二參顆粒對(duì)垂體后葉素誘導(dǎo)冠心病心肌缺血大鼠血液流變學(xué)及血脂的影響?

柴晶美，李 欣，杜 金，周麗雅

(長春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，長春 130117)

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病是全球范圍內(nèi)的一個(gè)重要公共衛(wèi)生問題[1]。目前，大多數(shù)冠心病患者均表現(xiàn)為脂質(zhì)代謝紊亂，血液中的脂質(zhì)以及糖類復(fù)合物沉積在動(dòng)脈內(nèi)膜上，這些脂質(zhì)沉積會(huì)引起平滑肌細(xì)胞的增生進(jìn)而導(dǎo)致動(dòng)脈狹窄，阻塞血液流動(dòng)導(dǎo)致心臟缺血[2]。從中醫(yī)病機(jī)角度解釋，痰瘀阻滯是導(dǎo)致人體血流變學(xué)及血脂代謝相關(guān)指標(biāo)改變的主要原因[3]。在前期研究中證實(shí)[4]，二參顆粒具有行氣活血之功效，可有效治療冠心病心肌缺血。本實(shí)驗(yàn)擬從調(diào)節(jié)血流變學(xué)及血脂方面多指標(biāo)闡明二參顆粒治療心肌缺血性冠心病的作用機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD雄性大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供(許可證號(hào)SCXK(遼)2015-0001)。本實(shí)驗(yàn)已通過長春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查。

1.2 藥品及試劑

二參顆粒組成：黨參25 g，丹參20 g，川芎15 g，降香10 g，五味子10 g，麥冬15 g，延胡索15 g，木香10 g，薤白15 g，由長春市肖永林內(nèi)科診所提供，本校溫病教研室主任周麗雅教授鑒定。按照一定工藝提取濃縮得1.62 g生藥/mL，由長春中醫(yī)藥大學(xué)藥物制劑研究室制備(醇提取用8倍于藥材量的濃度為70%乙醇提取3次，每次2 h。水煎煮用6倍于藥材量的水提取3次，每次2 h。然后將醇提取液旋蒸除去乙醇，水煎液濃縮至適當(dāng)體積，合并醇、水濃縮液，繼續(xù)濃縮至1.62 g生藥/mL)，放置于4 ℃冰箱冷藏備用。冠心生脈丸由心西華康藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字Z20043735)；垂體后葉注射液由寧波第二激素廠生產(chǎn)(獸藥字(2012)110254519)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；全自動(dòng)血液分析儀(希思美康)；紫外可見分光光度計(jì)；AEL200電子天平(日本島津)。

1.4 分組、造模及給藥[5]

60只SD健康雄性大鼠自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將60只SD健康雄性大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、二參顆粒高、中、低劑量組、冠心生脈丸對(duì)照組6組各10只。對(duì)模型組大鼠進(jìn)行高脂飲食喂養(yǎng)和腹腔注射垂體后葉素，建立大鼠冠心病心肌缺血模型。除正常組外，各組每天給予高脂飼料(2%膽固醇，10%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，0.5%膽酸鈉，87.3%基礎(chǔ)飼料，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工)。大鼠造模的同時(shí)，給藥劑量按藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)計(jì)算，二參顆粒高、中、低劑量組分別按(含生藥量)16.2 g/kg、8.1 g/kg、4.05 g/kg體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)灌服，正常組和模型組灌服相應(yīng)劑量的蒸餾水。各組每日灌胃1次，連續(xù)6周，于末次灌胃給藥前72 h，灌胃給藥30 min后，腹腔注射垂體后葉素30U/kg，每24 h注射1次，連續(xù)3次，形成冠心病心肌缺血模型。正常組注射等容量生理鹽水。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 心電圖的檢測(cè) 于造模前和第3次腹腔注射垂體后葉素24 h后，以20%烏拉坦4 mL/kg腹腔注射，大鼠麻醉后將針狀電極分別插入大鼠左前肢和雙后肢皮下，連接泰盟科技BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，記錄 Ⅱ?qū)?lián)心電圖S-T段隨時(shí)間變化幅度(mv)。

1.5.2 冠心病心肌缺血大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 各組大鼠于末次給藥后24 h，用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，用含有肝素的一次性抗凝管收集血液，通過全自動(dòng)血液流變儀測(cè)定大鼠全血高、中、低切黏度。

1.5.3 冠心病心肌缺血大鼠血清TC、TG含量測(cè)定 末次給藥后禁食24 h，麻醉下腹主動(dòng)脈取血分離血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書測(cè)定血清TC、TG 含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 二參顆粒對(duì)冠心病心肌缺血大鼠心電圖ST段的影響

圖1示，與正常組比較，模型組心電S-T段明顯抬高，T波倒置，弓背向上。與正常組比較，高劑量組心電S-T段下斜型下移；中劑量組P-QRS-T波基本為正常心電；低劑量組S-T段抬高但不明顯。與正常組比較，對(duì)照組S-T段微抬高不明顯。結(jié)果表明，造模成功且二參顆粒治療冠心病大鼠有效，中劑量組效果最顯著。

