木霉水分散粒劑的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其對黃瓜枯萎病的防治效果

朱森林，王丹媚，唐秀梅，陳 瑞，楊 蓉，徐月妹，金璐懿，任晴雯，劉 鵬，羅 軍，*

(1.金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院，浙江 金華 321007； 2.浙江師范大學(xué) 植物學(xué)實驗室，浙江 金華 321004； 3.廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 經(jīng)濟作物研究所，廣西 南寧 530007)

黃瓜(CucumissativusL.)是葫蘆科(Cucurbitaceae)黃瓜屬(Cueumis)植物，具有較高的經(jīng)濟、醫(yī)藥與營養(yǎng)價值[1]。黃瓜枯萎病是由尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)引起的一種嚴(yán)重真菌土傳病害[2-3]，目前的防控措施多樣，但效果均不夠理想，存在藥劑持效期短、易殘留、破壞土壤微生物區(qū)系和污染環(huán)境等一系列問題，因此，開展生物防治顯得尤為重要。木霉菌(Trichoderma)是一類環(huán)境友好型生防真菌，其適應(yīng)范圍廣，生長繁殖速度快，可用來防治部分植物土傳病害[4]。因此，探討木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病的防治效果，對黃瓜的安全生產(chǎn)和土傳病害的生物防治具有重要意義。國內(nèi)外的許多關(guān)于木霉菌劑的報道指出，木霉菌不僅能夠拮抗土壤中多數(shù)病原真菌，而且可以顯著優(yōu)化植株品質(zhì)[5]。也有研究表明，添加木霉菌可以提高根際不同微生物的相對豐度和多樣性，其對土著微生物群落的調(diào)控過程同樣有助于拮抗土傳病原真菌[6]，如茶樹病害[7-9]等，且有利于土壤養(yǎng)分改善和植物生長[10-11]。牛鑫斌等[12]明確提出長枝木霉(Trichodermalongibrachiatum)T6水分散粒劑對黃瓜白粉病、黃瓜立枯病(Cucumber damping-off disease)和油菜(BrassicanapusL.)根腐病(root rot)均具有較好的應(yīng)用成效。木霉菌制劑現(xiàn)已開始在市面上流通，如美國的Topshield (哈茨木霉T22)和以色列的Trichodex (哈茨木霉T39)，以及日本的防治煙草白絹病木霉菌劑。浙江大學(xué)等研制的木霉菌制劑對根腐病的防效達(dá)到70%，增產(chǎn)幅度為7%～15%[13]。目前雖然已經(jīng)開展了木霉菌株對黃瓜枯萎病的拮抗作用相關(guān)研究[14-16]，但目前對木霉制劑的探究以可濕性粉劑為主[17]，關(guān)于木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病的防治效果還未見報道。本研究通過測定相關(guān)生理指標(biāo)，以探討木霉水分散粒劑的促生防病效果，揭示木霉水分散粒劑的最優(yōu)固體基質(zhì)比例和母藥助劑的最佳配比，研制出應(yīng)用效果良好的水分散粒劑，為后期木霉菌劑的開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，為黃瓜設(shè)施優(yōu)質(zhì)栽培奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試黃瓜品種為津研4號，種子由河北省滄州市百盛種業(yè)有限公司提供。供試培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)。供試菌株來自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心的深綠木霉(Trichodermaatroviride菌株編號：ACCC33804)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum菌株編號：ACCC33104)和尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum菌株編號：ACCC38875)。

1.2 木霉水分散粒劑的研制

主要參考Kirby等[18]的方法。木霉固體培養(yǎng)基基質(zhì)的優(yōu)化：設(shè)置草炭∶蛭石∶牛糞質(zhì)量比分別為1∶1∶1、1∶1∶2、1∶2∶1、2∶1∶1，進行條件優(yōu)化。木霉母藥助劑的篩選：通過測定不同助劑條件下木霉的產(chǎn)孢量，篩選出最佳紫外保護劑、穩(wěn)定劑、黏結(jié)劑、崩解劑、載體和濕潤劑及其比例，擠壓造粒，得到木霉水分散粒劑。

