miR-19b-3p靶向LRIG1調(diào)控喉癌細(xì)胞凋亡和放射敏感性分子機(jī)制研究

劉磊峰 邱海濤 江 楓 惠明朗 王代紅 莊雙豪 姚 俊

(廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，湛江 524000)

喉癌是一種呼吸道惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于肺癌，但患者5年生存率低于50%。放射治療對喉癌的療效較好，但腫瘤細(xì)胞放射抵抗性是導(dǎo)致患者放射治療后復(fù)發(fā)的重要原因[1]。因而積極探尋喉癌細(xì)胞放射抵抗性相關(guān)標(biāo)志物對提高患者治療效果及其生活質(zhì)量均具有重要現(xiàn)實(shí)意義。研究表明微小RNA-19b(microRNA-19b，miR-19b)在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)，并可參與其發(fā)生及發(fā)展過程[2]。miR-19b在黑素瘤細(xì)胞中表達(dá)升高，可能作為黑素瘤治療的潛在靶點(diǎn)[3]。miR-19b-3p在結(jié)腸癌組織及細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，并可促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖[4]。miR-19b-3p在鼻咽癌中表達(dá)上調(diào)，miR-19b-3p過表達(dá)可降低鼻咽癌細(xì)胞的放射敏感性，抑制miR-19b-3p表達(dá)可增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞的放射敏感性[5]。但miR-19b-3p在喉癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)及其對喉癌細(xì)胞放射敏感性的影響尚未可知。富含亮氨酸重復(fù)和免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(lecucine-nich repeats animmunoglobulin-like domains-1，LRIG1)在食管癌和胃癌組織中低表達(dá)，提示其可能有抑癌作用[6,7]。LRIG1在口腔疣狀癌組織中表達(dá)降低，可能通過抑制Bcl-2的表達(dá)抑制口腔疣狀癌的發(fā)生發(fā)展[8]。膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞中過表達(dá)LRIGl基因，可通過下調(diào)EGFR表達(dá)，抑制sHG44細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，增加放療敏感性[9]。通過靶基因預(yù)測，miR-19b-3p的靶基因可能是LRIG1，但miR-19b-3p是否通過調(diào)控LRIG1的表達(dá)影響喉癌細(xì)胞的凋亡和放射敏感性目前還尚未可知。因此，本研究通過體外觀察miR-19b-3p表達(dá)對喉癌細(xì)胞凋亡及放射敏感性的影響分析其是否靶向調(diào)控LRIG1而發(fā)揮作用，為增強(qiáng)喉癌細(xì)胞放射敏感性奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與主要試劑 喉癌Hep2細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。RPMI1640培養(yǎng)基與胎牛血清均購自美國Gibco公司；Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑、TRIzol試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自美國Invitrogen公司；SYBR Green PCR試劑盒購自羅氏公司；雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；LRIG1、B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase3)抗體均購自美國Abcam公司；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的IgG二抗購自美國Santa Cruz公司；miR-19b-3p抑制劑(anti-miR-19b-3p)、miR-19b-3p模擬物(miR-19b-3p mimics)、si-LRIG1及其各自陰性對照均購自上海吉瑪生物科技有限公司；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒購自美國Sigma公司；增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑盒購自武漢博士德生物公司。

