抗核抗體聯(lián)合抗核抗體譜檢測(cè)在自身免疫性疾病診斷中的應(yīng)用

陳麗芬

作者單位：363000 福建漳州，漳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科

自身免疫性疾病（autoimmune disease，AID）是一種由機(jī)體免疫功能和免疫應(yīng)答發(fā)生紊亂所致的多器官系統(tǒng)受損，以器官功能障礙和自身組織病理改變?yōu)橹饕憩F(xiàn)［1］?？购丝贵w（antinuclear antibody，ANA）是臨床篩查AID 的常見(jiàn)項(xiàng)目，是針對(duì)自身真核細(xì)胞的多種細(xì)胞核成分為靶抗原的自身抗體，但在實(shí)際檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，部分明確為AID 的患者經(jīng)篩查結(jié)果為ANA 陰性，易發(fā)生誤診、漏診現(xiàn)象［2-3］。相關(guān)研究顯示，抗核抗體譜（antinuclear antibody spectrum，ANAs）在AID 的病情鑒別、判斷、預(yù)后評(píng)估和治療監(jiān)測(cè)等方面具有重要價(jià)值［4］。本研究旨在分析ANA 聯(lián)合ANAs 檢測(cè)在AID 診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象及分組 選擇本院于2017 年2 月—2019 年10 月收治的98 例AID 患者作為AID 組，按疾病類(lèi)型分為6 個(gè)亞組，分別為系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）組32 例，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）組34 例，干燥綜合征（Sjogren syndrome，SS）組13 例，進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥（progressive systemic sclerosis，PSS）組7 例，混合性結(jié)締組織病（mixed connective tissue disease，MCTD）組6 例，過(guò)敏性紫癜（anaphylactoid purpura，AP）組6 例。另選同期本院收治的98 例非AID 患者為非AID 組。

1.2 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求，經(jīng)本院倫理批準(zhǔn)（審批號(hào)：20200423），所有對(duì)患者的檢測(cè)均獲得過(guò)患者或家屬的知情同意。

1.3 檢測(cè)方法 采集各組患者空腹靜脈血3 mL，離心取上清液，使用間接免疫熒光法（indirect immuno fluorescence，IIF）檢測(cè)ANA。ANA抗原基質(zhì)為Hep-2/猴肝，使用歐蒙公司試劑盒、EUROStar ⅢPlus 熒光顯微鏡，以組織或細(xì)胞內(nèi)有特異性熒光出現(xiàn)為陽(yáng)性。使用歐蒙免疫印跡法（immunoblotting test，IBT）試劑盒檢測(cè)ANAs，如抗Rib-P、抗SmDl、抗Ul-Sn RNP、抗Jo-1、抗dsDNA、抗SSA、抗Scl-70、抗SSB、抗組蛋白、抗核小體、抗PM-Scl、抗CNEP-B 等不同抗原免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）類(lèi)抗體。采用歐蒙（德國(guó)）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司提供的ANAs 試劑，只要有一種抗體陽(yáng)性，則ANAs 結(jié)果評(píng)定為陽(yáng)性。操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo) ① 比較各組ANA 和ANAs 陽(yáng)性表達(dá)情況；② 分析AID 組ANA 和ANAs 總陽(yáng)性率；③ 分析AID 組ANA 核型與ANAs 表達(dá)情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0 軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 精確檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 AID 組女性62 例，男性26 例；年齡6～81 歲，平均（46.78±12.49）歲；非AID 組女性65 例，男性23 例；年齡5～79 歲，平均（46.74±12.46）歲。兩組的性別、年齡等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.1 AID 組與非AID 組ANA 和ANAs 陽(yáng)性表達(dá)情況比較 SLE 組ANA 陽(yáng)性率最高，其次為MCTD、SS、PSS、RA 組，均明顯高于非AID 組（均P＜0.05）；SLE 組抗SmDl、抗Ul-Sn RNP、抗dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗組蛋白、抗核小體陽(yáng)性率均明顯高于非AID 組；RA 組抗SSA、抗組蛋白陽(yáng)性率明顯高于非AID 組；SS 組抗SSA、抗SSB 陽(yáng)性率明顯高于非AID 組；PSS 組抗Scl-70 陽(yáng)性率明顯高于非AID 組；MCTD 組抗Rib-P、抗Ul-Sn RNP、抗SSA 陽(yáng)性率明顯高于非AID 組（均P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 AID 組中ANA 和ANAs 陽(yáng)性率比較 98 例AID患者中ANA 總陽(yáng)性率為64.29%（63/98），ANAs 陽(yáng)性率為58.16%（57/98），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝3.233，P＝0.072）。