1.3 試驗方法

試驗于2018年1月至2019年6月在金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院植物學(xué)實驗室內(nèi)進行。將黃瓜種子置于燒杯中充分吸水，播種前取種子在10% H2O2中浸泡10 min進行表面消毒，然后用蒸餾水洗凈藥液，在55 ℃條件下水浴浸種，浸種時不斷攪拌，持續(xù)20 min，使種子吸水膨脹，供給種子萌發(fā)所需基本水量，并起到種子表面消毒的作用，取出后于28 ℃恒溫箱中黑暗催芽。當(dāng)黃瓜苗長出2～3個真葉時，選取生長健壯、長勢一致的黃瓜幼苗，栽培于學(xué)校植物學(xué)實驗室。接種前，用質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為5%的高錳酸鉀溶液對所用花盆進行消毒。試驗設(shè)7個處理：接種哈茨木霉水分散粒劑(T1)，接種深綠木霉水分散粒劑(T2)，接種哈茨木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌(T1B)，接種深綠木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌(T2B)，接種尖孢鐮刀菌(B)，接種多菌靈和尖孢鐮刀菌(CB)，無菌水對照組(P)。接種處理采用層施法，施接種菌劑85 g·盆-1，每處理重復(fù)3次，每盆種植黃瓜幼苗3株，每處理共種植黃瓜9株。

1.4 指標(biāo)測定方法

在試驗進行的第5、10和15天，用打孔器取相同質(zhì)量的幼苗中上部葉片作為樣品，將采集的樣品放入液氮中保存，進行相關(guān)生理指標(biāo)的測定。葉綠素含量測定采用丙酮乙醇法[19]，用硫代巴比妥酸法檢測丙二醛(MDA)含量[20]，茚三酮顯色法測定脯氨酸含量[21]；NBT光化還原法測定超氧化物歧化酶(SOD)活性[22]；愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶(POD)活性[23]；紫外吸收法測定過氧化氫酶(CAT)活性[24]；茚三酮顯色法測定游離脯氨酸的含量[21]。

從黃瓜植株出現(xiàn)第1株病株開始，每天調(diào)查所有植株發(fā)病情況，進行病情指數(shù)統(tǒng)計。防治效果參照張素平[25]的分級標(biāo)準(zhǔn)，病情指數(shù)參照宗兆鋒等[26]的標(biāo)準(zhǔn)。0級：無癥狀；1級：真葉、子葉黃化或萎蔫面積不超過總面積的50%；2級：真葉、子葉黃化或萎蔫面積超過總面積的50%；3級：葉片萎蔫或枯死，僅生長點存活；4級：全株嚴(yán)重萎蔫，以致枯死。病情指數(shù)=[∑ (病級株數(shù)×代表級數(shù))/(植株總數(shù)×最高代表級值)]×100；防治效果(%)= (對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)×100。

1.5 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS 21.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，通過單因素方差分析和Duncan法計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤，分析差異顯著性(α=0.05)，使用Origin 8.5軟件繪制圖表。圖表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基質(zhì)和母藥助劑對木霉菌產(chǎn)孢量的影響

由表1可知，在各種培養(yǎng)基質(zhì)和母藥助劑中，2種木霉的菌絲均能生長，但產(chǎn)孢量差異顯著，表明不同的培養(yǎng)基質(zhì)、木霉菌母藥助劑對哈茨木霉33104和深綠木霉33804菌絲生長的影響不同。草炭∶牛糞∶蛭石質(zhì)量比為1∶1∶1的培養(yǎng)基中，2種木霉菌的產(chǎn)孢量最大。添加炭黑紫外保護劑使2種木霉菌產(chǎn)孢量顯著高于其余各組，說明炭黑能有效抵御紫外線對木霉的傷害，提高木霉水分散粒劑的利用效率。磷酸鉀、羧甲基纖維素分別是哈茨木霉33104的最佳穩(wěn)定劑和黏結(jié)劑，而深綠木霉33804則在添加羧甲基纖維素鈉、PVP條件下最穩(wěn)定?？扇苄缘矸圩鳛楸澜鈩r，2種木霉菌的產(chǎn)孢量都顯著高于對照，說明3種崩解劑都與木霉菌有較好的相容性。凹凸棒土為載體時，2種木霉菌產(chǎn)孢水平均較低于對照組，說明凹凸棒土對木霉菌生長存在抑制作用；硅藻土為載體時，哈茨木霉產(chǎn)孢量最大，顯著大于其他處理；高嶺土為載體時，深綠木霉產(chǎn)孢量最大，顯著大于其他處理。濕潤劑中木質(zhì)素磺酸鈉對木霉菌有較好地保護作用，而十二烷基硫酸鈉和十二烷基苯磺酸鈉的保護作用不明顯。