1.1.2研究對象及一般資料 以2016年2月～2017年12月本院收治的30例喉癌患者為研究對象，所有患者均經(jīng)臨床病理證實(shí)為喉癌，男16例，女14例，年齡為56～75歲，平均為(65.47±3.56)歲，患者均接受手術(shù)并于術(shù)中切取喉癌組織及癌旁組織，迅速放入液氮中，術(shù)后將其轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱。所有患者術(shù)前均未接受放療或化療，本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者知情且簽署同意書。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組 喉癌Hep2細(xì)胞放入含有10%胎牛血清及青霉素-鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱，待細(xì)胞培養(yǎng)融合度達(dá)到80%時(shí)轉(zhuǎn)染。將喉癌Hep2細(xì)胞分為anti-miR-19b-3p組(轉(zhuǎn)染miR-19b-3p抑制劑anti-miR-19b-3p)、anti-miR-NC組(轉(zhuǎn)染miR-19b-3p的陰性對照)、pcDNA-LRIG1組(轉(zhuǎn)染LRIG1過表達(dá)載體pcDNA-LRIG1)、pcDNA組(轉(zhuǎn)染LRIG1空載體)、anti-miR-19b-3p+si-LRIG1組(共轉(zhuǎn)染anti-miR-19b-3p與si-LRIG1)、anti-miR-19b-3p+si-NC組(共轉(zhuǎn)染anti-miR-19b-3p與si-NC)、miR-19b-3p組(轉(zhuǎn)染miR-19b-3p mimics)、miR-NC組(轉(zhuǎn)染miR-19b-3p陰性對照)。轉(zhuǎn)染后6 h換液，加入含有10%胎牛血清的新鮮完全培養(yǎng)液。置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h。anti-miR-19b-3p組、anti-miR-NC組、pcDNA組、pcDNA-LRIG1組、anti-miR-19b-3p+si-NC組 anti-miR-19b-3p+si-LRIG1組分別接受0、2、4、6、8 Gy照射，照射條件為：源皮距100 cm，照射野(35 cm×35 cm)，5 Gy/min劑量率，實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.2.2qRT-PCR檢測喉癌組織及Hep2細(xì)胞中miR-19b-3p、LRIG1 mRNA表達(dá) 分別收集喉癌組織及各組對數(shù)生長期Hep2細(xì)胞，采用TRIzol法檢測miR-19b-3p、LRIG1 mRNA表達(dá)，反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，反轉(zhuǎn)錄體系20 μl：10×RT Primer 2 μl、10×RT Buffer 2 μl、dNTP Mixtrue 1 μl、Quant KTase 0.5 μl、上、下游引物各1.5 μl RNase-free ddH2O 11.5 μl。miR-19b-3p上游引物為：5′-TGTCATAATCACTGTGCAAATCC-3′，下游引物為：5′-TATGGTTGTTCAGCTCTCTGTCTC-3′，產(chǎn)物120 bp；LRIG1上游引物為5′-AGATCGCCTGGCAGAAAGAC-3′，下游引物為：5′-ACGGTGGTCCTTCATTTCCT-3′。產(chǎn)物460 bp。qRT-PCR反應(yīng)體系20 μl：2×miRcute miRNA Premix 10 μl、上下游引物各0.4 μl、cDNA 2 μl、RNase-free ddH2O 7.2 μl；反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性2 min循環(huán)1次；95℃變性30 s，60℃退火45 s，72℃延伸30 s循環(huán)40次。LRIG1以GAPDH為內(nèi)參基因，miR-19b-3p以U6為內(nèi)參基因，所有樣本均設(shè)置3次重復(fù)，以2-ΔΔCt法計(jì)算miR-19b-3p、LRIG1 mRNA相對表達(dá)量。

1.2.3蛋白免疫印跡(Western blot)檢測喉癌組織及細(xì)胞中LRIG1、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá) 收集喉癌組織及各組Hep2細(xì)胞，預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2次×5 min，加入400 μl裂解液(Tris-HCl、NaCl、EDTA、NP-40、PMSF、pepstain A)，加入20 μg 蛋白樣本進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，加入一抗孵育24 h(1∶400)、加入二抗孵育1 h(1∶1 000)，應(yīng)用Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。

1.2.4檢測細(xì)胞凋亡率 按照細(xì)胞凋亡檢測試劑盒說明書操作，用預(yù)冷的PBS洗滌轉(zhuǎn)染后各組喉癌Hep2細(xì)胞，加入100 μl binding緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/ml，加入5μl Annexin V-FITC(避光孵育15 min，1 000 r/min離心3 min)與5 μl PI(避光孵育15 min)，上機(jī)于1 h內(nèi)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。

