適合桑枝基質(zhì)栽培的秀珍菇優(yōu)良菌株的篩選

鄒湘月 肖建中 楊 勇 邵元元 顏新培 李飛鳴

(1湖南省蠶?？茖W(xué)研究所，湖南長(zhǎng)沙 410127；2湖南桑葉加農(nóng)業(yè)科技有限公司，湖南寧鄉(xiāng) 410600)

秀珍菇(Pleurotusgeesteranus)，又名袖珍菇、小平菇，屬于擔(dān)子菌門(mén)傘菌綱傘菌目側(cè)耳科側(cè)耳屬的大型真菌，20世紀(jì)90年代從臺(tái)灣引進(jìn)到大陸栽培，因其具有高蛋白、低脂肪的特點(diǎn)和脆嫩爽滑的口感而頗受?chē)?guó)內(nèi)外消費(fèi)者的歡迎[1-2]。目前，秀珍菇的袋料栽培基質(zhì)以木屑和棉籽殼為主，但是隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不斷攀升的材料價(jià)格迫使種植戶(hù)不得不尋求新的優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)基質(zhì)原料。桑枝作為蠶桑生產(chǎn)中生物量最大的副產(chǎn)物，來(lái)源廣泛而穩(wěn)定，并且桑枝還富含纖維素、木質(zhì)素、粗蛋白等適合食用菌生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)成分[3]，開(kāi)發(fā)利用桑枝作為培養(yǎng)基質(zhì)培育秀珍菇，不僅能為食用菌產(chǎn)業(yè)提供大量可再生的基質(zhì)原料，解決蠶區(qū)廢棄物的有效利用，還能在一定程度上增加蠶桑產(chǎn)業(yè)的附加值[4]。本試驗(yàn)對(duì)目前湖南省主栽的秀珍169、基因2005、秀71號(hào)、臺(tái)秀57、秀珍菇188等5個(gè)秀珍菇品種進(jìn)行了出菇品種比較試驗(yàn)，以期篩選出適合湖南當(dāng)?shù)卦耘嗟囊陨Ｖ榕囵B(yǎng)基質(zhì)的秀珍菇優(yōu)良菌株，達(dá)到高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效的目的。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株 秀珍169(X1)、基因2005(X2)、秀71號(hào)(X3)、臺(tái)秀57(X4)、秀珍菇188(X5)，目前湖南省種植面積較大的秀珍菇品種，菌種從相關(guān)食用菌制種單位引進(jìn)(表1)，經(jīng)編號(hào)后擴(kuò)大培養(yǎng)，采用同一品種等級(jí)進(jìn)行出菇試驗(yàn)。

表1 供試秀珍菇菌種及來(lái)源

供試菌株編號(hào)品種名稱(chēng)菌種來(lái)源X1秀珍169湖南省食用菌研究所X2基因2005湖南省食用菌研究所X3秀71號(hào)湖南省食用菌研究所X4臺(tái)秀57湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌研究所X5秀珍菇188湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌研究所

1.1.2 主要試劑與材料 葡萄糖、酵母膏、瓊脂、KH2PO4、MgSO4等試劑，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，均為分析純；馬鈴薯、棉籽殼、麥麩、石灰和石膏等，均購(gòu)自當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；桑枝，來(lái)源于湖南省蠶?？茖W(xué)研究所桑園圃。

1.1.3 主要儀器設(shè)備 YXQ-LS-50SII型立式壓力蒸汽滅菌鍋，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品；PL203電子天平，梅特勒一托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品；DHG-9140恒溫干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；SW-CJ-2FO超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品；其他為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)設(shè)備及耗材。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備 (1)母種培養(yǎng)基(PDA加富培養(yǎng)基)：馬鈴薯200.0 g，葡萄糖20.0 g，瓊脂20.0 g，KH2PO43.0 g，MgSO41.5 g，酵母膏2.0 g，蛋白胨2.0 g，自來(lái)水1 000 mL，自然pH值。(2)原種培養(yǎng)基：桑枝屑70%，麥麩28%，石灰2%，含水量65%。(3)栽培種培養(yǎng)基：桑枝屑60%，棉籽殼25%，麥麩12%，石膏1%，石灰2%[5]。

