武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷大鼠的護(hù)肝作用

張國(guó)壽，徐曉斌，柴文卿，陳嚇俤

（1.武夷學(xué)院 旅游學(xué)院，福建 武夷山 354300；2.武夷學(xué)院 茶與食品學(xué)院，福建 武夷山 354300；3.武夷山市立醫(yī)院 康復(fù)科，福建 武夷山 354300）

酒精性肝損傷屬于臨床中常見(jiàn)的肝臟疾病，大部分患者有過(guò)量飲酒的嗜好，機(jī)體代謝酒精的主要器官為肝臟，過(guò)量飲酒可對(duì)肝臟造成損傷，繼而導(dǎo)致肝代謝酒精能力下降。長(zhǎng)期過(guò)量飲酒，則出現(xiàn)惡性循環(huán)，主要表現(xiàn)為肝腫大、脂肪肝、肝硬化、肝衰竭等[1]。茶作為珍貴的天然草本植物流傳于民間作藥品治病已有數(shù)千年的歷史，茶多酚作為一種天然抗氧化劑，是從茶葉中提取的多酚類物質(zhì)的總稱，現(xiàn)代研究證實(shí)其具有多種生物藥理作用，如抗菌、抗病毒、抗癌、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用[2-3]。武夷巖茶作為我國(guó)十大名茶之一，產(chǎn)于“雙世遺”地武夷山，茶樹(shù)生長(zhǎng)在巖縫之中，武夷巖茶因巖得韻，茶葉品質(zhì)優(yōu)異[4]。類似延緩衰老、預(yù)防心血管疾病、減肥降脂等武夷巖茶的保健作用已見(jiàn)報(bào)，而有關(guān)其對(duì)酒精肝的護(hù)肝作用還未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)小劑量、長(zhǎng)時(shí)間酒精灌胃建立酒精肝動(dòng)物疾病模型,采用不同劑量武夷巖茶干預(yù)，檢測(cè)肝功能和肝組織病理，觀察武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

清潔級(jí)SD大鼠60只，體重120±15 g，購(gòu)于斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司（上海）,合格證號(hào):SCXK(滬)2012-0010。武夷巖茶由武夷山秀桿茗茶有限責(zé)任公司提供，紅星牌62%(體積分?jǐn)?shù))白酒(北京釀酒總廠)；ALT測(cè)定試劑盒、AST測(cè)定試劑盒、TG試劑盒（寧波普瑞柏生物技術(shù)有限公司），SOD測(cè)試盒、MDA測(cè)試盒、GSH-Px測(cè)試盒(上海拜力生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 茶湯制備方法

武夷巖茶磨碎后，80目過(guò)篩，沸水浸提，粗濾，精濾，旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)儀濃縮，得濃度為1 kg/L茶湯，低溫保存。

1.2.2 動(dòng)物分組與處理

實(shí)驗(yàn)分成5組，Normal組，Model組，武夷巖茶L、M、H組，每組清潔級(jí)SD雄性大鼠12只。除Normal組外，其余各組大鼠以7 g/(kg·d)酒精灌胃[5]，同時(shí)武夷巖茶L、M、H組分別以劑量為0.75、1.50、3.00 g/(kg·d)的武夷巖茶制成的茶湯灌胃，Normal組則予以相同體積生理鹽水灌胃。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)

第8周末，大鼠禁食10 h，正常飲水，乙醚麻醉后，正中切口進(jìn)腹，于下腔靜脈穿刺,抽取血液標(biāo)本,分離肝組織，檢測(cè)血清肝功能指標(biāo)ALT、AST、TG，切取肝臟組織，制備10%的肝臟勻漿，檢測(cè)肝臟組織中SOD、GSH-Px、MDA水平，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。將肝組織標(biāo)本置入4%多聚甲醛溶液固定，肝臟組織HE染色，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，觀察肝細(xì)胞的炎癥、變性、壞死等病理改變。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理方法

采用SPSS軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果以mean±SD表示，各組間數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)和方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷大鼠肝功能的影響

表1可知，Model組ALT、AST、TG水平均顯著高于Normal組（P＜0.01），表明酒精性肝損傷大鼠造模成功；武夷巖茶各劑量組ALT、AST水平均顯著低于Model組（P＜0.05），武夷巖茶H組TG水平顯著低于Model組（P＜0.05）。

表1 武夷巖茶對(duì)大鼠血清ALT、AST、TG水平的影響(mean±SD)Tab.1 Effect of Wuyi rock tea on ALT,AST and TG in serum in rats

2.2 武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷大鼠抗氧化功能的影響

肝臟組織檢測(cè)結(jié)果顯示（表2），SOD、GSH-Px水平，Model組均顯著低于Normal組（P＜0.01），MDA水平則相反，與酒精性肝損傷疾病的臨床表現(xiàn)相符合；武夷巖茶各劑量組中，M、H組的SOD、GSH-Px水平均較Model組顯著增高（P＜0.05），MDA水平則相反，L組各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果較Model組則均無(wú)顯著差異 (P＞0.05)。

