破壁與去壁靈芝孢子粉的化學(xué)成分與抗氧化活性比較

沐 華,蔡 銘,*,徐 靖,王曉彤,孫培龍,*

(1.浙江工業(yè)大學(xué)食品營養(yǎng)與安全研究所,浙江杭州 310006; 2.浙江壽仙谷醫(yī)藥股份有限公司,浙江金華 510530)

靈芝Ganodermalucidum(Leyss.ex Fr.)Karst.是一類具有堅硬子實(shí)體的木質(zhì)降解菌,在中國、朝鮮半島和日本等地作為一種重要的藥用真菌已有悠久的歷史,有“仙草”之稱[1]。靈芝孢子粉是靈芝在其子實(shí)體發(fā)育成熟后,不斷從菌管中彈射出孢子匯集而成。其含有豐富的生物活性成分,具有的多糖、三萜、氨基酸、核苷酸、微量元素等被研究者們認(rèn)為具有很高的食藥用價值[2-4]。靈芝孢子粉具有堅硬的孢子壁,主要由纖維素、幾丁質(zhì)等組成,因此孢子內(nèi)的有效物質(zhì)很難通過孢子壁溶出而被人類吸收利用[5]。

破壁技術(shù)能有效地將靈芝孢子壁打碎或去除,使孢子粉中的活性物質(zhì)更易釋放出來[6]。目前,國內(nèi)外對靈芝孢子粉大多采用的破壁技術(shù)主要有生物法、物理法、化學(xué)法、機(jī)械法、綜合法等,但因孢子壁依舊殘留在其中,其活性成分含量占比并沒有顯著提升[7-8]。去壁技術(shù)作為一種新興技術(shù)已被逐漸應(yīng)用于靈芝孢子粉的相關(guān)產(chǎn)品,去壁靈芝孢子粉將超音速低溫氣流破壁技術(shù)和去壁提純技術(shù)相結(jié)合,不僅僅解決了傳統(tǒng)破壁技術(shù)存在的加工中高溫氧化問題,更重要的是將占孢子粉重量2/3左右、無法被人體消化吸收的非藥用部分孢子壁殼有效分離出來[9],使靈芝孢子粉中的有效活性物質(zhì)含量大大提高。

本研究將對去壁與破壁靈芝孢子粉中的多糖、三萜等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行比較分析,明確去壁靈芝孢子粉的物質(zhì)基礎(chǔ),為開展靈芝孢子粉相關(guān)功能活性的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

去壁靈芝孢子粉、破壁靈芝孢子粉 浙江壽仙谷醫(yī)藥股份有限公司;三羥基氨基甲烷(TRIS)、2-(N-嗎啉代)乙烷磺酸(MES)、熱穩(wěn)定α-淀粉酶液(2100 U/mL)、蛋白酶(50 U/mg)、抗壞血酸(≥99%)、3,5-二硝基水楊酸(≥98%) 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;熊果酸(≥98.5%)、1,2-二苦基-2-三硝基苯亞肼(DPPH)、2,2′-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS) 阿拉丁試劑有限公司;靈芝酸A(≥98%)、靈芝酸B(≥98%)、靈芝酸D(≥98%) 上海源葉生物科技有限公司。

UV-2450紫外-可見分光光度計 日本島津公司;CR21GII高速冷凍離心機(jī)、L8900氨基酸自動分析儀 日本Hitachi(日立)公司;QT-2漩渦振蕩混合器 上海琪特儀器有限公司;SHB-II-A 循環(huán)水真空泵 上海淀久儀器有限公司;KQ-400E超聲清洗儀 昆山市超聲儀器有限公司;DK-S24型電熱恒溫水浴鍋 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;烘箱、KSJ-15-12馬弗 上海意豐電爐有限公司;SH22O電熱消化爐 濟(jì)南海能儀器股份有限公司;K9480自動凱氏定氮儀 濟(jì)南海能儀器股份有限公司;HPLC液相色譜儀 美國Waters公司;IR IS Intrepid電感耦合全譜直讀等離子發(fā)射光譜儀(ICP-AES) 美國熱電公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 水分、灰分、蛋白質(zhì)測定 水分測定:參照GB 5009.3-2016中直接干燥法進(jìn)行水分測定[10];灰分測定:參照GB 5009.4-2016進(jìn)行灰分測定[11];蛋白質(zhì)含量測定:參照GB 5009.5-2016利用凱氏定氮法測定[12]。

1.2.2 膳食纖維測定 參照殷鵬飛等[13]的方法測定靈芝孢子粉中膳食纖維含量。將靈芝孢子粉在60 ℃下干燥5 h后精確稱取3.0 g,按照1∶30 g/mL的料液比加入pH為8.0±0.1的2-(N-嗎啉代)乙烷磺酸-三羥甲基氨基甲烷(MES-TRIS)緩沖溶液,攪拌混勻后,放入95 ℃的恒溫水浴鍋中,加入0.75 mL熱穩(wěn)定α-淀粉酶酶解100 min。溫度計監(jiān)測下,將樣品冷卻至60 ℃后加入10 mg中性蛋白酶酶解30 min,過濾,得到濾渣和濾液。所得濾液60 ℃真空濃縮至10 mL,加4倍體積的95%乙醇處理醇沉12 h后,4 ℃ 4800 r/min,離心15 min,得到沉淀。將沉淀用水洗滌、冷凍干燥、稱重,即得水溶性膳食纖維(Soluble Dietary Fiber,SDF)。