1.2.2 母種活化及原種培養(yǎng) 按無(wú)菌化操作要求，將每個(gè)秀珍菇菌株的母種分別取黃豆粒大小轉(zhuǎn)接于母種培養(yǎng)基中，25 ℃培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)6 d，取生長(zhǎng)旺盛的頂端菌絲轉(zhuǎn)接到新的母種培養(yǎng)基內(nèi)，獲得活化好的菌絲。將培養(yǎng)料按1.2.1(2)項(xiàng)的配制方法攪拌均勻后，裝在14.00 cm×28.00 cm×0.05 cm的聚丙烯袋中，每袋濕質(zhì)量0.4 kg，每個(gè)品種裝6袋，共計(jì)30袋，高溫高壓滅菌后接入不同菌株菌種，做好標(biāo)記后置于25 ℃組織培養(yǎng)室暗培養(yǎng)20 d左右，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)菌袋后備用。

1.2.3 栽培種的制作 取干燥度在70%以上且無(wú)霉變的桑枝，粉碎成粒徑3～5 mm，按1.2.1(3)項(xiàng)的配制方法攪拌均勻后，裝在規(guī)格為17.00 cm×33.00 cm×0.05 cm的聚丙烯袋中，每袋干料質(zhì)量0.6 kg，高溫高壓滅菌后按無(wú)菌操作規(guī)程接入原種。每個(gè)菌株接種50袋，3個(gè)重復(fù)，合計(jì)150袋；5個(gè)菌株共計(jì)接種750袋。

1.2.4 菌絲培養(yǎng) 將接種后的菌袋移入到溫度25 ℃、相對(duì)濕度70%～80%、經(jīng)過(guò)消毒且通風(fēng)良好的組織培養(yǎng)室內(nèi)暗培養(yǎng)，接種培養(yǎng)2 d后觀察菌絲萌發(fā)吃料的情況，留意是否有菌袋污染并及時(shí)撿出，菌絲培養(yǎng)大約1個(gè)月后即可滿(mǎn)袋。分別記錄各菌株在母種培養(yǎng)基、栽培種培養(yǎng)基上菌絲萌發(fā)的時(shí)間，在定植后測(cè)量菌絲生長(zhǎng)量及生長(zhǎng)勢(shì)，計(jì)算生長(zhǎng)速度，對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析。

菌絲日均生長(zhǎng)速度(mm/d)=生長(zhǎng)量(mm)/培養(yǎng)天數(shù)(d)

1.2.5 出菇管理 菌絲培養(yǎng)完成后，降溫至12 ℃刺激出菇，現(xiàn)蕾后啟用加濕器保持恒定相對(duì)濕度80%～90%，當(dāng)菌蓋展開(kāi)4～5 cm品相最佳時(shí)采收，以各潮次產(chǎn)量總和測(cè)定品種的生長(zhǎng)性能及生物學(xué)效率，出菇期間記錄子實(shí)體農(nóng)藝性狀及菌袋污染率。

生物學(xué)效率(%)=(子實(shí)體鮮質(zhì)量/培養(yǎng)料干質(zhì)量)×100

1.2.6 數(shù)據(jù)分析 各菌株試驗(yàn)均設(shè)置3個(gè)重復(fù)，對(duì)原始數(shù)據(jù)先進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化或歸一化處理后，再采用Excel 2003進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌株菌絲體在母種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況

從表2可以看出，接種后5個(gè)不同秀珍菇菌株均可以在母種培養(yǎng)基上正常萌發(fā)生長(zhǎng)，其中X3號(hào)菌株雖然萌發(fā)較遲，但生長(zhǎng)速度最快，為10.13±1.22 mm/d，且長(zhǎng)勢(shì)良好，說(shuō)明該菌株菌絲對(duì)母種培養(yǎng)基中含量高的單一養(yǎng)分具有較強(qiáng)的分解利用能力；而X2號(hào)菌株的菌絲生長(zhǎng)速度也高達(dá)10.04±0.74 mm/d，僅次于X3號(hào)菌株，與X3號(hào)菌株之間無(wú)顯著差異，且菌絲濃密粗壯、潔白整齊；從菌絲表現(xiàn)來(lái)看，生長(zhǎng)速度最慢的是X1、X4和X5號(hào)菌株，平均生長(zhǎng)速度都在10.00 mm/d以下，與X2和X3號(hào)菌株之間差異顯著，且菌絲長(zhǎng)勢(shì)一般。究其原因，應(yīng)與品種的生長(zhǎng)特性及各菌株菌絲對(duì)溫度等條件要求不同有關(guān)。此外，從表2還可以看出，各供試菌株菌絲長(zhǎng)勢(shì)和生長(zhǎng)速度有一定的相關(guān)性，X3號(hào)菌株的菌絲生長(zhǎng)最快，而且菌絲濃密粗壯、潔白整齊，X2和X4號(hào)菌株次之，X1和X5號(hào)菌株生長(zhǎng)速度慢、菌絲稀疏不齊。

