HPLC測(cè)定頭痛寧膠囊中大黃素的含量

梁曉莉

(陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，陜西 咸陽 712000)

HPLC測(cè)定頭痛寧膠囊中大黃素的含量

梁曉莉*

(陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，陜西 咸陽 712000)

目的：建立頭痛寧膠囊中大黃素的含量測(cè)定方法。方法：采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇-1%冰醋酸溶液(75∶25)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果：大黃素在10.8～54.0 μg·mL-1呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均回收率為100.56%，RSD=1.26%(n=6)。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于頭痛寧膠囊中大黃素的質(zhì)量控制。

頭痛寧膠囊；HPLC；大黃素；含量測(cè)定

頭痛寧膠囊是由天麻、制何首烏、防風(fēng)、當(dāng)歸等6味中藥組成的中成藥，具有熄風(fēng)滌痰、逐瘀止痛的功能。用于偏頭痛，緊張性頭痛屬痰瘀阻絡(luò)證，證見：痛勢(shì)甚劇，或攻沖作痛，或痛如錐刺，或連及目齒，伴目眩畏光，胸悶脘脹，惡心嘔吐，急躁易怒，反復(fù)發(fā)作[1]。大黃素是何首烏中主要藥效成分，具廣泛的生物活性，包括抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等作用[2]。為能有效控制頭痛寧膠囊的質(zhì)量，保證用藥安全，對(duì)頭痛寧膠囊原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以大黃素為指標(biāo)性成分的含量測(cè)定方法進(jìn)行研究?jī)?yōu)化。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；AG-135型電子天平(瑞士Mettler-Toledo)；KQ-300VDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限責(zé)任公司)。

1.2試藥

對(duì)照品大黃素(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0756-200211，供含量測(cè)定用)；頭痛寧膠囊(陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，批號(hào)：20140301，20140302，20140303，規(guī)格：0.4g/粒)；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：KromasilC18(150mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸溶液(75∶25)；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于4000；用外標(biāo)法計(jì)算含量。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液 取大黃素對(duì)照品，精密稱定，加甲醇溶解，制成含大黃素0.108mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液 取膠囊內(nèi)容物約1g，精密稱定，置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足重量，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.3陰性樣品溶液 按處方比例稱取除制何首烏以外的其余藥味，按頭痛寧膠囊制備工藝制成缺制何首烏的陰性樣品，按照2.2.2項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各20μL，按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，大黃素的保留時(shí)間約6.48min，供試品色譜中大黃素峰與雜峰分離效果良好，陰性對(duì)照樣品在相應(yīng)位置上無干擾峰。見圖1。

A.大黃素對(duì)照品 B.供試品 C.缺制何首烏的陰性對(duì)照品1.大黃素圖1 頭痛寧膠囊及對(duì)照品HPLC圖

2.4線性關(guān)系考察

以質(zhì)量濃度為0.108mg·mL-1的大黃素對(duì)照品溶液作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL置于10mL量瓶中，用甲醇定容，分別得質(zhì)量濃度為10.8，21.6，32.4，43.2，54.0μg·mL-1的對(duì)照品溶液。分別精密吸取20μL注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，并以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X，μg·mL-1)進(jìn)行線性回歸，得線性方程Y=74.109X-1.476 0，r=0.999 9，結(jié)果表明大黃素在10.8～54.0 μg·mL-1呈良好線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

吸取質(zhì)量濃度為21.6μg·mL-1的大黃素對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果大黃素峰面積RSD=0.69%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取頭痛寧膠囊(批號(hào)：20140301)內(nèi)容物約1g，精密稱定，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件，精密吸取供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10h進(jìn)樣，記錄大黃素峰面積，RSD=0.92%(n=6)，結(jié)果表明頭痛寧膠囊供試品在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取頭痛寧膠囊(批號(hào)：20140301)內(nèi)容物約1g，精密稱定，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件，分別測(cè)定，記錄峰面積。計(jì)算供試品中大黃素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.525 2mg·g-1，RSD=0.44%(n=6)，表明供試品重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn)