1.2.5克隆形成實(shí)驗(yàn) 收取轉(zhuǎn)染后各組經(jīng)不同照射劑量X線照射的喉癌Hep2細(xì)胞，用胰蛋白酶消化，收集細(xì)胞后置于10 ml EP管，加入RPMI1640培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，重新計(jì)數(shù)，稀釋細(xì)胞后接種于6孔板，每組每孔分別接種1 000個(gè)細(xì)胞，每組均設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)10～14 d，每隔2 d 更換一次培養(yǎng)液；用無水乙醇固定20 min，加入0.5%結(jié)晶紫染色30 min，洗去多余染液，風(fēng)干后置于顯微鏡下觀察克隆數(shù)，細(xì)胞克隆形成率=(有效克隆數(shù)/接種細(xì)胞)×100%，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)=(受照射細(xì)胞克隆形成率/對照細(xì)胞克隆形成率)×100%，同時(shí)用細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)擬合單擊-多靶模型曲線，每組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.2.6雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 利用Target Scans靶基因預(yù)測軟件篩選出LRIG1可能為miR-19b-3p的靶基因，發(fā)現(xiàn)LRIG1的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)可能是miR-19b-3p的結(jié)合位點(diǎn)。將含有miR-19b-3p結(jié)合位點(diǎn)的LRIG1 3′UTR序列及其突變體插入熒光素酶報(bào)告基因載體中得到WT-LRIG1、MUT-LRIG1，另將喉癌Hep2細(xì)胞接種于24孔板，miR-19b-3p mimic或miR-NC分別與WT-LRIG1、MUT-LRIG1共轉(zhuǎn)染入喉癌Hep2細(xì)胞，置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞，細(xì)胞裂解后置于室溫下振蕩20 min，采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒檢測細(xì)胞熒光素酶活性。

2 結(jié)果

2.1miR-19b-3p和LRIG1在喉癌組織中的表達(dá) miR-19b-3p在喉癌組織中的表達(dá)水平較癌旁組織明顯升高(P<0.05)，而LRIG1 mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P<0.05)，見圖1。

2.2抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡的影響 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染anti-miR-19b-3p的轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果顯示，anti-miR-19b-3p組喉癌Hep2細(xì)胞中miR-19b-3p的表達(dá)水平與anti-miR-NC組相比明顯降低(P<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與anti-miR-NC組相比，anti-miR-19b-3p組喉癌Hep2細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)，而Bax、cleaved-caspase3蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P<0.05)，見圖2。表明抑制miR-19b-3p表達(dá)可通過調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)而誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡。

2.3抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞放射敏感性的影響 抑制miR-19b-3p表達(dá)后檢測喉癌Hep2細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)變化，不同劑量(2、4、6、8 Gy)X線照射下，anti-miR-19b-3p組細(xì)胞存活率較anti-miR-NC組顯著降低(P<0.05)，單擊-多靶模型分別擬合細(xì)胞存活曲線及模型參數(shù)，見圖3、表1，anti-miR-19b-3p組喉癌Hep2細(xì)胞增敏比(SER)為1.654。表明抑制miR-19b-3p表達(dá)可增強(qiáng)喉癌Hep2細(xì)胞放射敏感性。

2.4LRIG1過表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡和放射敏感性的影響 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測LRIG1過表達(dá)(P<0.05)，明顯促進(jìn)Bax表達(dá)(P<0.05)，而抑制Bcl-2表達(dá)轉(zhuǎn)染效果，如圖4A所示，pcDNA-LRIG1組喉癌Hep2細(xì)胞中LRIG1的蛋白表達(dá)水平較pcDNA組顯著升高(P<0.05)，提示轉(zhuǎn)染成功。pcDNA-LRIG1組喉癌Hep2細(xì)胞凋亡率相較于pcDNA組顯著升高(P<0.05)，進(jìn)一步用不同劑量X線照射結(jié)果顯示，與pcDNA組相比，pcDNA-LRIG1組喉癌Hep2細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)明顯降低(P<0.05)，細(xì)胞增敏比(SER)為1.788，見圖4、表2。表明LRIG1過表達(dá)可能通過促進(jìn)喉癌Hep2細(xì)胞凋亡進(jìn)而增強(qiáng)放射敏感性。

