四川省宜賓市屠宰企業(yè)非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)能力比對(duì)

（宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川宜賓 644000）

屠宰環(huán)節(jié)是生豬產(chǎn)銷的重要環(huán)節(jié)，屠宰企業(yè)的非洲豬瘟自檢對(duì)切斷病毒傳播鏈條，打好非洲豬瘟攻堅(jiān)戰(zhàn)有著積極重要作用。為摸清四川省宜賓市屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)水平，提升其非洲豬瘟檢測(cè)能力，組織開展了全市屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)能力比對(duì)工作。

1 材料和方法

1.1 比對(duì)對(duì)象

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部212 號(hào)公告[1]中公布的宜賓市屠宰企業(yè)，共83家，其中定點(diǎn)屠宰企業(yè)（A 證）9家、小型屠宰企業(yè)（B 證）74家，在宜賓市10個(gè)區(qū)縣的分布見表1。

表1 宜賓市各區(qū)縣屠宰企業(yè)分布 單位：家

1.2 樣品、試劑和主要儀器設(shè)備

比對(duì)陽(yáng)性樣品來(lái)自四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陰性樣品來(lái)自宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，由宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一編號(hào)，每組檢測(cè)5 份樣品，其中陽(yáng)性樣品不低于2 份。比對(duì)前，隨機(jī)抽取部分樣品，使用青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心的非洲豬瘟病毒熒光PCR 檢測(cè)試劑盒（批號(hào)040221901）進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)比對(duì)樣品的真實(shí)性。

試劑、核酸檢測(cè)儀、離心機(jī)、移液器等，均為企業(yè)自行采購(gòu)，其中試劑需符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《關(guān)于非洲豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒有關(guān)事宜的通知》和中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心《關(guān)于公布非洲豬瘟現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)試劑名單的通知》的要求。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，在用的有6家品牌的試劑（熒光PCR 類5家、恒溫?cái)U(kuò)增類1家）和8家品牌的核酸檢測(cè)儀（熒光PCR儀5家、恒溫?cái)U(kuò)增儀3家）。

1.3 比對(duì)流程

1.3.1 現(xiàn)場(chǎng)準(zhǔn)備 各區(qū)縣負(fù)責(zé)場(chǎng)地布置和信息核查。合理設(shè)置檢測(cè)臺(tái)間距、隔離帶、休息區(qū)，保障檢測(cè)獨(dú)立開展；核查人員、儀器、試劑，嚴(yán)防弄虛作假、徇私舞弊等。

1.3.2 樣品發(fā)放與監(jiān)督 各區(qū)縣同期開展比對(duì)，樣品由宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心人員帶至各區(qū)縣現(xiàn)場(chǎng)。簽到和準(zhǔn)備完成后，檢測(cè)人員依次抽取比對(duì)樣品，并在發(fā)放登記表上簽字，同時(shí)領(lǐng)取比對(duì)試驗(yàn)記錄表，回到檢測(cè)區(qū)獨(dú)立完成。其間，監(jiān)督員現(xiàn)場(chǎng)巡查，不許檢測(cè)人員隨意走動(dòng)，接打電話，有意觀看其他比對(duì)企業(yè)檢測(cè)結(jié)果。

1.3.3 結(jié)果確認(rèn)和報(bào)送 檢測(cè)結(jié)束后提交檢測(cè)記錄和報(bào)告，并在結(jié)果報(bào)告表上簽字確認(rèn)后離開或到指定地點(diǎn)休息。宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心人員負(fù)責(zé)結(jié)果統(tǒng)計(jì)、復(fù)核和報(bào)送。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)人員比對(duì)