表2 不同菌株菌絲體在母種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況

供試菌株編號(hào)萌發(fā)時(shí)間/d菌絲日均生長(zhǎng)速度/(mm/d)菌絲外觀菌絲長(zhǎng)勢(shì)X118.66±0.87 c色淡、較稀疏、不整齊+X2110.04±0.74 a濃密、潔白、整齊+++X3210.13±1.22 a濃密粗壯、潔白、整齊+++X419.05±0.96 b菌絲直立、潔白、較粗壯++X518.87±1.13 c稀疏、潔白、不整齊++

表中數(shù)據(jù)后的小寫(xiě)英文字母不同表示差異顯著(P<0.05)；“+++”表示菌絲長(zhǎng)勢(shì)旺盛、整齊，“++”表示長(zhǎng)勢(shì)中等、粗細(xì)不均，“+”表示長(zhǎng)勢(shì)較弱。表3和表5相同。

2.2 不同菌株菌絲體在栽培種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況

桑枝富含纖維素和木質(zhì)素，可以為秀珍菇菌絲的生長(zhǎng)發(fā)育提供豐富的碳源，但粗蛋白含量不高(5.44%)，導(dǎo)致秀珍菇的氮素營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)不足，所以菌絲在栽培種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)低于母種培養(yǎng)基。從表3可以看出，接種后，菌絲在栽培種培養(yǎng)基上萌發(fā)時(shí)間都需要2 d。從日均生長(zhǎng)速度比較分析，以X2號(hào)菌株的菌絲生長(zhǎng)速度最快，達(dá)到了7.04±0.54 mm/d，與其他菌株存在顯著差異；平均生長(zhǎng)速度最慢的是X5號(hào)菌株，為3.87±0.34 mm/d，且菌絲長(zhǎng)勢(shì)較差，后期伴有發(fā)黃、菌絲生長(zhǎng)受阻的現(xiàn)象，分析原因可能是試驗(yàn)所設(shè)定的桑枝栽培料配方所含碳氮比不適合X5號(hào)菌株的生長(zhǎng)發(fā)育，從而導(dǎo)致該菌株的菌絲表現(xiàn)不佳。

表3 不同菌株菌絲體在栽培種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況

供試菌株編號(hào)萌發(fā)時(shí)間/d菌絲日均生長(zhǎng)速度/(mm/d)菌絲外觀菌絲長(zhǎng)勢(shì)X125.86±0.37 b潔白、濃密、較整齊++X227.04±0.54 a濃白、粗壯、整齊+++X326.13±0.72 b較濃密、生長(zhǎng)旺盛+++X425.05±0.46 c粗細(xì)不均、較濃密、潔白++X523.87±0.34 d細(xì)弱、稀疏、發(fā)黃+

2.3 供試菌株子實(shí)體的農(nóng)藝性狀

不同秀珍菇菌株的子實(shí)體，在同一培養(yǎng)條件下，其農(nóng)藝性狀各項(xiàng)指標(biāo)存在著一定的差異(表4)。從觀察結(jié)果可以看出，供試菌株多為叢生，子實(shí)體菌蓋顏色整體呈現(xiàn)深褐色或灰褐色，其中X4號(hào)菌株雖然培菌期間菌絲表現(xiàn)一般，但出菇的子實(shí)體菇型好，菌柄粗長(zhǎng)、菌蓋厚實(shí)有韌性，顏色偏深褐色；由于消費(fèi)者偏愛(ài)子實(shí)體厚實(shí)、色澤褐色、柄長(zhǎng)且白的品種，加上考慮運(yùn)輸對(duì)商品性狀的影響，供試的5個(gè)秀珍菇品種中，X2和X4號(hào)菌株的子實(shí)體性狀為最佳菇型，適宜批量生產(chǎn)，其余菌株品相均不佳，不具有推廣價(jià)值。