對哈茨木霉33104、深綠木霉33804水分散粒劑的相關(guān)指標(biāo)和貯存穩(wěn)定性進行篩選，最終確定哈茨木霉33104水分散粒劑中助劑的最佳配方(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為：炭黑0.5%、磷酸鉀4%、羧甲基纖維素5%、可溶性淀粉5%、硅藻土5%和木質(zhì)素磺酸鈉5%。該配方水分散粒劑的孢子含量為6×108g-1，pH 6.5，水分含量2.5%，濕潤時間38 s，顆粒強度強，各項檢測結(jié)果均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。最終確定深綠木霉33804水分散粒劑中助劑的最佳配方(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為：炭黑0.4%、羧甲基纖維素鈉5%、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)5%、可溶性淀粉4%、高嶺土3%和木質(zhì)素磺酸鈉5%。該配方水分散粒劑的孢子含量為7.6 × 108g-1，pH 5.6，水分含量4.5%，濕潤時間25 s，顆粒強度較弱，各項檢測結(jié)果均符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 木霉水分散粒劑對黃瓜抗氧化酶系統(tǒng)的影響

在受到病原菌侵害時，植物體內(nèi)會產(chǎn)生過量的活性氧，對植物產(chǎn)生危害[27]，抗氧化系統(tǒng)可以減少活性氧積累和逆境條件下的氧化損傷。由圖1得出，接種木霉水分散粒劑后，黃瓜葉片SOD、POD和CAT活性較P處理有顯著提高。不同木霉水分散粒劑對抗氧化酶活性的調(diào)節(jié)程度存在差異，處理5、10和15 d，T1B處理的黃瓜葉片SOD、POD和CAT活性均低于T2B處理。由此可見，接種木霉水分散粒劑可提高黃瓜葉片的抗氧化酶活性，且其對黃瓜葉片抗氧化酶活性的影響存在品種間差異，深綠木霉作用效果更佳。

表1 不同培養(yǎng)基質(zhì)和母藥助劑對2種木霉菌產(chǎn)孢量的影響

Table 1 Effects of different culture medium and mother medicine additive on sporulation yield of twoTrichodermasp. strains

處理Treatmentgroup哈茨木霉33104產(chǎn)孢量Trichoderma harzianum33104 Sporulation/(106 g-1)深綠木霉33804產(chǎn)孢量Trichoderma atroviride33804 sporulation/(109 g-1)培養(yǎng)基質(zhì)(草炭∶牛糞∶蛭石質(zhì)量比)1∶1∶18.2933±0.2933 a7.2590±0.2590 aCulture medium (mass ratio of peat, 1∶1∶26.2223±0.2223 b5.1850±0.1850 bcow dung and vermiculite)1∶2∶13.0740±0.0739 c2.1483±0.1483 c2∶1∶10.2333±0.0333 d1.0370±0.0370 dCK0.3223±0.0103 d1.1667±0.1667 d紫外保護劑炭黑Carbon black20.1667±1.5899 a71.1333±0.6960 aUV protection agentβ-環(huán)糊精β-cyclodextrin5.0333±0.6064 b10.7037±0.0176 b抗壞血酸Ascorbic acid2.6667±0.3333 bc0.1350±0.3533 d羧甲基纖維素Carboxymethyl cellulose2.0667±0.0667 c52.0001±1.1547 cCK2.1037±0.0037 c2.0833±0.5833 d穩(wěn)定劑Stabilizer碳酸鈣CaCO31.1000±0.1000 d0.1037±0.0037 d磷酸鉀K3PO45.1333±0.1333 a0.3113±0.0113 b羧甲基纖維素鈉CMC-Na3.1333±0.1333 b0.5193±0.0193 a磷酸氫二鉀K2HPO42.2000±0.2000 c0.2147±0.0147 cCK1.0500±0.0010 d0.1667±0.0333 d粘結(jié)劑Binder淀粉Starch1.0367±0.0367 d2.3333±0.3333 b羧甲基纖維素Carboxymethyl cellulose5.1833±0.1833 a0.3500±0.0289 dPVP4.1467±0.1467 c5.1407±0.1407 aPVA3.1100±0.1100 b2.1037±0.1037 bCK0.9333±0.0333 d1.0740±0.075 c崩解劑Disintegrant可溶性淀粉Soluble starch8.3333±0.8819 a 2.3333±0.4333 a硫酸鈉Na2SO44.3333±0.6667 b0.6667±0.0333 bc尿素Urea3.0000±0.5774 bc0.9333±0.0233 b硫酸銨(NH4)2SO42.0000±0.2333 c0.3667±0.0348 cCK1.6667±0.3333 c0.5333±0.0370 bc載體Carrier凹凸棒土Attapulgite3.6667±0.3932 c2.0000±0.5774 c石英砂Quartz sand7.6667±0.8819 b3.1833±0.6667 bc高嶺土Kaolin8.3333±0.8527 b8.6667±0.5899 a硅藻土Tripoli11.0000±1.1547 a5.9333±0.4893 bCK4.6667±0.3423 c5.0000±0.5634 b濕潤劑Wetting agent木質(zhì)素磺酸鈉Sodium lignosulfonate2.0000±0.57735 a1.2000±0.1155 a十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate0.8667±0.08819 b0.6333±0.0667 b十二烷基苯磺酸鈉SDBS0.3333±0.06667 c0.2667±0.0667 cCK0.7667±0.08637 b0.2000±0.0577 c