宜賓市10個(gè)區(qū)縣83家屠宰企業(yè)共有檢測(cè)人員100 名，平均年齡39 歲，平均崗位工作時(shí)間為4.9個(gè)月，文化程度初中及以下占45%，高中、中專占40%，大專占14%，本科及以上占1%（表2）。其中：A 證屠宰企業(yè)共有檢測(cè)人員10 名，平均年齡38 歲，平均崗位工作時(shí)間為4.8個(gè)月，文化程度高中、中專及以上占80%；B 證屠宰企業(yè)共有檢測(cè)人員90 名，平均年齡39 歲，平均崗位工作時(shí)間為5個(gè)月，文化程度高中、中專及以下占87%（表3）?？傮w來(lái)看，屠宰企業(yè)檢測(cè)人員偏少、崗位工作時(shí)間短、文化程度不高。

2.2 不同區(qū)縣屠宰企業(yè)比對(duì)

不同區(qū)縣屠宰企業(yè)的檢測(cè)結(jié)果差異較大，不同區(qū)縣的成立率為44.44%～100%，敏感性為9.52%～70.83%，特異性為50.00%～100%，準(zhǔn)確率為45.71%～76.67%；總體敏感性較差、準(zhǔn)確率偏低，10個(gè)區(qū)縣參與比對(duì)的83 屠宰企業(yè)中，有64家比對(duì)檢測(cè)成立，占比為77.11%，總檢測(cè)敏感性為49.72%，特異性為87.41%，準(zhǔn)確率為66.56%（表4）。

2.3 不同類別屠宰企業(yè)比對(duì)

對(duì)比發(fā)現(xiàn)，A 證企業(yè)檢測(cè)的成立率、敏感性和準(zhǔn)確率均高于B 證。參與比對(duì)的9家A 證企業(yè)中，有8家檢測(cè)成立，占比為88.89%，總檢測(cè)敏感性為68.18%，特異性為83.33%，準(zhǔn)確率為75.00%；74家B 證企業(yè)中，有56家檢測(cè)成立，占比為75.68%，總檢測(cè)敏感性為47.10%，特異性為88.00%，準(zhǔn)確率為65.36%（表5）。

表2 不同區(qū)縣屠宰企業(yè)檢測(cè)人員信息統(tǒng)計(jì)

表3 不同類別屠宰企業(yè)檢測(cè)人員信息統(tǒng)計(jì)

表4 不同區(qū)縣屠宰企業(yè)檢測(cè)結(jié)果

表5 不同類別的屠宰企業(yè)檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同儀器試劑組合比對(duì)

按儀器品牌劃分，8種設(shè)備（A—H）和6種試劑（a—f）組成了8種 檢測(cè)組合（A1—A8）。組合A7 只有1家因機(jī)器調(diào)試原因?qū)е聶z測(cè)不成立，其他家屠宰企業(yè)不同組合的成立率為57.14%～100%，敏感性為25.00%～73.08%，特異性為83.78%～100%，準(zhǔn)確率為55.00%～100%（表6）。需補(bǔ)充的是，除組合A1、A7 外，其他組合均有準(zhǔn)確率100%的企業(yè)（組合A2 和A6 有3家，組合A3 有2家，組合A4、A5、A8 各有1家）。

按試劑劃分，6種試劑（a—f）和8種設(shè)備（A—H）組成了6種檢測(cè)組合（B1—B6）。不同組合的成立率為60.00%～100%，敏感性為31.25%～100%，特異性為50.00%～100%，準(zhǔn)確率為63.33%～100%（表7）。需補(bǔ)充的是，除組合B3、B4 外，其他組合均有準(zhǔn)確率100%的企業(yè)（組合B1 有6家，組合B2、B6 有2家，組合B5 有1家）。

綜合分析，不同組合的檢測(cè)結(jié)果差異較大，有10種組合（10/14）檢測(cè)完全準(zhǔn)確，但完全準(zhǔn)確的企業(yè)數(shù)比例偏低（11/64）。雖然選擇“恒溫?cái)U(kuò)增類”組合的企業(yè)數(shù)量明顯多于“熒光PCR 類”，但后者的成立率、敏感性、特異性、準(zhǔn)確率均高于前者。