表4 不同菌株子實(shí)體的農(nóng)藝性狀

供試菌株編號(hào)著生狀態(tài)菌柄性狀子實(shí)體形態(tài)X1叢生細(xì)長(zhǎng)菌蓋淺褐色、柄白色、蓋薄X2多單生細(xì)長(zhǎng)菌蓋褐色、菌柄白色、柄長(zhǎng)蓋厚X3叢生短、粗深褐色、菌柄白色、蓋薄X4部分叢生長(zhǎng)、粗深褐色、韌性好、朵均勻X5疊生細(xì)長(zhǎng)菌蓋褐色、菌柄白色、朵小

2.4 供試菌株的菌袋污染率及鮮菇產(chǎn)量

在同一出菇管理?xiàng)l件下，菌株的抗性與菌袋的污染率密切相關(guān)，而在秀珍菇實(shí)際生產(chǎn)中，菌袋雜菌污染直接導(dǎo)致產(chǎn)量的大幅度降低，菇農(nóng)將面臨嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，故生產(chǎn)上引入抗性強(qiáng)的品種具有絕對(duì)的種植優(yōu)勢(shì)。從表5可以看出，所有的供試菌株在整個(gè)培養(yǎng)期間均存在菌袋污染的情況，以X4號(hào)菌株的污染率最高為20.7%，X2號(hào)菌株的污染率最低為7.8%，初步分析可能與菌絲生長(zhǎng)周期有關(guān)，X2號(hào)菌絲在栽培種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的時(shí)間較短，故污染率低，反之X4號(hào)菌株則較高。

表5 不同菌株的菌袋污染率及鮮菇產(chǎn)量

供試菌株編號(hào)污染率/%鮮菇產(chǎn)量/(g/袋)生物學(xué)效率/%X112.5387.15±7.93 c64.5X27.8432.83±9.54 a72.1X318.4403.80±15.08 b67.3X420.7426.41±10.57 a71.1X516.4352.80±23.05 d58.8

從秀珍菇平均鮮菇產(chǎn)量來(lái)看，所有供試菌株都能正常出菇，但不同菌株存在一定差異。菌株鮮菇產(chǎn)量由高到低依次為X2>X4>X3>X1>X5，其中，X2號(hào)菌株鮮菇產(chǎn)量最高，每袋可采收432.83±9.54 g鮮菇，其生物學(xué)效率為72.1%；其次為X4號(hào)菌株，每袋鮮菇產(chǎn)量為426.41±10.57 g，與X2號(hào)菌株差異不顯著；鮮菇產(chǎn)量最低的是X5號(hào)菌株，生物學(xué)效率僅為58.8%，與其他菌株均存在顯著差異。

3 小結(jié)與討論

本次試驗(yàn)結(jié)果表明，湖南省目前主栽的5個(gè)秀珍菇品種均能在桑枝基質(zhì)中正常發(fā)菌、出菇，經(jīng)綜合分析不同菌株的菌絲生長(zhǎng)情況、商品農(nóng)藝性狀、子實(shí)體生物學(xué)效率及菌袋污染率，篩選出X2號(hào)菌株——基因2005為最適于利用桑枝基質(zhì)栽培秀珍菇的最佳菌株，其菌絲生長(zhǎng)快、長(zhǎng)勢(shì)旺盛、菇型好、抗性強(qiáng)，適合在湖南地區(qū)大面積種植推廣；而X4號(hào)菌株——臺(tái)秀57雖然菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)一般，但其子實(shí)體品相佳、韌性好，可以作為育種材料保留；其余菌株在桑枝培養(yǎng)基質(zhì)上菇型、產(chǎn)量及抗性等綜合表現(xiàn)較差，不具有推廣價(jià)值。至于桑枝與其他原料配比的栽培模式和優(yōu)良菌株的篩選還有待今后進(jìn)一步研究。