圖1 miR-19b-3p和LRIG1在喉癌組織中的表達(dá)Fig.1 Expression of miR-19b-3p and LRIG1 in laryng-eal carcinoma

圖2 抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡的影響Fig.2 Effect of inhibition of miR-19b-3p expression on apoptosis of laryngeal carcinoma Hep2 cells

圖3 抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞放射敏感性的影響Fig.3 Effect of inhibition of miR-19b-3p expression on radiosensitivity of laryngeal carcinoma Hep2 cells

2.5miR-19b-3p靶向調(diào)控LRIG1的表達(dá) TargetScan預(yù)測miR-19b-3p靶基因，結(jié)果顯示LRIG1可能為miR-19b-3p的功能性靶基因，miR-19b-3p預(yù)測結(jié)合LRIG1的3′UTR的靶點(diǎn)如圖5A所示。共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LRIG1與miR-19b-3p mimics的熒光素酶活性較共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LRIG1、miR-NC的熒光素酶活性顯著降低(P<0.05)，而共轉(zhuǎn)染MUT-LRIG1與miR-19b-3p mimics的熒光素酶活性與共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LRIG1、miR-NC的熒光素酶活性相比無顯著性差異(P>0.05)，見圖5，表明LRIG1是miR-19b-3p的直接靶基因。與miR-NC組相比，miR-19b-3p組喉癌細(xì)胞中LRIG1的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)；與anti-miR-NC組相比，anti-miR-19b-3p組喉癌細(xì)胞中LRIG1的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。表明miR-19b-3p可負(fù)向調(diào)控靶基因LRIG1的表達(dá)。

表1 抑制miR-19b-3p的表達(dá)對Hep-2細(xì)胞增敏比及存活分?jǐn)?shù)等相關(guān)參數(shù)的影響

圖4 LRIG1過表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡和放射敏感性的影響Fig.4 Effect of LRIG1 overexpression on apoptosis and radiosensitivity of laryngeal carcinoma Hep2 cells

表2 LRIG1過表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞增敏比及存活分?jǐn)?shù)等相關(guān)參數(shù)的影響

圖5 miR-19b-3p靶向調(diào)控LRIG1的表達(dá)Fig.5 miR-19b-3p targeted regulation of LRIG1 expression

表3 抑制miR-19b-3p的表達(dá)及沉默LRIG1的表達(dá)對Hep-2細(xì)胞增敏比及存活分?jǐn)?shù)等相關(guān)參數(shù)的影響

圖6 抑制LRIG1表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡和放射敏感性的作用Fig.6 Inhibition of LRIG1 expression reverses effect of inhibition of miR-19b-3p expression on apoptosis and radiosensitivity of laryngeal carcinoma Hep2 cells

2.6抑制LRIG1表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡和放射敏感性的作用 與anti-miR-19b-3p+si-NC組相比，anti-miR-19b-3p+si-LRIG1組喉癌Hep2細(xì)胞凋亡率顯著降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，而Bax蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0.05)，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)明顯升高(P<0.05)，細(xì)胞增敏比(SER)為0.668，見圖6、表3。表明抑制LRIG1表達(dá)可恢復(fù)抑制miR-19b-3p表達(dá)對喉癌Hep2細(xì)胞凋亡的抑制作用及其增強(qiáng)細(xì)胞放射敏感性的作用。

3 討論

喉癌放射敏感性與腫瘤細(xì)胞中癌基因或抑癌基因異常表達(dá)及其相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制有關(guān)[10,11]。可通過上調(diào)或下調(diào)miRNA表達(dá)增加喉癌細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)放射敏感性[12]。但miRNA與喉癌放射敏感性的相關(guān)性研究相對較少，因此需進(jìn)一步探討miRNA對喉癌細(xì)胞放射敏感性的影響及其內(nèi)在分子機(jī)制。