同列數(shù)據(jù)后無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Data marked without the same lowercase letter in each column indicated significant differences atP<0.05.

2.3 木霉水分散粒劑對黃瓜MDA和脯氨酸含量的影響

由圖2可以看出，T1、T2處理的黃瓜葉片MDA含量均顯著低于P處理，差值最大可達(dá)P處理的17.17%和22.20%，T1、T2處理之間差異不顯著。深綠木霉水分散粒劑或多菌靈和病原菌同時施用有利于減緩黃瓜葉片MDA含量的累積，B處理的葉片MDA含量最高，T1B、T2B和CB處理的MDA含量均顯著低于B處理，T2B處理的MDA含量最低，較B處理最大降幅分別達(dá)22.66%、24.17%、23.17%，T2B處理與CB處理無顯著差異。由此可以得出，接種木霉水分散粒劑可有限緩解黃瓜葉片中MDA的積累，減少活性氧自由基生成量，減輕膜脂過氧化程度。

數(shù)據(jù)以鮮質(zhì)量計。柱上無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。T1，接種哈茨木霉水分散粒劑；T2，接種深綠木霉水分散粒劑；T1B，接種哈茨木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌；T2B，接種深綠木霉水分散粒劑和尖孢鐮刀菌；B，接種尖孢鐮刀菌；CB，接種多菌靈和尖孢鐮刀菌；P，無菌水對照組。下同。Data was detected based on fresh weight. Data on the bars marked without the same lowercase letter indicated significant differences at P<0.05. T1， Inoculated with Trichoderma harzianum water dispersing granule; T2， Inoculated with Trichoderma atroviride water dispersing granule; T1B， Inoculated with Trichoderma harzianum water dispersing granule and Fusarium oxysporum; T2B， Inoculated with Trichoderma atroviride water dispersing granule and Fusarium oxysporum; B， Inoculate with Fusarium oxysporum; CB， Inoculated with carbendazim and Fusarium oxysporum; P， Control group， inoculated with sterile water. The same as below.圖1 木霉水分散粒劑對黃瓜抗氧化酶系統(tǒng)的影響Fig.1 Effects of Trichoderma water dispersing granule on antioxidant enzyme system of Cucumis sativus

圖2 木霉水分散粒劑對黃瓜MDA和脯氨酸含量的影響Fig.2 Effects of Trichoderma water dispersing granule on MDA and proline content of Cucumis sativus

脯氨酸是植物蛋白質(zhì)的組分之一，以游離狀態(tài)廣泛存在于植物體中，是植物體內(nèi)的一種重要抗逆境調(diào)節(jié)物[28]。由圖2可見，較P處理而言，B處理脯氨酸含量顯著下降，在5、10、15 d降幅分別達(dá)12.78%、4.46%、11.35%，T1B和T2B處理的葉片脯氨酸含量分別比B處理最大提高了37.42%、49.36%，說明木霉水分散粒劑對尖孢鐮刀菌有抑制作用，接種深綠木霉水分散粒劑(T2B)比接種哈茨木霉水分散粒劑(T1B)效果更佳。

圖3 木霉水分散粒劑對黃瓜葉綠素含量的影響Fig.3 Effects of Trichoderma water dispersing granule on chlorophyll content of Cucumis sativus

