2939例臨床患者CD4+CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果的回顧性分析

唐甜，張子寧，傅雅靜，王亞男，姜擁軍，耿文清，郭曉臨，尚紅

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，衛(wèi)生部艾滋病免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110001）

T淋巴細(xì)胞亞群是免疫系統(tǒng)重要組成部分，在免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮中樞作用。T淋巴細(xì)胞亞群通常分為2類：一類是CD4+CD8-T細(xì)胞表面僅表達(dá)CD4，具有輔助細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答的作用；另一類是CD4-CD8+T細(xì)胞，表面表達(dá)CD8，具有細(xì)胞毒作用，可特異性殺傷靶細(xì)胞。正常人外周血中大部分為CD4或CD8單陽(yáng)性T細(xì)胞，CD4+CD8+雙陽(yáng)性（double positive，DP）T細(xì)胞一般＆lt;5%［1］。通常認(rèn)為，CD4+CD8+DP T細(xì)胞的形成是胸腺中尚未成熟的細(xì)胞釋放到外周循環(huán)的結(jié)果。但近年的研究顯示，相當(dāng)數(shù)量的CD4+CD8+DP T細(xì)胞存在于人和動(dòng)物的外周血循環(huán)中。尤其在某些病毒感染性疾病、腫瘤、自身免疫病中，CD4+CD8+DP T細(xì)胞顯著增加。但這群細(xì)胞對(duì)于臨床疾病輔助診斷的意義還不明確。我們通過(guò)調(diào)查中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2 939例內(nèi)科患者以及2 722例健康對(duì)照T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果，分析CD4+CD8+DP T細(xì)胞在不同疾病和年齡患者中的變化情況，為進(jìn)一步明確這類外周血淋巴細(xì)胞亞群對(duì)疾病的輔助診斷提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象：2012年1月至2012年9月首次來(lái)我院檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群的內(nèi)科2 939例患者的全血樣本以及健康對(duì)照2 722例全血樣本。

1.1.2 試劑和儀器：試劑均購(gòu)自BD Biosciences公司，包括CD4/CD8/CD3三色試劑、TruCount絕對(duì)計(jì)數(shù)管、10倍免洗溶血素。BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀。

1.2 方法

將20 μL CD4/CD8/CD3 TriTEST試劑加入CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)管中，采用反向加樣的方法加入50 μL抗凝全血，室溫避光15 min，加入免洗溶血素450 μL，室溫避光15 min，應(yīng)用BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀，F(xiàn)ACS MΜLTISET軟件檢測(cè)并進(jìn)行自動(dòng)分析，計(jì)算DP T細(xì)胞的百分含量（CD4+CD8+DP T細(xì)胞百分含量＆lt;5%判定為正常，反之判定為異常）［1］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理，組間差異比較采用Pearson χ2檢驗(yàn)，P＆lt;0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 全部CD4+CD8+DP T細(xì)胞檢測(cè)患者的疾病分布

2 939例臨床患者中，腎臟疾病患者1 020例（34.7%），呼吸疾病患者556例（18.9%）、腫瘤患者479例（16.2%）、皮膚病患者294例（10.0%）、風(fēng)濕免疫病患者262例（8.9%），感染疾病患者171例（5.8%），神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者91例（3.0%）和血液病患者66例（2.2%）。在這些患者中DP T細(xì)胞百分含量異常者共141例（4.8%），健康對(duì)照組中CD4+CD8+DP T細(xì)胞異常者共49例（1.8%），臨床患者與健康對(duì)照比較CD4+CD8+DP T細(xì)胞異常顯著升高（P＆lt;0.001）。