miR-19b-3p在胃癌、前列腺癌等惡性腫瘤中均呈高表達(dá)，其可能作為腫瘤早期診斷及評估患者預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物[13,14]。Wei等[15]研究表明，苦參堿可通過調(diào)控miR-19b-3p/PTEN軸進(jìn)而抑制黑素瘤發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程。Jin等[16]研究表明下調(diào)miR-19b-3p可通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt通路抑制乳腺癌細(xì)胞增殖并逆轉(zhuǎn)塞卡替尼的抗性。本研究檢測喉癌組織、癌旁組織及Hep2細(xì)胞中miR-19b-3p的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-19b-3p的表達(dá)水平均顯著升高，體外培養(yǎng)Hep2細(xì)胞并轉(zhuǎn)染入anti-miR-19b-3p而抑制其表達(dá)，進(jìn)一步觀察細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抑制miR-19b-3p表達(dá)后可明顯促進(jìn)喉癌細(xì)胞凋亡，并可促進(jìn)Bax、cleaved-caspase3表達(dá)及抑制Bcl-2表達(dá)，已有研究報(bào)道指出Bcl-2屬于抗凋亡基因，Bax屬于凋亡基因，Bcl-2可通過調(diào)控線粒體凋亡通路激活caspase3級聯(lián)反應(yīng)進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡[17,18]。提示下調(diào)miR-19b-3p表達(dá)可通過調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白進(jìn)而促進(jìn)喉癌細(xì)胞凋亡。用不同劑量X線照射喉癌細(xì)胞結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制miR-19b-3p表達(dá)后喉癌細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)顯著降低，增敏比明顯升高，提示抑制miR-19b-3p表達(dá)可顯著增強(qiáng)喉癌細(xì)胞放射敏感性。

LRIG1可維持組織及細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，其在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中均呈低表達(dá)，并可發(fā)揮抑癌基因作用[19]。沉默LRIG1可抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡并降低細(xì)胞對藥物的敏感性[20]。朱曉楠等[21]研究表明，上調(diào)LRIG1表達(dá)后可通過抑制RAD51蛋白表達(dá)而抑制雙鏈DNA損傷修復(fù)進(jìn)而增強(qiáng)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞放射敏感性。嚴(yán)澤軍等[22]研究表明LRIG1可通過下調(diào)EGFR表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞凋亡并提高細(xì)胞對順鉑的敏感性。相關(guān)研究表明LRIG1過表達(dá)可通過下調(diào)靶基因EGFR表達(dá)逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)(EMT)轉(zhuǎn)化進(jìn)程，抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為進(jìn)而增強(qiáng)其放射敏感性[23]。與上述研究報(bào)道相似，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)喉癌組織及細(xì)胞系中LRIG1的mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著降低，通過上調(diào)LRIG1表達(dá)后發(fā)現(xiàn)喉癌細(xì)胞凋亡率顯著升高，而細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)顯著降低，提示LRIG1過表達(dá)可誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)其放射敏感性。通過生物學(xué)信息網(wǎng)站預(yù)測LRIG1可能為miR-19b-3p的靶基因，采用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證LRIG1是miR-19b-3p的靶基因，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)miR-19b-3p可負(fù)向調(diào)控靶基因LRIG1的表達(dá)，為探究miR-19b-3p是否可通過調(diào)控靶基因LRIG1表達(dá)進(jìn)而參與喉癌細(xì)胞凋亡及放射抵抗性過程，本研究將anti-miR-19b-3p與si-LRIG1共轉(zhuǎn)染入喉癌細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡率顯著降低，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)顯著升高，細(xì)胞增敏比顯著降低，提示下調(diào)miR-19b-3p表達(dá)可通過調(diào)控LRIG1進(jìn)而誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)細(xì)胞放射敏感性。

綜上所述，喉癌中miR-19b-3p、LRIG1表達(dá)異常與放射敏感性有關(guān)，靶向下調(diào)miR-19b-3p表達(dá)可上調(diào)靶基因LRIG1表達(dá)進(jìn)而提高喉癌放射敏感性，其可能作為喉癌放療的治療靶點(diǎn)及判斷放射敏感性的分子標(biāo)志物。但關(guān)于其是否可在臨床實(shí)踐中廣泛應(yīng)用仍需臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)。