新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸質(zhì)量評(píng)價(jià)

黃得棟　王黎　晉玲　馬秀娟　孫討軍　張勇

摘要 [目的]通過不同產(chǎn)地當(dāng)歸質(zhì)量的研究，探討當(dāng)歸道地產(chǎn)區(qū)（岷縣）和新興產(chǎn)區(qū)（天?？h、民樂縣）的質(zhì)量差異性。[方法]以甘肅不同產(chǎn)地的15份當(dāng)歸樣品為材料，采用HPLC法測(cè)定當(dāng)歸樣品阿魏酸的含量;采用紫外分光光度法測(cè)定當(dāng)歸多糖含量，根據(jù)2015版《中國藥典》第四部通則中浸出物的含量測(cè)定水溶性浸出物和醇溶性浸出物，通過SPSS 21.0軟件對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。[結(jié)果]新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)樣品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明顯差異（P>0.05）;道地產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸中阿魏酸含量高于新興產(chǎn)區(qū)，而當(dāng)歸多糖含量低于新興產(chǎn)區(qū)。[結(jié)論]新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸質(zhì)量差異不大;該試驗(yàn)為道地產(chǎn)區(qū)和新興產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸質(zhì)量評(píng)價(jià)提供可靠、科學(xué)的依據(jù)。

關(guān)鍵詞 當(dāng)歸;阿魏酸;當(dāng)歸多糖;浸出物;新興產(chǎn)區(qū);道地產(chǎn)區(qū)

中圖分類號(hào) R282.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2020）13-0195-03

Abstract [Objective] To study the quality differences of Angelica sinensis from genuine producing area （Minxian） and new producing area （Tianzhu and Minle counties）.[Method]The materials were 15 samples of Angelica sinensis from different areas of Gansu Province，the content of ferulic acid in Angelica sinensis samples was determined by HPLC; the polysaccharide content in Angelica sinensis was determined by ultraviolet spectrophotometry.According to the content of extracts in the fourth general rule of the Chinese Pharmacopoeia of the 2015 edition， watersoluble extracts and alcoholsoluble extracts were determined.The data were analyzed by SPSS 21.0.[Result]There was no significant difference in watersoluble extracts and alcoholsoluble extracts between new producing areas and genuine producing areas （P > 0.05）; the content of ferulic acid in genuine producing areas was higher than that in new producing areas， while the content of polysaccharides in Angelica sinensis was lower than that in new producing areas.[Conclusion]The quality of Angelica sinensis in new producing areas and genuine producing areas has little difference. This experiment provides reliable and scientific basis for the quality evaluation of Angelica sinensis in new producing areas and genuine producing areas.

Key words Angelica sinensis;Ferulic acid;Angelica sinensis polysaccharide;Extract;New producing areas;Genuine producing areas

當(dāng)歸為常用中藥材，已有2 000多年的藥用歷史，素有“十方九歸”的美稱[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便之功效[2]，主要成分有阿魏酸、藁本內(nèi)酯及其異構(gòu)體、多糖等[3]，分布于甘肅、云南、四川等地，其甘肅為道地產(chǎn)區(qū)，而岷縣的當(dāng)歸已經(jīng)形成了獨(dú)特的“岷歸”品牌，享譽(yù)海內(nèi)外[4]。

研究表明，當(dāng)歸質(zhì)量的形成與其產(chǎn)地的環(huán)境因子和人文環(huán)境等因素密切相關(guān)，不同產(chǎn)地的生態(tài)環(huán)境的差異性是造成當(dāng)歸藥材質(zhì)量差異的重要原因[5]，不同產(chǎn)地的生態(tài)因子對(duì)當(dāng)歸中有效物質(zhì)如多糖、核苷、有機(jī)酸和揮發(fā)油的合成與積累具有重要影響[6]。高文遠(yuǎn)等[7]采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記（RAPD）技術(shù)研究了甘肅岷縣、漳縣、武都、四川南坪4個(gè)產(chǎn)地當(dāng)歸基因組DNA的差異，結(jié)果表明，地理位置分布越近，當(dāng)歸的遺傳差異越小，反之則大。嚴(yán)輝等[8]通過測(cè)定甘肅岷縣、云南、四川、湖北等地當(dāng)歸中的揮發(fā)油、藁本內(nèi)酯、阿魏酸、總多糖的含量，運(yùn)用主成分分析法對(duì)當(dāng)歸多指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，甘肅產(chǎn)岷歸的質(zhì)量最佳。王亞麗等[9]對(duì)甘肅36個(gè)產(chǎn)地（岷縣、漳縣不同產(chǎn)地、武都、康樂縣、宕昌縣、武山縣等）的當(dāng)歸藥材進(jìn)行比較分類，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，通過對(duì)不同產(chǎn)地當(dāng)歸藥材的分類比較發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸藥材質(zhì)量與其種植環(huán)境密切相關(guān)。