取已知濃度的頭痛寧膠囊(批號(hào)：20140301)內(nèi)容物約0.5g，共6份，精密稱定，加入具塞錐形瓶中，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.108mg·mL-1的對(duì)照品溶液2mL，再精密加入甲醇18mL，精密稱定，超聲處理30min，放置室溫，精密稱定，用甲醇補(bǔ)足重量。按照2.2.2供試品制備方法，依2.1項(xiàng)色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.9供試品含量測(cè)定

取20140301，20140302，201403033批頭痛寧膠囊裝量差異項(xiàng)下的樣品內(nèi)容物，按2.2項(xiàng)下操作，制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算大黃素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果分別為0.525 2，0.520 6，0.532 6mg·g-1。

表1 頭痛寧膠囊中大黃素加樣回收率試驗(yàn)

注：大黃素對(duì)照品加入量均為0.216 mg

3 討論

參考《中國(guó)藥典》2010年版一部及文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)大黃素含量測(cè)定方法進(jìn)行考察。以甲醇為溶劑，分別考察了超聲提取、加熱回流等方法的提取效果[5]，其中超聲提取法的提取效果最好。在流動(dòng)相系統(tǒng)的選擇中，比較甲醇-1%冰醋酸(70∶30)、甲醇-0.1%磷酸(80∶20)、乙腈-水(80∶20)等流動(dòng)相[6-7]，結(jié)果選用甲醇-1%冰醋酸溶液(75∶25)為流動(dòng)相能達(dá)到滿意的分離效果，供試品中大黃素峰達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱且分離度較好，出峰時(shí)間縮短為6.84 min。

為控制頭痛寧膠囊的質(zhì)量，保證用藥安全有效，本研究以大黃素為指標(biāo)性成分進(jìn)行方法學(xué)考察，與頭痛寧膠囊原標(biāo)準(zhǔn)比較，其分離度更好，出峰時(shí)間縮短，檢測(cè)結(jié)果更加精準(zhǔn)，表明該方法穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性好，可全面反映頭痛寧膠囊的質(zhì)量，為頭痛寧膠囊中大黃素質(zhì)量控制的進(jìn)一步提高提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)部分[S].經(jīng)絡(luò)·肢體·腦系分冊(cè).2002：59-61.

[2] 丁艷，黃志華.大黃素藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理與臨床，2007，23(5)：235-238.

[3] 王梅，唐志華，宋忠興.頭痛寧膠囊中大黃素轉(zhuǎn)移率的研究[J].陜西中醫(yī)，2007，28(10)：1401-1402.

[4] 李慶杰，劉永強(qiáng)，常艷茹，等.頭痛寧片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(10)：2011-2012.

[5] 葉其蓁，周子曄，林觀樣.浙產(chǎn)何首烏根與葉中大黃素含量比較[J].中國(guó)藥業(yè)，2012，21(3)：3-4.

DeterminationofEmodininToutongningCapsulesbyHPLC

LIANG Xiaoli

(Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xianyang 712000，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of the content of emodin in extracts of Toutongning Capsules.Methods：HPLC was applied.Diamonsil(R)C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)was used as the chromatographic column with methanol-1% glacial acetic acid(75∶25)as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1，which was determined under 254 nm.The column temperature was 30 ℃.Results：The linear range of emodin was 10.8～54.0 μg·mL-1(r=0.999 9)with an average recovery of 100.56%(RSD=1.26%，n=6).Conclusion：This method is simple and accurate，with good specificity and repeatability，which can serve as a scientific quantitative analysis methed for Toutongning capsules.

Toutongning capsules；HPLC；Emodin；Content determination

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梁曉莉，工程師，研究方向：中藥制劑檢驗(yàn)；E-mail：409121544@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.013

2014-07-14)