溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和免疫水平的影響

高珍珍，穆祥，高魁，呂博，楊英*

(1. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2. 北京農(nóng)學(xué)院，北京 102206；3. 內(nèi)蒙古鄂爾多斯市東勝區(qū)成郊動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督站，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000)

仔豬斷奶后因其各項(xiàng)生理機(jī)能發(fā)育尚未完全，胃酸分泌不足，內(nèi)源性消化酶活性較低，加之?dāng)嗄獭Q料及飼養(yǎng)環(huán)境等發(fā)生變化，容易引起斷奶仔豬應(yīng)激，表現(xiàn)為胃腸道菌群失衡、腹瀉、生長(zhǎng)緩慢、免疫力下降，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡，給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。此階段豬群的各類疾病曾常用抗生素來預(yù)防控制，然而抗生素的長(zhǎng)期大量使用已使豬群病原菌產(chǎn)生了耐藥性，造成疾病防控的效果不理想，同時(shí)抗生素的殘留也給人類健康帶來諸多影響。許多國(guó)家已經(jīng)開始限制抗生素在動(dòng)物飼糧中的使用，因此，開發(fā)安全高效的防控疾病和提高生產(chǎn)性能的藥物與添加劑，在養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)中顯得尤為重要。中草藥由于具有安全、毒副作用低、資源豐富等優(yōu)點(diǎn)現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于仔豬飼糧中[1-2]。謝紅兵等[3]將從白術(shù)、黃芪、牛膝中提取的多糖添加到飼糧中用于改善腸道內(nèi)環(huán)境，降低腹瀉率，提高仔豬的生長(zhǎng)性能。

課題組前期研究結(jié)果表明，溫腎益精散(主要組成：五味子、熟地黃、肉蓯蓉等)可以顯著提高腎陽虛模型大鼠生長(zhǎng)性能[4]。因仔豬在斷奶期間生長(zhǎng)特點(diǎn)和疾病發(fā)生規(guī)律與腎陽虛病證相似，為此，本研究將進(jìn)一步探討飼糧中添加不同劑量溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及免疫水平的影響，為溫腎益精散在斷奶仔豬飼糧中的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用溫腎益精散由北京農(nóng)學(xué)院提供，以五味子、熟地黃、肉蓯蓉為主要功能性成分。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇120頭、35日齡、平均體重(10.05±0.25)kg的“杜長(zhǎng)大”斷奶仔豬，隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組，溫腎益精散高劑量組，溫腎益精散低劑量組。每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭斷奶仔豬，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧(由正大集團(tuán)提供)，溫腎益精散高、低劑量組分別在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上，添加0.5%、0.25%的溫腎益精散。

1.3 飼養(yǎng)管理

動(dòng)物試驗(yàn)在內(nèi)蒙古鄂爾多斯市德鑫種豬場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)前1周對(duì)圈舍進(jìn)行消毒。試驗(yàn)豬飼養(yǎng)在封閉式斷奶仔舍內(nèi)，自由采食和飲水，按常規(guī)養(yǎng)殖場(chǎng)操作規(guī)范進(jìn)行管理和免疫。每日分上、下午、晚上3次觀察各重復(fù)豬只生長(zhǎng)及采食情況，并記錄每日采食量。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，試驗(yàn)期為40 d。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)

試驗(yàn)期，記錄每個(gè)重復(fù)的初始體重和終末體重，計(jì)算每頭仔豬的平均日增重(ADG)。記錄每個(gè)重復(fù)的喂料量和剩料量，計(jì)算每頭仔豬的平均日采食量(ADFI)。料重比(F/G) 為平均日采食量除以平均日增重。

試驗(yàn)第0，30及40天，分別從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選擇體況相近的2頭仔豬，于前腔靜脈處采血，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃下冷凍保存。胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)、生長(zhǎng)激素(GH)、生長(zhǎng)抑素(SST)試驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒(由北京利德曼生化技術(shù)有限公司提供) 說明書進(jìn)行。

1.4.2 免疫相關(guān)指標(biāo)

試驗(yàn)第0，30及40天，分別從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選擇體況相近的2頭仔豬，于前腔靜脈處采血，室溫靜置30 min，3 000 r/min 離心10 min，分離血清，-20 ℃下冷凍保存。免疫球蛋白A(IgA)，免疫球蛋白G(IgG)，免疫球蛋白M(IgM)，白介素2(IL-2)和白介素4(IL-4)，試驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒(由北京利德曼生化技術(shù)有限公司提供) 說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.1.1 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬ADG、ADFI和F/G的影響