2.2 不同疾病中CD4+CD8+DP T細(xì)胞異常的比例比較

不同疾病中CD4+CD8+DP T細(xì)胞異常的例數(shù)與檢測(cè)總數(shù)的比率由高到低依次為呼吸疾病、風(fēng)濕免疫病、腫瘤、感染疾病、腎臟疾病和皮膚病。其中呼吸疾病的CD4+CD8+DP T細(xì)胞異常病例數(shù)量占檢測(cè)總數(shù)百分比最高，為6.1%（34/556）；風(fēng)濕免疫病為5.7%（15/262）；腫瘤為5.2%（25/479）；感染疾病為4.7%（8/171）；腎臟疾病為4.3%（44/1020）；皮膚病為3.7%（11/294）；神經(jīng)系統(tǒng)疾病為3.3%（3/91）；血液病為1.5%（1/66）。呼吸疾病、風(fēng)濕免疫病、腫瘤和腎臟疾病DP T細(xì)胞異?；颊弑壤@著高于健康對(duì)照（P＆lt;0.001），感染性疾病和皮膚病DP T細(xì)胞異?；颊弑壤哺哂诮】祵?duì)照（P分別＆lt;0.01和＆lt;0.05）。神經(jīng)系統(tǒng)疾病和血液病DP T細(xì)胞異?；颊弑壤c健康對(duì)照組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＆gt;0.05）。

2.3 不同疾病各年齡組CD4+CD8+DP T細(xì)胞異常的比例比較

不同疾病CD4+CD8+DP T細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果異常的患者根據(jù)年齡分為2組：低年齡組（≤65歲）和高年齡組（＆gt;65歲）。由于感染疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和血液病DP T細(xì)胞異常的病例數(shù)＆lt;10，因此未列入統(tǒng)計(jì)分析，僅把其余的6組進(jìn)行分組比較。其中，總體患者高年齡組DP T細(xì)胞異常的比例與低年齡組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（8.6%和3.9%，P＆lt;0.001），呼吸系統(tǒng)疾病患者、腫瘤患者的2個(gè)年齡組比較高年齡組DP T細(xì)胞異常比例也顯著升高（分別為10.0%和3.8%；9.9%和3.8%，P＆lt;0.05），而健康對(duì)照高低年齡組間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＆gt;0.05），見表1。

表1 不同疾病中各年齡組CD4+CD8+DP T細(xì)胞異?；颊弑容^Tab.1 Abnormal proportion of CD4+CD8+DP T cells among different age groups with different diseases

3 討論

外周血CD4+CD8+DP T細(xì)胞是一種CD4和CD8共同表達(dá)的雙陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞。關(guān)于這群細(xì)胞的來(lái)源尚不明確，以往認(rèn)為此類細(xì)胞屬于發(fā)育未完全的幼稚細(xì)胞進(jìn)入到人體血液中。但是在一些動(dòng)物研究中顯示，此類細(xì)胞具有抗原特異性記憶的功能，能夠產(chǎn)生疫苗誘導(dǎo)的記憶免疫應(yīng)答［2，3］。此外，DP T細(xì)胞對(duì)于MHCⅠ和Ⅱ類抗原作用，可以分泌Th1和Th2類細(xì)胞因子，對(duì)疫苗和自限性病毒感染抗原產(chǎn)生快速免疫應(yīng)答［4］。Suni等［5］研究使用特異性抗原（CMV和HIV）刺激DP T細(xì)胞，結(jié)果顯示，DP T細(xì)胞具有抗原特異性和增殖活性，在特異性抗原刺激下分泌的細(xì)胞因子是CD4+T細(xì)胞的8倍。Nam等［3］研究獼猴外周血DP T細(xì)胞具有輔助型和細(xì)胞毒性兩方面的功能，其細(xì)胞毒性活力與CD8+T細(xì)胞相當(dāng)，機(jī)制主要是通過(guò)穿孔素—顆粒酶途徑殺傷靶細(xì)胞。而人類DP T細(xì)胞的來(lái)源及功能特點(diǎn)尚不清楚，還需要進(jìn)一步深入研究。

研究發(fā)現(xiàn)，自體免疫?。ㄖ匕Y肌無(wú)力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化［6］、特發(fā)性血小板減少性紫癜和過(guò)敏性皮炎［7］等）以及特殊感染性疾?。℉IV［8，9］、EBV［10］和腫瘤［11～13］）DP T百分含量升高。本研究分析發(fā)現(xiàn)，DP T細(xì)胞百分含量升高的疾?。ê粑膊?、風(fēng)濕免疫病、腫瘤、感染疾病、腎臟疾病和皮膚?。┚c各種感染或免疫系統(tǒng)病變密切相關(guān)。這些疾病與健康對(duì)照比較，DP T細(xì)胞百分含量升高尤為明顯，這與以前研究結(jié)果基本一致，即主要在感染性疾病、自體免疫病和腫瘤中DP T細(xì)胞的百分含量增高。