表2 武夷巖茶對(duì)大鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA水平的影響(mean±SD)Tab.2 Effect of Wuyi rock tea on SOD,GSH-Px and MDA of liver tissue in rats

2.3 武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷大鼠病理改變的影響

各組肝組織HE染色，顯微鏡放大倍數(shù)為100倍，觀察肝細(xì)胞損傷程度。Normal組大鼠肝細(xì)胞正常，肝小葉完整，肝細(xì)胞索整齊排列，呈放射狀，無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)脂肪變性（圖1）；Model組大鼠肝臟中央靜脈的周圍血液瘀滯，肝索紊亂，肝細(xì)胞空泡樣變性明顯，肝細(xì)胞片狀壞死且炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（圖2）；武夷巖茶L組大鼠肝細(xì)胞索排列明顯紊亂，肝小葉及匯管區(qū)見(jiàn)散發(fā)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，胞漿中見(jiàn)明顯大小不等空泡變性，病變較Model組有所減輕（圖5）；武夷巖茶M組大鼠肝細(xì)胞索排列稍顯紊亂，肝小葉及匯管區(qū)偶見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，胞漿中見(jiàn)少量大小不等空泡變性，病變較Model組改善明顯（圖4）；武夷巖茶H組大鼠肝細(xì)胞索略顯紊亂，肝小葉及匯管區(qū)偶見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞病理表現(xiàn)較接近Normal組（圖3）。

圖1 正常組（HE,100×）Fig.1 Normal group（HE,100×）

圖3 高劑量組（HE,100×）Fig.3 High dose group（HE,100×）

圖4 中劑量組（HE,100×）Fig.4 Middle dose group（HE,100×）

圖5 低劑量組（HE,100×）Fig.5 Low dose group（HE,100×）

3 討論

肝臟是酒精損害的主要靶器官，在酒精代謝過(guò)程中生成大量的活性氧自由基（ROS），如超氧陰離子(·O2-)、過(guò)氧化氫(H2O2)、羥自由基(·OH)，過(guò)多的ROS致使肝細(xì)胞膜和線粒體膜中多價(jià)不飽和脂肪酸過(guò)氧化，造成損害，出現(xiàn)肝細(xì)胞壞死、破裂，血液中表現(xiàn)為ALT和AST升高。酒精性肝損傷進(jìn)展過(guò)程中，出現(xiàn)脂肪代謝紊亂、脂質(zhì)過(guò)氧化、血液中TG含量增高，表現(xiàn)為脂肪肝和肝纖維化改變[6-7]。從本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果得出，各劑量組武夷巖茶均可降低AST、ALT(P＜0.05)，武夷巖茶H組可降低TG(P＜0.05)，說(shuō)明武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷大鼠的肝臟具有保護(hù)作用，減輕肝臟組織細(xì)胞破裂、壞死，且能抑制其脂質(zhì)過(guò)氧化水平。

機(jī)體攝入酒精后，少部分經(jīng)肺、腎排出體外，大部分由肝臟代謝，長(zhǎng)期過(guò)量飲酒超出肝臟代謝負(fù)荷，導(dǎo)致酒精在肝內(nèi)蓄積，出現(xiàn)脂質(zhì)代謝紊亂，其為酒精肝損傷的重要發(fā)病機(jī)制，主要表現(xiàn)為代謝過(guò)程中乙醇氧化生成乙醛產(chǎn)生大量ROS，為清除ROS消耗機(jī)體內(nèi)大量的抗氧化物質(zhì)SOD、GSH-Px，引起后者在體內(nèi)的含量均顯著下降[8]，機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)抗氧化能力下降而脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的增強(qiáng)，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物MDA生成增加，導(dǎo)致酒精性肝病的病理變化[9-10]。從本實(shí)驗(yàn)生化檢測(cè)結(jié)果得出，武夷巖茶H、M組對(duì)SOD和GSH-Px的含量的升高作用明顯（P＜0.05），武夷巖茶H、M組MDA的含量有明顯降低（P＜0.05），病理檢測(cè)結(jié)果亦顯示，武夷巖茶H、M組與Model組相比較病理?yè)p害程度明顯改善，這可能與武夷巖茶具有抗氧化和清除體內(nèi)自由基的作用有關(guān)。

4 結(jié)論

綜上所述，中、高劑量武夷巖茶對(duì)酒精性肝損傷大鼠的肝臟具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與其通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，清除自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān)，本研究為武夷巖茶輔助治療酒精性肝損傷的臨床應(yīng)用提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但武夷巖茶更多的生物學(xué)活性、相關(guān)的藥理和分子作用機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。