圖1 大鼠冠心?、?qū)?lián)心電圖分析

表1示，各組大鼠腹腔注射垂體后葉素后，通過觀察二參顆粒對(duì)冠心病心肌缺血大鼠心電圖S-T段的影響，發(fā)現(xiàn)各組大鼠均出現(xiàn)J點(diǎn)位移。與正常組比較，模型組各時(shí)間點(diǎn)J點(diǎn)變化值顯著升高；模型組大鼠各時(shí)間點(diǎn)T波的變化值顯著增高。與模型組比較，二參顆粒高、中、低劑量組、冠心生脈丸組各時(shí)間點(diǎn)J點(diǎn)的變化值明顯降低，同時(shí)各時(shí)間點(diǎn)T波的變化值明顯降低。

表1 二參顆粒對(duì)冠心病心肌缺血大鼠心電圖S-T段影響

2.2 二參顆粒對(duì)冠心病心肌缺血大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

表2示，與正常組比較，模型組大鼠全血黏度在低切變率時(shí)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，高、中、低切變率時(shí)二參顆粒高、中劑量組全血黏度均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與冠心生脈丸組比較，二參顆粒高、中劑量組大鼠全血黏度在高、中、低切變率時(shí)均明顯降低，提示二參顆粒高、中劑量組血流變指標(biāo)優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 二參顆粒對(duì)冠心病心肌缺血大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

2.3 二參顆粒方對(duì)冠心病心肌缺血大鼠血清TC和TG含量的影響

表3示，模型組冠心病心肌缺血大鼠血清TC和TG的含量明顯高于正常組(P<0.01)；二參顆粒高、中、低組均能明顯降低血清中TC、TG含量(P<0.01)；二參顆粒組大鼠血清TC、TG含量低于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果提示，二參顆粒能有效降低冠心病大鼠血清中TC和TG含量。

表3 各組冠心病心肌缺血大鼠血清TG、TC含量比較

3 討論

動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展與肥胖、高膽固醇血癥有關(guān)。血脂代謝發(fā)生紊亂時(shí)，局部微循環(huán)也會(huì)出現(xiàn)障礙，從而影響血液的流動(dòng)性[6-7]。當(dāng)脂肪組織增多時(shí)，會(huì)因血液供應(yīng)減少而導(dǎo)致缺氧，這種缺氧會(huì)導(dǎo)致壞死和巨噬細(xì)胞浸潤，刺激促炎因子的過度產(chǎn)生，而冠心病主要是由氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮功能障礙三者共同引起。脂質(zhì)代謝障礙為動(dòng)脈粥樣硬化的病變基礎(chǔ)，其特點(diǎn)是受累動(dòng)脈病變從內(nèi)膜開始，一般先有脂質(zhì)和復(fù)合糖類積聚、出血及血栓形成，進(jìn)而纖維組織增生及鈣質(zhì)沉著，并有動(dòng)脈中層的逐漸蛻變和鈣化，導(dǎo)致動(dòng)脈壁增厚變硬、血管腔狹窄、血液黏度升高。大量研究證實(shí)[8-9]，血黏度升高是促使冠心病發(fā)病的原因之一，當(dāng)機(jī)體本身具有冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的血管狹窄時(shí)，血液黏度升高，可嚴(yán)重影響冠狀動(dòng)脈血流量造成的心肌缺血。

心肌缺血性冠心病屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹病”范疇，其病機(jī)主要是以氣虛為本，血瘀氣滯、痰濁內(nèi)阻為標(biāo)。二參顆粒組成中，因黨參性平，可甘平益氣、酸甘化陰，以補(bǔ)陰血虧虛。又因丹參苦而微寒入心、脾、肝、腎，可化瘀補(bǔ)虛、充養(yǎng)陰血，二者合用為君藥；又配用臣藥麥冬、五味子以滋陰生津、補(bǔ)氣陰虧虛；佐以川芎、元胡、降香、木香、薤白共助丹參順暢氣血，寬胸通絡(luò)，通陽止痛。全方用藥性味平和、相互輔助，達(dá)到氣陰雙補(bǔ)、溫陽通脈、行氣止痛之功?，F(xiàn)代研究表明[10-12]，丹參酮、黨參多糖等能降低血管阻力，改善微循環(huán)及血液流變性，降低全血黏度，抑制脂質(zhì)蛋白氧化，減少血膽固醇的生成，從而起到降血脂的作用，并抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。本實(shí)驗(yàn)造模采用垂體后葉素，可引起冠狀動(dòng)脈痙攣、血管收縮，令血管外周阻力增加，進(jìn)而令造模對(duì)照組大鼠產(chǎn)生心肌供血不足和心肌損傷癥狀[13]。有文獻(xiàn)表明，在急性缺血狀態(tài)下，心肌易發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，并在缺血再灌注過程中，心肌組織暴露于高濃度的氧自由基中，通過脂質(zhì)過氧化損傷細(xì)胞膜，使心肌細(xì)胞膜內(nèi)的K+流失于外，導(dǎo)致心電圖S-T段升高[14-15]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果研究表明，采用二參顆粒治療后與模型對(duì)照組比較，治療組高劑量、中劑量、低劑量各組時(shí)間點(diǎn)T波的變化值以及血清TC、TG含量均低于模型組，且治療高、中劑量組血液流變學(xué)指標(biāo)在低切變率時(shí)全血黏度均顯著性降低。綜上所述，二參顆?？捎行Ц纳乒谛牟〈笫笮穆墒С?，降低冠心病大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)，有效降低冠心病大鼠血清中TC和TG的含量，為今后在臨床中利用中醫(yī)藥治療血瘀型冠心病提供了更多更有效的理論依據(jù)及診治方法，提高患者生活質(zhì)量。