2.3 AID 組患者的ANA 核型分析與ANAs 表達(dá)情況 63 例ANA 陽(yáng)性AID 患者中，ANAs 也為陽(yáng)性者為47 例。47 例ANA、ANAs 均為陽(yáng)性者經(jīng)核型分析顯示，核均質(zhì)主要為抗dsDNA、抗核小體、抗組蛋白表達(dá)，核顆粒多為抗dsDNA、抗組蛋白、抗SSB表達(dá)，其余核型較為少見(jiàn)。見(jiàn)表2。

表1 AID 組患者中各亞組與非AID 組ANA 和ANAs 陽(yáng)性表達(dá)比較

表2 47 例ANA、ANAs 均為陽(yáng)性AID 患者的ANA 核型與ANAs 表達(dá)情況分析

3 討論

AID 具有潛伏期長(zhǎng)、多樣性、復(fù)雜性等特征，與其他系統(tǒng)疾病和感染性疾病存在相似性，因此增加了鑒別診斷難度，易出現(xiàn)漏診、誤診［5］。AID 的重要標(biāo)志為自身抗體，每種類(lèi)型的AID 均存在特征性的自身抗體譜，其中ANA 是與AID 關(guān)系最為密切的自身抗體，其為真核細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等多種組分自身抗體的總稱(chēng)［6］。IIF 是檢測(cè)ANA的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是對(duì)自身抗體篩查的主要手段，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床。因ANA 靶抗原包括細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞分裂周期蛋白、細(xì)胞骨架等全部細(xì)胞成分，理論上ANA 為陽(yáng)性，則ANAs 應(yīng)為陽(yáng)性［7］。但在實(shí)際診斷中發(fā)現(xiàn)，部分僅IIF 初篩為陰性的AID患者，經(jīng)IBT 檢測(cè)ANAs 結(jié)果顯示為陽(yáng)性。

本研究結(jié)果顯示，SLE 組ANA 陽(yáng)性率最高，其次為MCTD、SS、PSS、RA、AP 組，且除AP 組，其他幾組陽(yáng)性率均高于非AID 組，提示ANA 可有效診斷AID，但特異性欠佳，可將其作為AID 初篩手段。SLE 組陽(yáng)性率較高可能與其免疫調(diào)節(jié)異常，吞噬細(xì)胞在細(xì)胞凋亡過(guò)程中無(wú)法完全將染色質(zhì)斷裂釋放的核酸吞噬而產(chǎn)生多種ANA 有關(guān)［8］。本研究結(jié)果顯示，AID 組與非AID 組ANA、ANAs 陽(yáng)性表達(dá)情況比較提示ANAs 可有效鑒別診斷AID，且效能與ANA相當(dāng)，可將其作為ANA 的有效補(bǔ)充。IBT 具有快速、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果判讀方便、易自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，可一次檢測(cè)多種與AID 相關(guān)的特異性自身抗體，且膜條結(jié)果可長(zhǎng)期保存。本研究結(jié)果顯示，47 例ANA 和ANAs 均為陽(yáng)性AID 患者經(jīng)核型分析顯示，核均質(zhì)主要為抗dsDNA、抗核小體、抗組蛋白表達(dá)，核顆粒多為抗SmDl、抗組蛋白、抗SSB 表達(dá)，其余核型較少，提示AID 患者ANAs 與ANA 核型有一定相關(guān)性。

綜上所述，ANA 能夠有效篩查出AID，但診斷特異性欠佳，聯(lián)合ANAs 診斷可減少誤診、漏診，提高診斷準(zhǔn)確率。

利益沖突作者聲明不存在利益沖突