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    柴葛解肌顆粒醇沉工藝對石膏成分保留及解熱作用的影響

    2020-07-06 07:33:38吳靜鳴黃曉青曹陽黃順旺
    安徽醫(yī)藥 2020年7期
    關鍵詞:金蓮生藥浸膏

    吳靜鳴,黃曉青,曹陽,黃順旺

    作者單位:1安徽天星醫(yī)藥集團有限公司,安徽 合肥230601;2合肥創(chuàng)新醫(yī)藥技術有限公司,安徽 合肥230088

    柴葛解肌顆粒系根據(jù)經(jīng)典名方明代陶華所著《傷寒六書》收載的“柴葛解肌湯”研制而成的中藥六類新藥,由柴胡、葛根、羌活、白芷、黃芩、甘草、大棗、石膏等11味藥材組成,具有解肌清熱功效,臨床用于治療感冒、流行性感冒等,治療小兒高熱不退,并具有熱退不反復的顯著療效。原方為湯劑,本研究擬采用水提醇沉工藝將該經(jīng)典名方開發(fā)成為臨床療效好,服用量小,病人依從性好的現(xiàn)代中成藥。

    該處方中石膏為臣藥,清內(nèi)郁之熱,文獻報道其主要成分為含水硫酸鈣[1],鈣離子為石膏中所含的主要離子成分,石膏對動物造模所致的發(fā)熱具有一定的解熱作用。本研究于2018年5月至2019年2月對柴葛解肌顆粒提取純化工藝中醇沉前后浸膏中鈣離子進行含量測定并對解熱藥效作用進行對比研究,說明生產(chǎn)工藝選擇醇沉的合理性。

    1 材料

    1.1 儀器 KDM型可調(diào)控溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司);Laws-500T型純化水機(杭州永潔達凈化科技有限公司);STW0101型山佳高精度數(shù)字式電子體溫計[山佳國際工貿(mào)(天津)有限公司]。

    1.2 試藥 柴胡、葛根、羌活、白芷、石膏(含水硫酸鈣含量為96.5%)等11味藥材購于安徽普仁中藥飲片有限公司;乙二胺四醋酸二鈉(西隴化工股份有限公司);鈣黃綠素(天津市光復精細化工研究所);2,4-二硝基苯酚(上海試劑三廠);大腸桿菌標準菌株(安徽省食品藥品檢驗研究院提供);金蓮清熱顆粒(寧夏啟元藥業(yè)有限公司,生產(chǎn)批號20170609);所用試劑均為分析純。

    1.3 動物 SPF級SD大鼠53只,體質(zhì)量范圍為200~220 g,動物合格證號34000200000367,由安徽省實驗動物中心提供;普通級家兔30只,體質(zhì)量范圍為1.8~2.2 kg,動物合格證號0030686,由南京安立默科技有限公司提供。

    2 方法與結果

    2.1 醇沉前后浸膏相關成分含量

    2.1.1 醇沉前后浸膏的制備 柴胡、羌活、白芷和生姜四味藥材提取揮發(fā)油;以上藥渣與葛根、甘草、白芍等其余七味藥材合并加10倍量純化水煎煮2次,每次2 h,濾過。合并上述各濾液,濾液按重量分為均等兩份,一份濾液濃縮至含原藥材0.1 g/mL,以備測定醇沉前鈣離子含量用;另一份濾液濃縮至相對密度為1.15左右(80℃)的浸膏,放冷,加入乙醇至含醇量為50%,靜置24 h,濾過,回收乙醇至無醇味,用純化水調(diào)至含原藥材0.1 g/mL,以備測定醇沉后鈣離子含量用,做3次平行試驗。

    2.1.2 試劑配制 EDTA-2Na(乙二胺四醋酸二鈉)溶液的配制[1]:取EDTA-2 Na·H2O 18.61 g,溶于約300 mL適宜溫度的去離子水中,冷卻后稀釋至1 L,搖勻即得EDTA-2Na滴定溶液(0.05 mol/L)。鈣指示劑的配制[2]:取鈣黃綠素0.3 g,加氯化鉀30 g,研磨均勻,即得。

    2.1.3 陰性對照試驗 依據(jù)本品處方比例制備不含石膏的陰性對照溶液,按照2.1.4項下方法進行測定,測得消耗EDTA-2 Na滴定液(0.05 mol/L)為0 mL,結果表明對照溶液對測定無干擾。

    2.1.4 鈣離子含量的測定 精密吸取上述醇沉前和醇沉后溶液各5 mL,加純化水20 mL,氫氧化鈉溶液調(diào)pH>12,加入少許鈣指示劑,用EDTA-2 Na滴定溶液(0.05 mol/L)進行滴定,直至溶液由紫紅色變?yōu)榧兯{色時為止。根據(jù)EDTA-2 Na滴定液消耗量計算鈣離子含量。每1毫升EDTA-2 Na滴定液(0.05 mol/L)相當于8.608 mg的含水硫酸鈣[1-5]。

    2.1.5 水煎醇沉前后鈣離子煎出量試驗結果 柴葛解肌顆粒水煎醇沉前、水煎醇沉后鈣離子煎出量試驗結果見表1。

    表1 醇沉前后鈣離子煎出量試驗結果(n=3)

    根據(jù)表1,柴葛解肌顆粒水煎醇沉前后含水硫酸鈣含量比較,醇沉后含量減少接近1/3。

    2.2 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)統(tǒng)計處理,結果用表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計意義。

    2.3 藥效學考察[6?15]