由表1可知，給藥結(jié)束(第30天)時(shí)，溫腎益精散高、低劑量組的平均日增重顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，高、低劑量組之間的平均日增重差異不顯著(P>0.05)；溫腎益精散高、低劑量組的平均日采食量和料重比與空白對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。

表1 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬ADG、ADFI和F/G的影響

組別ADG/kgADFI/kgF/G高劑量0.412±0.010 a0.713±0.092 a1.731±0.242 a低劑量0.413±0.033 a0.800±0.775 a1.940±0.237 a空白對(duì)照0.352±0.029b0.717±0.753 a2.037±0.234 a

注：同列數(shù)據(jù)標(biāo)不同字母者差異顯著(P<0.05)，相同字母者無顯著差異(P>0.05)。下同

2.1.2 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬IGF-1、GH和SST的影響

由表2可知，試驗(yàn)前(第0天)，空白對(duì)照組、低劑量組、高劑量組之間IGF-1、GH、SST的差異不顯著(P>0.05)；給藥結(jié)束(第30天)，低劑量組與高劑量組的IGF-1和GH含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，低劑量組與高劑量組的SST含量顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組IGF-1、GH含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組與低劑量組SST含量與空白對(duì)照組差異不顯著。給藥結(jié)束(第30天)和試驗(yàn)結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組相比，IGF-1、GH、SST含量差異均不顯著(P>0.05)。

表2 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬血清中IGF-1、GH、SST含量的影響 ng/mL

2.2 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響

2.2.1 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬IgA、IgG、IgM的影響

由表3可知，試驗(yàn)前(第0天)，空白對(duì)照組、低劑量組、高劑量組三組IgA、IgG、IgM的差異不顯著(P>0.05)；給藥結(jié)束(第30天)，低劑量組與高劑量組的IgA、IgG、IgM含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組IgA、IgG、IgM含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)；給藥結(jié)束(第30天)和試驗(yàn)結(jié)束(第40天)，低劑量組與高劑量組相比，IgA、IgG、IgM含量差異均不顯著(P>0.05)。

表3 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬血清中IgA、IgG、IgM含量的影響 ng/mL

2.2.2 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬血清IL-2、IL-4的影響

由表4可知，試驗(yàn)前(第0天)，空白對(duì)照組、低劑量組、高劑量組三組IL-2、IL-4的差異不顯著(P>0.05)；給藥結(jié)束(第30天)，低劑量組與高劑量組的IL-2、IL-4含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)；試驗(yàn)結(jié)束(第40天)，高劑量組與低劑量組IL-2、IL-4含量顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)；給藥結(jié)束(第30天)和試驗(yàn)結(jié)束(第40天)，低劑量組與高劑量組相比，IL-2、IL-4含量差異均不顯著(P>0.05)。

表4 溫腎益精散對(duì)斷奶仔豬血清中IL-2、IL-4含量的影響 pg/mL

3 討論

散劑作為中藥傳統(tǒng)劑型之一，具有易分散、吸收快、制作工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)不污染環(huán)境、生物活性穩(wěn)定、儲(chǔ)運(yùn)方便、不易發(fā)霉變質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，可以有效節(jié)約中藥資源，提高經(jīng)濟(jì)價(jià)值。研究表明，仔豬斷奶后生長(zhǎng)遲緩主要與由應(yīng)激造成的腸道損傷、胃腸酶活性下降、腸道微生態(tài)環(huán)境紊亂等相關(guān)[5-6]。中獸醫(yī)將各因素導(dǎo)致的內(nèi)分泌功能紊亂，進(jìn)而引起的生長(zhǎng)遲緩歸納為腎陽虛證。筆者認(rèn)為仔豬在斷奶期間生長(zhǎng)遲緩特點(diǎn)和疾病發(fā)生規(guī)律為腎陽虛病證[4]。因此，以五味子、熟地黃、肉蓯蓉等溫補(bǔ)腎陽的中藥為主要成分組成溫腎益精散，防治仔豬生長(zhǎng)遲緩，以期替代抗生素和激素的使用，服務(wù)于食品安全。其中，五味子具有益腎固精，澀腸止瀉，改善仔豬胃腸道微生物菌群平衡，調(diào)節(jié)胃液及促進(jìn)膽汁分泌，提高生長(zhǎng)速度，降低仔豬腹瀉率的作用；肉蓯蓉溫而不燥，補(bǔ)而不峻，是性質(zhì)溫和的滋補(bǔ)強(qiáng)壯藥，可激活腎上腺、釋放皮質(zhì)激素，促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)；熟地黃能夠補(bǔ)血滋陰，填精益髓,增強(qiáng)機(jī)體免疫力[7-8]