表6 不同“儀器+試劑”組合的屠宰企業(yè)檢測(cè)結(jié)果

表7 不同“試劑+儀器”組合的屠宰企業(yè)檢測(cè)結(jié)果

3 討論

此次比對(duì)表明，宜賓市屠宰企業(yè)檢測(cè)的敏感性較差，準(zhǔn)確率一般，檢測(cè)能力有待進(jìn)一步提高。原因分析如下：一是屠宰企業(yè)檢測(cè)人員少，崗位工作時(shí)間短，隊(duì)伍文化程度不高，檢測(cè)人員大多只有1 名，有的為兼職，有的年齡偏大，之前也未接觸過(guò)核酸檢測(cè)，操作經(jīng)歷大多不足半年，熟悉程度有待提高，這與唐小明等[2]的調(diào)查類似。二是平時(shí)自檢在企業(yè)內(nèi)部進(jìn)行，檢測(cè)人員對(duì)場(chǎng)地、環(huán)境都較熟悉，而此次比對(duì)采用現(xiàn)場(chǎng)集中檢測(cè)方式，有監(jiān)督員全程巡查，考驗(yàn)了參比人員的心里素質(zhì)和臨場(chǎng)發(fā)揮能力?，F(xiàn)場(chǎng)中，人員出現(xiàn)對(duì)儀器設(shè)置不熟、加樣手抖、操作不規(guī)范不到位等，同時(shí)規(guī)定只能進(jìn)行1次檢測(cè)無(wú)法復(fù)檢（有的樣品準(zhǔn)確率較好，但對(duì)照不成立），這些在較大程度上影響了結(jié)果。此次比對(duì)發(fā)現(xiàn)，各有9家企業(yè)出現(xiàn)陽(yáng)性、陰性對(duì)照不成立，提示人員操作水平有待提高。三是不同儀器的價(jià)格不等，質(zhì)量和穩(wěn)定性不一，操作難度有差異，檢測(cè)前有的儀器還未完全調(diào)試好，甚至出現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)故障。四是不同的試劑，敏感性和特異性也有差異，帶至現(xiàn)場(chǎng)途中保存不當(dāng)?shù)?，也可能?huì)影響試劑性能。

據(jù)了解，檢測(cè)平臺(tái)上，熒光PCR 類檢測(cè)主要應(yīng)用探針法，而部分恒溫?cái)U(kuò)增類應(yīng)用染料法。探針法在檢測(cè)敏感性和特異性上一般優(yōu)于染料法。同時(shí)，儀器性能主要取決于內(nèi)部的光學(xué)元件、熒光收集系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)，這受價(jià)格限制，而“恒溫?cái)U(kuò)增類”儀器的價(jià)格低于“熒光PCR 類”，這些可能是此次“熒光PCR 類”組合的企業(yè)檢測(cè)成立率、敏感性、特異性、準(zhǔn)確率均好于“恒溫?cái)U(kuò)增類”的原因。

對(duì)比發(fā)現(xiàn)，也有一些檢測(cè)能力較強(qiáng)的企業(yè)，這些企業(yè)大多數(shù)檢測(cè)人員年齡適宜，配置的儀器價(jià)格相對(duì)較高，而且參加了數(shù)次培訓(xùn)，因而現(xiàn)場(chǎng)操作比較規(guī)范。

此次比對(duì)雖不能反映各屠宰企業(yè)的真實(shí)水平，但一定程度上反映了各企業(yè)的檢測(cè)能力。建議從保障人員隊(duì)伍和加強(qiáng)操作培訓(xùn)兩方面入手，提高屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)能力。提升核酸提取等加樣操作水平來(lái)提高敏感性，注意防污染措施提高特異性[3-4]，選用更可靠的檢測(cè)組合、更有針對(duì)性的采樣，最終提高準(zhǔn)確率，確保結(jié)果客觀。

4 結(jié)論

綜上所述，宜賓市屠宰企業(yè)非洲豬瘟檢測(cè)能力較為一般，監(jiān)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警效果不甚理想，有待加強(qiáng)。