肺部感染性疾病在臨床十分常見，特別是在免疫力相對(duì)低下的老年患者中，粗略判斷感染的大致類型：細(xì)菌性感染、病毒性感染、細(xì)菌與病毒的混合性感染及寄生蟲感染等。胡莉娜等［14］研究發(fā)現(xiàn)，71例患者中3例肺部感染患者只有雙陽(yáng)性T細(xì)胞絕對(duì)含量發(fā)生了改變，而其他指標(biāo)均無(wú)變化，這些能有效提示患者出現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的改變，有感染發(fā)生，提示檢測(cè)DP T細(xì)胞對(duì)于急性呼吸系統(tǒng)感染性疾病的診斷具有重要意義。我們研究中發(fā)現(xiàn)34例DP T細(xì)胞比例異常的呼吸疾病患者中，肺部感染或合并感染占62%和17%，非感染類疾病僅占15%，可提示感染類疾病中DP T細(xì)胞百分含量顯著增加。此外，這些患者中有4例平均年齡70歲的肺部感染患者只有雙陽(yáng)性T細(xì)胞絕對(duì)含量發(fā)生了改變，血常規(guī)檢測(cè)白細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比率均無(wú)增高。這可以有效提示患者出現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的改變。老年肺部感染患者臨床表現(xiàn)不典型，常不引起發(fā)熱，1/3老年患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)明顯升高。由此也提示我們可通過(guò)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群DP T細(xì)胞百分含量升高預(yù)示肺部感染發(fā)生。另外，在一些呼吸系統(tǒng)疾病中，腎上腺糖皮質(zhì)激素作為首選治療或輔助治療藥物，這些藥物可造成白細(xì)胞總數(shù)增高，淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞減少，因此檢測(cè)DP T細(xì)胞有助于與細(xì)菌感染所致白細(xì)胞增高進(jìn)行鑒別。因此認(rèn)為此檢測(cè)對(duì)疾病鑒別、治療療效和預(yù)后有著重要的臨床意義。

還有些研究表明某些動(dòng)物胸腺外DP T細(xì)胞的數(shù)量與年齡有關(guān)，如豬外周DP T細(xì)胞［15］、獼猴外周血DP T細(xì)胞［16］、鼠小腸DP T細(xì)胞都隨年齡增長(zhǎng)而增加［17］。Ghia等［18］研究提示隨年齡增長(zhǎng)，外周血DP T淋巴細(xì)胞不斷累積，可能與免疫衰老的機(jī)制和淋巴細(xì)胞增殖紊亂相關(guān)。而在本研究中我們發(fā)現(xiàn)健康人群中DP T百分含量隨年齡的增長(zhǎng)升高不顯著，但是在內(nèi)科患者中（尤其是呼吸內(nèi)科及腫瘤內(nèi)科），DP T百分含量升高的比例隨著年齡的增長(zhǎng)明顯。我們推測(cè)患者的DP T細(xì)胞具有一定的記憶功能和細(xì)胞毒性功能，這類細(xì)胞隨著年齡的增長(zhǎng)以及感染性疾病不斷的累積顯著升高。而在健康人中，缺乏對(duì)感染反應(yīng)的免疫記憶細(xì)胞累積，因此升高不明顯，也間接提示了DP T細(xì)胞的免疫記憶和細(xì)胞殺傷功能。

綜上所述，CD4+CD8+DP T細(xì)胞作為一類免疫細(xì)胞，在各種感染性疾病患者中，其百分含量有一定程度的升高，提示其可能具有重要的免疫學(xué)功能。因此，還需要深入研究CD4+CD8+DP T細(xì)胞對(duì)疾病診斷的價(jià)值，以明確其與疾病發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。

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