平均日增重是反映動(dòng)物生長(zhǎng)過程中的一個(gè)重要指標(biāo)，本試驗(yàn)給藥結(jié)束(第30天)，溫腎益精散高、低劑量組的平均日增重顯著高于空白對(duì)照；高、低劑量組的料重比與對(duì)照組相比，雖然差異不顯著，但總體還是低于對(duì)照組的。IGF-1是動(dòng)物機(jī)體中由肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、脾細(xì)胞等多種細(xì)胞通過自分泌/旁分泌途徑產(chǎn)生的一種活性蛋白多肽物質(zhì)，具有促進(jìn)肌肉發(fā)育，骨骼生長(zhǎng)，葡萄糖代謝等多種功能[9-10]。GH是動(dòng)物腦垂體遠(yuǎn)側(cè)部腺垂體合成并分泌一種單鏈蛋白質(zhì)類激素，廣泛存在于各種脊椎動(dòng)物中，與機(jī)體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖等密切相關(guān)[11]。SST能夠抑制生長(zhǎng)素、胃泌素、胰島素和促胰液素等激素的合成和釋放，減少胃、腸和胰液的分泌，因此，在一定范圍內(nèi)，降低SST含量，有利于動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育[12]。本試驗(yàn)給藥結(jié)束(第30天)和試驗(yàn)結(jié)束(第40天)時(shí)，溫腎益精散高、低劑量組斷奶仔豬血清中IGF-1和GH含量顯著高于空白對(duì)照組；給藥結(jié)束(第30天)，溫腎益精散高、低劑量組血清中SST含量顯著低于空白對(duì)照組。這些結(jié)果表明，溫腎益精散可以促進(jìn)飼糧中營(yíng)養(yǎng)成分的消化吸收，提高對(duì)飼糧的轉(zhuǎn)化率，通過提高斷奶仔豬血清中的IGF-1和GH，降低SST含量，提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能。

機(jī)體免疫包括體液免疫和細(xì)胞免疫。體液免疫是由B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性抗原抗體反應(yīng)[13]。免疫球蛋白是由漿細(xì)胞合成和分泌的一組能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，是體液免疫的主要抗體，血清中抗體的高低在一定程度上反映機(jī)體對(duì)疾病的抵抗能力[14-15]。IgA在維持腸道微生物組的正常穩(wěn)態(tài)平衡中起重要作用[16]；IgG在動(dòng)物體內(nèi)的合成和分泌時(shí)效長(zhǎng)、含量高，在感染或人工免疫后，可顯著提高機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用[17]；IgM是機(jī)體抗感染和免疫刺激后首先產(chǎn)生的抗體成分，產(chǎn)量少，時(shí)效短，但是在早期免疫防御中起重要作用[18-19]。試驗(yàn)給藥結(jié)束(第30天)和試驗(yàn)結(jié)束(第40天)時(shí)，溫腎益精散高、低劑量組的血清中IgA、IgG和IgM含量顯著高于空白對(duì)照組，說明溫腎益精散可顯著提高斷奶仔豬血清中IgA、IgG和IgM含量，從而提高斷奶仔豬機(jī)體的體液免疫功能。

細(xì)胞免疫主要由T淋巴細(xì)胞分化成效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞和分泌細(xì)胞因子而發(fā)揮免疫作用[20]。T淋巴細(xì)胞主要包括Th1和Th2 兩個(gè)細(xì)胞亞群，IL-2是由Th1細(xì)胞分泌[21]，對(duì)T、B細(xì)胞、自然殺傷性細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及少數(shù)膠質(zhì)細(xì)胞都能直接促進(jìn)其生長(zhǎng)[22]。IL-4由Th2細(xì)胞分泌，作用于Th2細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、分化[23]。據(jù)報(bào)道，Th1和Th2之間的動(dòng)態(tài)平衡在維持生物體的正常免疫功能中起重要作用[24]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示：給藥結(jié)束(第30天)和試驗(yàn)結(jié)束(第40天)時(shí)，溫腎益精散高、低劑量組中IL-2、IL-4含量顯著高于空白對(duì)照組，說明溫腎益精散可以通過調(diào)節(jié)Th1和Th2之間的動(dòng)態(tài)平衡，更好地協(xié)調(diào)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。

4 結(jié)論

飼糧中添加適量溫腎益精散可以提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能和免疫水平。在本試驗(yàn)條件下，斷奶仔豬飼糧中添加0.5% 的溫腎益精散效果為最佳。