許昌市中醫(yī)院門診中藥房，河南 許昌 461000）

當(dāng)歸性味溫、甘、辛，系傘形科植物，取其干燥根，去除水分后，藥用價(jià)值廣泛，具有活血調(diào)經(jīng)、抗炎、抗血栓、補(bǔ)血、潤(rùn)腸通便等功效［1］。當(dāng)歸主要化學(xué)成分為揮發(fā)油、有機(jī)酸、氨基酸、多糖及其他成分，中藥炮制可增強(qiáng)藥效，降低毒性、增加藥物利用率等。中藥炮制方法多樣，常見(jiàn)有生當(dāng)歸、酒浸炒當(dāng)歸、拌炒當(dāng)歸與當(dāng)歸炭，不同炮制方法影響藥性和化學(xué)成分。本研究分析不同炮制方法對(duì)當(dāng)歸化學(xué)成分的影響，報(bào)道如下。

1 材料與設(shè)備

原料。1kg當(dāng)歸均購(gòu)于本市大藥房，經(jīng)省中藥鑒定所專家鑒定為當(dāng)歸后，密封儲(chǔ)存。

儀器。1100 LC/DAD液相測(cè)譜儀［安捷倫科技有限公司，包括二極管陣列檢測(cè)器（DAD）、真空脫氣機(jī)、柱溫箱、恒溫自動(dòng)進(jìn)樣器、梯度泵和自帶化學(xué)工作站］，粉碎儀天津泰斯特儀器有限公司，梅特勒AG204電子稱，Milli-Q純水儀，OPTIMEL-80高速離心機(jī)（美國(guó)BECKMAN公司）。

試劑。阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)408508）購(gòu)自百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司，Z-藁本內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)110825）購(gòu)自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司。

2 炮制方法

將當(dāng)歸取出后分成4等份，分別采用如下方法進(jìn)行炮制。

生當(dāng)歸：取生當(dāng)歸的原材料，清除當(dāng)歸表面的雜質(zhì)，洗凈后晾曬，切成薄片狀，或制成飲片。

酒當(dāng)歸：將生當(dāng)歸洗凈后，按照生當(dāng)歸：黃酒=100∶10的比例攪拌均勻，直至黃酒被充分吸收，置于鍋內(nèi)炒制，加熱生當(dāng)歸至表面呈深黃色，取出后放涼。

土炒當(dāng)歸：取適量土粉（每100kg當(dāng)歸片加入30kg土粉），放入鍋內(nèi)微火加熱炒制，再倒入當(dāng)歸片一起炒制，直到當(dāng)歸片上粘滿細(xì)土粉（俗稱掛土）時(shí)，取出，抖去多余土粉，放置陰涼干燥處。

當(dāng)歸炭：將洗凈后的生當(dāng)歸，放入鍋中采用中火進(jìn)行炒制，炒至當(dāng)歸表面呈現(xiàn)微黑色，噴灑少量清水，待火星滅盡后取出，放涼晾干。

3 化學(xué)檢測(cè)方法

應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)不同炮制下當(dāng)歸的化學(xué)成分進(jìn)行測(cè)定，分別取適量阿魏酸對(duì)照品和藁本內(nèi)酯對(duì)照品于5ml的容量瓶中，加入30%甲醇，定容。精密稱取生當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸、酒當(dāng)歸以及當(dāng)歸炭粉末各0.2g，均加入70%甲醇溶液25ml。對(duì)各樣品進(jìn)行定量稱重后40min加熱回流處理，冷卻后再次稱定各樣品重量，加入濃度70%甲醇溶液用于補(bǔ)足缺少的樣品重量，混勻，采用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，色譜條件測(cè)定不同炮制方法下樣品中的阿魏酸和藁本內(nèi)酯的峰面積，按照線性回歸方程，依次計(jì)算阿魏酸、藁本內(nèi)酯的含量。采用水煮醇沉法分離提取當(dāng)歸中的多糖。根據(jù)《中國(guó)藥典》（2015版）［2］中的烘干法對(duì)不同炮制方法下的當(dāng)歸進(jìn)行水分含量進(jìn)行測(cè)定。

4 觀察指標(biāo)

依次測(cè)定生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸與當(dāng)歸炭等炮制樣本中阿魏酸、藁本內(nèi)酯、多糖、水分等化學(xué)成分的含量。測(cè)量不同炮制方法前后，當(dāng)歸質(zhì)量的變化情況。 計(jì)算每種炮制方法前后，當(dāng)歸質(zhì)量變化率。質(zhì)量變化率=（炮制前當(dāng)歸質(zhì)量-炮制后當(dāng)歸質(zhì)量）/炮制前當(dāng)歸質(zhì)量×100%。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6 結(jié) 果