近年來，隨著中藥產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，中藥材的種植已經(jīng)成為中藥發(fā)展的必走之路，在傳統(tǒng)道地產(chǎn)區(qū)不能滿足市場(chǎng)需求的情況下尋找藥材種植的新興產(chǎn)區(qū)也已變得刻不容緩，在大力發(fā)展中藥材種植的同時(shí)如何保證優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)，如何保證臨床療效這也是必須思考的問題。甘肅岷縣一帶作為我國當(dāng)歸的道地產(chǎn)區(qū)已有近千年的種植歷史，但是隨著市場(chǎng)需求的不斷增大，岷縣一帶又因地勢(shì)地形的天然制約，再加之當(dāng)歸病蟲害的不斷加重使得當(dāng)歸的產(chǎn)量遭遇空前挑戰(zhàn)，在此環(huán)境下近年來逐漸出現(xiàn)了一些新興的當(dāng)歸產(chǎn)區(qū)，以此來滿足當(dāng)歸產(chǎn)量的市場(chǎng)需求。目前盡管對(duì)不同產(chǎn)地的當(dāng)歸質(zhì)量評(píng)價(jià)方面研究較多，但是對(duì)近年來新興產(chǎn)區(qū)（甘肅省民樂縣、天?？h）的研究還鮮見報(bào)道。因此，該試驗(yàn)通過測(cè)定道地產(chǎn)區(qū)及新興產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸中阿魏酸、當(dāng)歸多糖、浸出物（水溶性、醇溶性）的含量，對(duì)當(dāng)歸的質(zhì)量進(jìn)行初步研究，探討當(dāng)歸道地產(chǎn)區(qū)和新興產(chǎn)區(qū)的質(zhì)量差異性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品收集。

樣品于2018年10—12月采自甘肅岷縣、民樂縣、天?？h，置通風(fēng)陰涼處晾曬至干燥。樣品收集具體情況見表1。

1.1.2 儀器。

DGU-20A高效液相色譜儀、SPD-20A檢測(cè)器、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、LC-20A泵、CTO-20A注溫箱（日本島津公司）;KQ-500E型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;電子天平FA2004（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）;HK-10B型500 g搖擺式粉碎機(jī)（廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司）;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;KL05A型離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司）;202-0型電熱恒溫干燥箱（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）;UV-2600 220 V紫外分光光度計(jì)（日本島津）;HHS-2S電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海宜昌儀器制造有限公司）;Mb可調(diào)式電熱板（北京科偉永興有限公司）;SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州南北儀器有限公司）。

1.1.3 試劑。

95%乙醇（分析級(jí)，萊陽市雙雙化工有限公司）;乙腈（山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司）;甲醇（分析級(jí)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;苯酚（分析級(jí)，上?；瘜W(xué)試劑有限公司）;濃硫酸（分析級(jí)，上?；瘜W(xué)試劑有限公司）;甲醇（色譜級(jí)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）;阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)：1135-24-6，上海源葉生物科技有限公司）;葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：100082-201803，上海藥品生物制品鑒定所）。

1.2 方法

1.2.1 阿魏酸的含量測(cè)定。

1.2.1.1 色譜條件。色譜柱為ship-pack PV-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙睛-0.085%磷酸溶液（17∶83），流速為1.0 mL/min，柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長為316 nm，進(jìn)樣量10 μL。

