檸檬酸法提取海帶多糖及對抗氧化活性的影響

陳文寧，鄭娟霞，月金玲，楊 莉，王琤韡＊

（江西科技師范大學生命科學學院，南昌 330013）

海帶素有“海中蔬菜”之稱，是我國年產(chǎn)量最高的海藻類產(chǎn)物之一，海帶中含有豐富的多糖類物質，其中海帶多糖（Laminaria japonica polysaccharides，LJP）是主要的生物活性物質，并且具有調(diào)節(jié)免疫能力、抗腫瘤、抗菌、降血脂以及抗氧化等生理功能。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，海帶多糖是一種天然抗氧化劑[1-2]，具有一定的抗氧化活性，能夠清除過多自由基或抑制自由基的生成，同時有效降低脂質過氧化物含量，提高過氧化物酶與超氧化物歧化酶的活性，所以海帶多糖是一種極具前景的功能性且無毒性的強抗氧化物質[3-4]。在動物生產(chǎn)中，斷奶仔豬常常因為高溫而產(chǎn)生抗熱應激反應，導致體內(nèi)氧化物質堆積、免疫系統(tǒng)失調(diào)、生長性能下降等，造成損失。因此，海帶多糖常被用做動物生產(chǎn)中的一種飼料添加劑。本試驗通過檸檬酸提取法提取海帶多糖，并檢測其抗氧化活性強弱，為海帶多糖更好地應用于畜牧業(yè)上提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 試驗材料

干海帶購于江西省南昌市市場，粉碎待用。

1.1.2 試驗試劑

無水乙醇、檸檬酸、氫氧化鉀、1，1-2-苦基肼基（1，1-diphenyl-2- picrylhy- drazyl，DPPH），均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3 試驗器材

本試驗所使用儀器規(guī)格見表1。

1.2 試驗方法

1.2.1 粗海帶多糖提取工藝流程及操作要點

海帶干粉→按一定的液料比加入檸檬酸溶液（pH=2）→離心→取上清液，用氫氧化鉀調(diào)pH至中性→濃縮→醇沉（乙醇最終濃度為80%）→4℃靜置8h→抽濾得沉淀物→無水乙醇洗滌脫水→烘干→海帶粗多糖

表1 試驗所需儀器

本試驗參考盧茳虹等[5]研究得到試驗方法進行提取，將干海帶粉碎，檸檬酸溶液（pH=2）浸取，抽濾，合并濾液，加入氫氧化鉀調(diào)節(jié)中性pH，濃縮，在4℃靜置8h進行3次醇沉（乙醇最終濃度為80%），再進行抽濾得到沉淀物，用無水乙醇洗滌脫水，用干燥箱烘干得到海帶粗多糖。

1.2.2 DPPH自由基清除能力

配制DPPH自由基的乙醇溶液(0.2 mmol/L，溶于無水乙醇)，并將海帶多糖溶液稀釋為0.9mg/mL。將2 mLDPPH 及2mL.海帶多糖稀釋溶液在試管振蕩混勻,在室溫下避光靜置30min，在517nm 處測量其吸光度值Ai；用2mL無水乙醇與2mL蒸餾水充分震蕩混勻調(diào)零；對照試驗以2mLDPPH 與2mL無水乙醇震蕩混勻在測定波長517nm處的吸光度值Ae；2mL 海帶多糖溶液和2mL 無水乙醇震蕩混勻后的吸光值為Aj；海帶多糖對DPPH 自由基清除能力用清除率R 表示：R/%=[1－（Ai－Aj）/Ae]×100。 IC50值也是表示抗氧化能力的一個指標，代表自由基清除率R達到50%時的樣品濃度，IC50值越低，抗氧化劑的自由基清除能力越低。

2 結果與分析

表1 海帶多糖的DPPH自由基清除能力

海帶多糖的DPPH 自由基清除率見表1，結果表明，檸檬酸提取法得到的粗多糖濃度為0.9mg/mLDPPH 自由基清除率為（28.99±0.85）%，經(jīng)檸檬酸提取法提取的粗多糖具有一定的抗氧化活性。

3 討論

機體內(nèi)代謝產(chǎn)生的自由基主要有DPPH自由基、羥基自由基、陰離子自由基、脂質自由基、氮氧化自由基等，自由基是機體代謝產(chǎn)生的一類氧化性極強的物質，具有攻擊生物分子的功能和較高的氧化水平，誘導DNA 及染色體結構損壞、干擾細胞代謝、破壞蛋白質活性和酶體系，從而加速機體的衰老[6]，而海帶多糖具有較強的抗氧化活性，對自由基具有較強的清除能力，自由基清除率也是常用的測定抗氧化活性的指標之一。祁玉麗等（2019）研究了五味子總多糖（WPS）的DPPH自由基清除活性，抗氧化試驗表明，WPS具有一定的DPPH 自由基的清除能力，當濃度為1.0mg/mL 時，WPS 對DPPH 自由基的清除率達到98.7%[7]。同樣，李珊珊等（2019）研究了當西洋參果總多糖（WQBP）濃度為1.0mg/mL 時，DPPH 自由基的清除率可達82.1%[8]。趙鶴鵬等（2017）研究了玉米須多糖的抗氧化作用，抗氧化試驗結果表明，玉米須多糖清除DPPH 自由基的IC50值為0.44mg/mL[9]。因此，本試驗以DPPH 自由基清除率為檢測海帶多糖抗氧化活性指標。

本試驗結果顯示，檸檬酸提取法得到的粗多糖濃度為0.9mg/mLDPPH 自由基清除率為（28.99±0.85）%。何傳波等（2013）對海帶多糖的DPPH自由基的清除活性進行了研究，結果顯示，海帶多糖對DPPH 自由基有良好的清除能力[10]。孫海森（2012）研究了海帶巖藻多糖硫酸酯清除DPPH自由基的能力，結果表明，海帶巖藻多糖硫酸酯濃度為1.0mg/mL時，海帶巖藻多糖硫酸酯對DPPH 自由基的清除率為23.83%[11]。賈彥明等（2010）研究了海帶多糖體外對DPPH自由基的清除能力，試驗結果表明，海帶多糖對DPPH自由基有良好的清除效果，海帶多糖C1質量濃度為0.9mg/mL 時，DPPH 自 由 基 的 清 除 率 為40%[12]。本試驗的試驗結果與此相比較，檸檬酸提取得到的粗海帶多糖具有一定的DPPH自由基的清除能力，即具有一定的抗氧化活性。

4 小結

綜上所述，本試驗研究了檸檬酸提取得到的粗海帶多糖的抗氧化活性，試驗結果表明，檸檬酸提取法提取得到的海帶粗多糖0.9mg/mL 時，DPPH自由基清除率為28.99%，因此，海帶多糖具有良好的抗氧化活性。