6.1 不同炮制方法當(dāng)歸炮制樣品化學(xué)成分含量比較

不同炮制方法取得的當(dāng)歸炮制樣本中阿魏酸、藁本內(nèi)酯及多糖含量比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中生當(dāng)歸各主要成分均為最高，其中阿魏酸、藁本內(nèi)酯、多糖含量從高到低排序依次為生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸和當(dāng)歸炭，水分含量從高到低排序依次為生當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸、酒當(dāng)歸和當(dāng)歸炭，見(jiàn)表 1。

表1 不同炮制方法下當(dāng)歸炮制樣品化學(xué)成分含量比較 （%）

6.2 不同炮制方法當(dāng)歸炮制樣品質(zhì)量變化比較

除了生當(dāng)歸外，其他炮制方法炮制前后當(dāng)歸質(zhì)量及質(zhì)量變化率比較差異明顯（P＜0.05），酒當(dāng)歸炮制后當(dāng)歸質(zhì)量增加，土炒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭炮制后當(dāng)歸質(zhì)量減少，見(jiàn)表2。

表2 不同炮制方法下當(dāng)歸炮制樣品質(zhì)量變化比較

7 討 論

藥理研究表明，當(dāng)歸具有止血調(diào)經(jīng)、潤(rùn)腸、補(bǔ)血活血、抗血小板聚集、抗炎及清除自由基等功效［3］。當(dāng)歸成分為揮發(fā)油、有機(jī)酸、多糖、氨基酸和少量微量元素。其中揮發(fā)油以藁本內(nèi)酯等苯酞類化合物占多數(shù)，有機(jī)酸以阿魏酸為代表。研究表明，炮制前后不僅其化學(xué)成分的含量發(fā)生變化，其化學(xué)組成也發(fā)生改變［4］。中藥炮制的過(guò)程將對(duì)中藥的療效和有效成分產(chǎn)生直接影響［5］。

目前，提取和分離中藥化學(xué)成分的方法多種多樣，有機(jī)溶劑法、蒸餾法主要用于揮發(fā)油的分離和提取，其他還有薄層色譜法、硅膠柱色譜法［6］等。高效液相色譜法（HPLC）具有高壓、高效、高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于中藥成分的檢測(cè)。

當(dāng)歸中各主要成分有不同的作用。藁本內(nèi)酯作為其中揮發(fā)油的代表，能夠穩(wěn)定心率、抑制心肌細(xì)胞肥大、緩解血管痙攣、抗心律失常；有機(jī)酸中大多數(shù)為阿魏酸，具有抗血小板凝集、保護(hù)血管內(nèi)膜、清除自由基等功效；多糖能夠活血、提高人體免疫力，具有抗腫瘤的作用［7］。

研究結(jié)果顯示，不同炮制方法取得的當(dāng)歸炮制樣本中阿魏酸、藁本內(nèi)酯及多糖含量之前存在差異，其中生當(dāng)歸各主要成分均為最高，其中阿魏酸、藁本內(nèi)酯、多糖含量從高到低排序依次為生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸和當(dāng)歸炭。水分含量從高到低排序依次為生當(dāng)歸、土炒當(dāng)歸、酒當(dāng)歸和當(dāng)歸炭。說(shuō)明不同炮制方法能夠引起當(dāng)歸化學(xué)成分的變化，從而影響當(dāng)歸的藥性和治療效果。主要原因可能為土炒當(dāng)歸和當(dāng)歸炭都需高溫加熱、加速了藁本內(nèi)酯的揮發(fā)，阿魏酸穩(wěn)定性差、遇熱易分解，高溫環(huán)境進(jìn)一步加重了多糖的碳化損傷［8］，而酒當(dāng)歸能夠升高其中糖分的溶解度。

除了生當(dāng)歸外，其他炮制方法炮制前后當(dāng)歸質(zhì)量及質(zhì)量變化率比較差異明顯。酒當(dāng)歸炮制后當(dāng)歸質(zhì)量增加，土炒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭炮制后當(dāng)歸質(zhì)量減少，表明不同炮制方法能夠影響當(dāng)歸的質(zhì)量。當(dāng)歸的干燥根具有一定吸水性，在酒浸漬過(guò)后體積增加，一部分質(zhì)量來(lái)自于酒中大部分水的質(zhì)量。而土炒當(dāng)歸、當(dāng)歸炭炮制法主要以加熱的方式，使當(dāng)歸中的水分以蒸發(fā)的形式減少，從而炮制后當(dāng)歸質(zhì)量比炮制前減少。