1.2.1.2 對(duì)照品溶液的制備。精密稱定阿魏酸對(duì)照品3.43 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇定容至100 mL，再次稀釋，精密量取制備溶液50 mL于100 mL容量瓶中，加70%甲醇定容至100 mL，制成每1 mL含17 μg的溶液，即得。

1.2.1.3 供試品溶液的制備。取本品粉末（過三號(hào)篩）約02 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.1.4 方法學(xué)考察。對(duì)其線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)阿魏酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的 RSD 值均小于 0.5%，符合試驗(yàn)要求。

1.2.1.5 含量測(cè)定。對(duì)15份當(dāng)歸樣品中阿魏酸的含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)照品與樣品色譜圖見圖1。

1.2.2 當(dāng)歸多糖的測(cè)定。

1.2.2.1 測(cè)定條件及方法。參照陳麗萍等[10]正交設(shè)計(jì)優(yōu)化當(dāng)歸多糖的定量分析方法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2.2 對(duì)照品溶液的配制。精密稱取105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖0.101 6 g，置100 mL容量瓶，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，配成質(zhì)量濃度為1.016 3 mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液，吸取該葡萄糖對(duì)照品10 mL，于100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為0.101 6 mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2.3 供試品溶液的制備。取當(dāng)歸的藥材粉末（過40目篩）約0.5 g，精密稱定，置于250 mL的錐形瓶中，加80%乙醇100 mL，加熱回流1 h，趁熱抽濾，將濾渣連同濾紙置于250 mL蒸餾瓶中加蒸餾水60 mL，繼續(xù)加熱回流2 h，抽濾，將濾液定容至100 mL容量瓶中，備用。

1.2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。分別精密吸取葡萄糖對(duì)照品水溶液（0.101 6 mg/mL）0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL具塞試管中，加入濃硫酸7 mL、苯酚1 mL，以蒸餾水補(bǔ)足試液至刻度，搖勻，沸水浴加熱10 min后，立即至冰水中冷卻5 min。另以蒸餾水同上平行操作為空白對(duì)照組，于483 nm處測(cè)定吸光度（A）。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程為Y=5.71x-0.005 9（R2=0.999 2），表明葡萄糖在0.010 16～0.101 60 mg/mL線性關(guān)系良好，見圖2。

1.2.2.5 樣品測(cè)定。精密量取1 mL供試品備用液，于483 nm處測(cè)定吸光度。

1.2.3 浸出物的含量測(cè)定。

按照2015版《中華人民共和國藥典》（四部）通則中水溶性浸出物、醇溶性浸出物的含量測(cè)定方法測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel整理后導(dǎo)入SPSS 21.0軟件，經(jīng)one-way ANOVA所得。

2 結(jié)果與分析

對(duì)新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸樣品的阿魏酸、當(dāng)歸多糖、水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)樣品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明顯差異（P>005）;道地產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸中阿魏酸含量高于新興產(chǎn)區(qū)，而當(dāng)歸多糖含量低于新興產(chǎn)區(qū)（表2）。

3 結(jié)論與討論

道地產(chǎn)區(qū)所種藥材稱道地藥材，又稱地道藥材，是優(yōu)質(zhì)純真藥材的專用名詞，它是指歷史悠久、產(chǎn)地適宜、品種優(yōu)良、產(chǎn)量宏豐、炮制考究、療效突出、帶有地域特點(diǎn)的藥材。岷縣是當(dāng)歸的道地產(chǎn)區(qū)，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)樣品水溶性浸出物、醇溶性浸出物無明顯差異（P>0.05）;道地產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸中阿魏酸含量高于新興產(chǎn)區(qū)，而當(dāng)歸多糖含量低于新興產(chǎn)區(qū)，均符合2015版《中華人民共和國藥典》相關(guān)項(xiàng)目的規(guī)定，該試驗(yàn)從有效成分的角度初步研究了新興產(chǎn)區(qū)和道地產(chǎn)區(qū)的差異性，為新興產(chǎn)區(qū)當(dāng)歸的生產(chǎn)提供了一定的試驗(yàn)依據(jù)，具體療效差異還有待臨床試驗(yàn)的進(jìn)一步研究。

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