2.4 木霉水分散粒劑對黃瓜葉綠素含量的影響

葉綠素含量可直接反映植物光合作用的情況[29]。由圖3可知，T2處理葉片葉綠素含量最高，在試驗后期(處理10、15 d)顯著高于T1、T1B和T2B處理。處理15 d，T2B處理葉綠素含量顯著高于T1B和CB處理。處理不同時間，T2B處理葉綠素含量均顯著高于B處理，處理10 d，T2B處理比B處理葉綠素含量高64.68%；處理15 d，T2B處理比P處理葉綠素含量高27.51%。可見不同木霉水分散粒劑對染病幼苗葉綠素含量的影響存在差異，但2種木霉水分散粒劑均可提高黃瓜葉片的葉綠素含量。

2.5 木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病病情指數(shù)和防治效果的影響

由圖4可知，木霉水分散粒劑處理組(T1B、T2B)和施加多菌靈組(CB)的病情指數(shù)分別為22.22、11.11和16.67，顯著低于尖孢鐮刀菌處理組(B)，且施加深綠木霉水分散粒劑組的黃瓜發(fā)病程度最低。從防治效果看，接種病害15 d后，T2B的防效顯著高于T1B處理，與多菌靈處理組(CB)差異不顯著，而T1B的防效也與多菌靈處理(CB)組差異不顯著?？梢?，深綠木霉水分散粒劑組的防效較哈茨木霉水分散粒劑好。

圖4 木霉水分散粒劑對黃瓜病情指數(shù)和防治效果的影響Fig.4 Effects of Trichoderma water dispersing granule on disease index and control effect of Cucumis sativus

3 討論

木霉菌作為一類環(huán)境友好型生防真菌，對多種植物病原菌有拮抗作用[30]。有研究表明，其通過調(diào)節(jié)黃瓜體內(nèi)抗氧化酶活性、生物膜過氧化程度和脯氨酸含量等，對植物體內(nèi)因逆境脅迫而產(chǎn)生的大量氧自由基進行清除，防止活性氧(ROS)誘導(dǎo)細(xì)胞損傷[31]。本研究顯示，在受尖孢鐮刀菌侵害初期，黃瓜體內(nèi)SOD、POD和CAT活性上升、MDA含量降低，中后期則呈相反趨勢，而木霉水分散粒劑處理組可以明顯提高SOD、POD和CAT活性，由此推測2種木霉水分散粒劑可以率先激活SOD、POD和CAT活性，并有效緩解MDA的積累，激活植物本身的防御系統(tǒng)，減輕生物膜抗氧化程度，增強植物抵抗病原菌侵害的能力。脯氨酸能保持植物原生質(zhì)體與環(huán)境的滲透平衡[32]。黃瓜脯氨酸含量在木霉水分散粒劑灌根后顯著提高，并隨著處理時間的延長而緩慢上升，由此可見，木霉水分散粒劑能提高黃瓜的抗逆性，進而減輕尖孢鐮刀菌對其的危害。本研究中，木霉水分散粒劑明顯促進了黃瓜葉片葉綠素的合成，提高了植物的光合能力，這與姜傳英等[33]揭示的棘孢木霉可有效提高植物葉綠素含量的結(jié)論相一致。深綠木霉水分散粒劑的防效超過傳統(tǒng)的化學(xué)藥劑，高達(dá)80.95%，表現(xiàn)出良好的治病能力。辛鑫等[34]研究表明，綠色木霉H6-L4對香蕉枯萎病有顯著抑制作用，與本研究中木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病防效結(jié)果相似。綜上所述，在木霉水分散粒劑作用下，黃瓜的抗氧化酶活性、脯氨酸和葉綠素含量顯著提高，MDA含量降低，有利于緩解黃瓜枯萎病對植株造成的傷害，表明木霉水分散粒劑對該病有良好的防治效用。