    2.3.1 醇沉前后浸膏對2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型的影響 選取體溫正常(37.0~38.0℃)、測定2次體溫后溫差≤0.3℃的大鼠53只,分成四組,分別為0.9%氯化鈉溶液組(0.70 mL/100 g)、陽性對照組(金蓮清熱顆粒2.3 g/kg)、醇沉前組(7.2 g生藥/kg,0.70 mL/100 g)、醇沉后組(7.2 g生藥/kg,0.70 mL/100 g),每只大鼠背部皮下注射2,4-二硝基苯酚20 mg/kg,當體溫升高1℃左右時,各組大鼠分別灌胃相應藥物或0.9%氯化鈉溶液,在給藥后每隔1 h測肛溫1次,連續(xù)測定3 h。見表2。

    表2結果顯示:與0.9%氯化鈉溶液組比較,給藥后2 h和3 h,陽性對照藥金蓮清熱顆粒,醇沉前和醇沉后均可降低大鼠發(fā)熱體溫(P<0.05或P<0.01);金蓮清熱顆粒組,醇沉前組和醇沉后組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    2.3.2 醇沉前后浸膏對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型的影響 實驗前間隔30 min測兩次肛溫,以波動不大于0.2℃者為受試動物,取其均值為基礎溫度。取體溫符合解熱實驗要求的家兔分為四組,分別為0.9%氯化鈉溶液組(5 mL/kg),陽性對照組(金蓮清熱顆粒1.7 g/kg),醇沉前組(5.2 g生藥/kg,5.03 mL/kg),

    表2 醇沉前后浸膏對2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型的影響/(℃,)

    表2 醇沉前后浸膏對2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型的影響/(℃,)

    注:與0.9%氯化鈉溶液組相比較,aP<0.01,bP<0.05;造模后,金蓮清熱顆粒組、醇沉前組、醇沉后組之間比較,P>0.05

    組別0.9%氯化鈉溶液組金蓮清熱顆粒組醇沉前組醇沉后組給藥后鼠數(shù)13 13 14 13劑量0.7 mL/100 g 2.3 g/kg 7.2 g生藥/kg 7.2 g生藥/kg造模前37.5±0.2 37.5±0.3 37.5±0.3 37.5±0.3造模后39.9±0.6 39.9±0.8 39.8±0.3 39.9±0.4 3 h 39.3±0.3 38.7±0.4a 38.7±0.2a 38.7±0.5b 1 h 39.9±0.7 39.5±0.6 39.4±0.4 39.4±0.6 2 h 39.5±0.3 38.9±0.3a 38.9±0.3a 39.1±0.4b

    表3 醇沉前后浸膏對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型的影響/(℃)

    表3 醇沉前后浸膏對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型的影響/(℃)

    注:與0.9%氯化鈉溶液組相比較,aP<0.01,bP<0.05;造模后,金蓮清熱顆粒組、醇沉前組、醇沉后組之間比較,P>0.05

    給藥后組別 劑量 兔數(shù) 基礎體溫 造模后0.9%氯化鈉溶液組金蓮清熱顆粒組醇沉前組醇沉后組4 h 40.2±0.5 40.1±0.3 40.1±0.3 40.1±0.3 5 mL/kg 1.7 g/kg 5.2 g生藥/kg 5.2 g生藥/kg 7 8 8 7 39.5±0.4 39.5±0.3 39.5±0.3 39.5±0.3 40.9±0.2 41.0±0.3 40.9±0.3 40.9±0.4 1 h 41.2±0.3 40.9±0.3 40.9±0.4 40.9±0.4 2 h 41.5±0.4 40.9±0.3a 40.6±0.4a 40.6±0.4a 3 h 40.9±0.5 40.5±0.3b 40.5±0.4b 40.5±0.4

    醇沉后組(5.2 g生藥/kg,5.03 mL/kg)。每組家兔靜脈注射大腸桿菌液(106/kg)造模。選擇體溫升高高于1℃的家兔,分別灌胃相應藥物或0.9%氯化鈉溶液,觀察給藥后1、2、3、4 h時各組家兔直腸溫度變化。見表3。

    表3結果顯示:與0.9%氯化鈉溶液組比較,給藥后2h,金蓮清熱顆粒、醇沉前和醇沉后可降低家兔發(fā)熱體溫(P<0.01),給藥后3 h,醇沉前和金蓮清熱顆粒均可降低家兔發(fā)熱體溫(P<0.05);金蓮清熱顆粒組,醇沉前組和醇沉后組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    3 討論

    處方中的石膏清熱瀉火,除煩止渴??诜嗉鍎?jīng)胃酸作用后,一部分可變?yōu)榭扇苄遭},經(jīng)腸吸收入血,增加血中鈣離子濃度,調(diào)節(jié)體溫中樞而解熱[1]。本研究參照相關文獻[1-5],采用絡合滴定法測定鈣離子在醇沉前后浸膏的溶出情況,考察藥液中石膏含量,測定結果可靠、靈敏。

    考察柴葛解肌顆粒處方工藝在醇沉前后浸膏對2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型和對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型的影響,兩種浸膏均具有一定的解熱作用,且金蓮清熱顆粒組,醇沉前組和醇沉后組之間比較,差異無統(tǒng)計學意義。

    因此,本醇沉工藝(含醇量為50%)雖然鈣離子含量減少接近1/3,但從藥效學(解熱)角度分析仍具有一定的可行性,為柴葛解肌顆粒的提純工藝提供理論支持。

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