木霉菌對植物病原菌的拮抗存在多種機制，分別為競爭、重寄生和抗生作用[35]。競爭作用表現(xiàn)為對生長生存所需條件的競爭，木霉菌生長迅速、生命力較強，在本實驗中可能較尖孢鐮刀菌更快占領(lǐng)空間，吸取養(yǎng)分。通過對多組木霉菌基因組信息進行分析得出，重寄生是木霉最初的生存模式[36]，可清晰觀察到從識別病原菌到寄生的復(fù)雜過程[37]。木霉菌對病原物最直接的生防機制是重寄生作用，在這個過程中，木霉菌通過產(chǎn)生大量真菌壁的降解酶來降解病原菌的細(xì)胞壁，從而達(dá)到寄生和殺死病原菌的效果，與本實驗得出木霉水分散粒劑具有良好的防病成效結(jié)果相一致。此外，土壤中的木霉菌對植物地上部分發(fā)生的病害也有一定的防治效果，即木霉菌的誘導(dǎo)抗性作用[38]，Bigirimana等[39]首次證明了木霉菌具有誘導(dǎo)植物抗性的效果。木霉菌在植物根部定殖，刺激植物產(chǎn)生胞壁沉積物，可不同程度上阻止病原菌入侵[40]，并增加植物體內(nèi)與防御有關(guān)酶的合成與積累，使植物產(chǎn)生防御反應(yīng)[41]。本實驗結(jié)果顯示，接種木霉水分散粒劑后，黃瓜抗氧化酶系活力顯著提升。因此，推測木霉水分散粒劑能增強黃瓜抗性的主要原因是競爭、重寄生和誘導(dǎo)抗性等多種機制共作的結(jié)果。

環(huán)境因素對生物制劑的穩(wěn)定性影響較大，且藥效也隨之改變，其中，以孢子制劑為甚[42]。選擇與木霉菌有較好相容性的各類母藥助劑加入木霉水分散粒劑中，可有效減小外界環(huán)境造成的藥效不穩(wěn)定性[43]。本研究的4種紫外保護劑中，炭黑作為紫外保護劑時2種木霉菌產(chǎn)孢量最高。4%磷酸鉀作為穩(wěn)定劑時對哈茨木霉孢子的相容性最好，深綠木霉的最佳穩(wěn)定劑為5%羧甲基纖維素鈉。測定備選顆粒劑的粒度、堆密度、松密度[44]，從中篩選出與木霉菌相容性較好且成粒率高者作為黏結(jié)劑。在供試的4種黏結(jié)劑中，5%羧甲基纖維素和聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)分別對哈茨木霉、深綠木霉孢子萌發(fā)影響較小，可考慮利用兩者作為哈茨木霉、深綠木霉水分散粒劑的黏結(jié)劑。崩解劑以崩解時間小于180 s為合格[45]?？扇苄缘矸蹖?種木霉菌孢子活性的影響低于其他處理，其產(chǎn)孢量分別較對照組高399.98%、337.52%，所以，可溶性淀粉可作為木霉水分散粒劑的崩解劑。哈茨木霉的最佳載體為5%硅藻土，而深綠木霉的最佳載體為3%高嶺土。本試驗所選的4種濕潤劑對木霉菌絲的生長均沒有影響，最佳濕潤劑為5%木質(zhì)素磺酸鈉。

合理采用物理、化學(xué)、生物手段進行土傳病害的防治，對農(nóng)作物的安全生產(chǎn)至關(guān)重要。本研究探討了木霉水分散粒劑對黃瓜生理特性的影響，闡明了其對于黃瓜枯萎病的防治效果，對黃瓜的安全生產(chǎn)具有一定意義。但木霉水分散粒劑對黃瓜生長的影響是多方面的，下一步需深入探究木霉水分散粒劑對黃瓜生長發(fā)育各方面的影響，以提高其生產(chǎn)效益和經(jīng)濟價值，促進黃瓜的開發(fā)利用和推廣種植，為生防菌的施用環(huán)境與劑量探索提供理論依據(jù)。木霉水分散粒劑可與化學(xué)手段配合解決植物病蟲害問題，逐漸減少農(nóng)藥用量，為營造綠色生態(tài)環(huán)境貢獻(xiàn)力量。木霉水分散粒劑對黃瓜枯萎病具有拮抗作用，且深綠木霉33804水分散粒劑較哈茨木霉33104水分散粒劑防治效用更好。木霉水分散粒劑能通過重寄生和誘導(dǎo)抗性作用等過程增強植株的抗氧化酶活性、促進其光合作用和調(diào)節(jié)其MDA及脯氨酸含量，進而減緩尖孢鐮刀菌對黃瓜生長的抑制。因此，在黃瓜規(guī)?；a(chǎn)中，可選擇適宜劑量的深綠木霉水分散粒劑進行處理，以期達(dá)到黃瓜的最佳栽培效果。