式中:m為孢子粉樣品質(zhì)量(g);m1為凍干后樣品質(zhì)量(g)。

過濾所得濾渣,按照料液比1∶30 g/mL加入MES-TRIS緩沖溶液放入50 ℃恒溫水浴鍋,調(diào)節(jié)pH為10,時間為40 min,過濾,洗滌至中性,真空干燥,即得水不溶性膳食纖維(Insoluble Dietary Fiber,IDF)。

式中:m為孢子粉樣品質(zhì)量(g);m2為真空干燥后樣品質(zhì)量(g)。

1.2.3 總?cè)茰y定 參照Chang等[14]的方法測定靈芝孢子粉中總?cè)频暮?準(zhǔn)確稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,用乙酸乙酯定容至100 mL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:分別吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5 mL,置于10 mL比色管中,60 ℃氮?dú)獯蹈?。加?.4 mL 5%香草醛冰醋酸溶液,混勻,加1.0 mL高氯酸,混勻。將混合液在60 ℃水浴中加熱15 min后移入冰浴中,加入冰醋酸5 mL混勻后置于室溫下。在15～30 min內(nèi)于548 nm處測定,并分別記錄各吸光度值,以熊果酸含量為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:y=9.9169x-0.0312,R2=0.9978。

樣品中總?cè)频臏y定:準(zhǔn)確稱取去/破壁靈芝孢子粉樣品0.5 g于離心管中,加入20 mL乙酸乙酯,超聲提取30 min。分離上清液后再加入20 mL乙酸乙酯重復(fù)提取,合并上清液,冷卻至室溫后加乙酸乙酯定容至50 mL容量瓶中。取上清液0.3 mL置于10 mL比色管中,于60 ℃氮?dú)獯蹈?。同上法測定吸光度值并代入如下公式(3)進(jìn)行計算。

式(3)

式中:m為試樣孢子粉樣品質(zhì)量(g);A1為提取液吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程后得到的三萜含量(mg);1000為換算系數(shù)。

1.2.4 總多糖測定 參照Vazirian等[15]方法,取干燥無水葡萄糖對照品適量,準(zhǔn)確配制成濃度為0.12 mg/mL的對照品溶液。取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL,分別置10 mL具塞試管中,各加水至2.0 mL,迅速加入1 mg/mL硫酸蒽酮溶液6 mL,立即搖勻,放置15 min后,置冰浴中冷卻15min后取出,用水為空白,在625 nm波長處測定吸光度,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:y=0.4309x+0.1017,R2=0.9953。

靈芝孢子粉中總多糖的測定:精確稱取孢子粉樣品2 g,置圓底燒瓶中,加水60 mL靜置1 h,加熱回流4 h,通過濾紙趁熱過濾,少量熱水洗滌濾器和濾渣,置燒瓶中,加水60 mL,重復(fù)提取,合并濾液,減壓濃縮至干,殘渣用5 mL水溶解,緩慢加入乙醇75 mL,搖勻后4 ℃放置12 h,離心棄去上清液,沉淀物用水溶解定容至50 mL容量瓶中。測定時取5 mL容量瓶中溶液,離心取上清液3 mL,置25 mL容量瓶中,加水至刻度,搖勻即得。精密量取25 mL容量瓶中供試品溶液2 mL,置10 mL具塞試管中,同標(biāo)準(zhǔn)曲線制備法測定樣品吸光度,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量。

1.2.5 ICP-MS 測定微量金屬元素 參照何晉浙等[16]方法,精確稱取靈芝孢子粉樣品1 g,過40目篩,60 ℃充分風(fēng)干后,放入干燥器中恒重48 h以上。放入消解罐中,每個消解罐加入20 mL王水(鹽酸∶硝酸=3∶1，V/V),在電子加熱板中100 ℃加熱2 h。冷卻到室溫后,再加入6 mL硝酸,繼續(xù)在100 ℃消化2 h,后續(xù)升溫至120 ℃加熱4 h,冷卻后20 ℃下靜置12 h。消解后溶液呈透明黃色,用超純水定容至100 mL。同步做一個空白實(shí)驗(yàn),每個孢子樣品同時做3個平行試驗(yàn)。

ICP-AES儀器設(shè)定射頻功率1050 kW,霧化氣壓力為4.25×106Pa,輔助氣流速為1.0 L/min,樣品提升量1.7 mL/min,樣品沖洗時間1 min,高波掃描5s,低波掃描30 s。

1.2.6 氨基酸測定 參照黃永連等[17]方法,精密稱取30 mg的靈芝孢子粉樣品于水解管中,向水解管內(nèi)加入6 mol/L鹽酸水解液10 mL,超聲溶解、混勻,再充入氮?dú)? min后,擰緊螺絲蓋,將水解管放在(110±1) ℃的恒溫干燥箱內(nèi)水解22 h后取出,冷卻至室溫。將水解液用超純水轉(zhuǎn)移并定容至25 mL容量瓶中,混勻,濾紙過濾。取濾液0.5 mL于小試管中,在(50±2) ℃的氮吹儀上濃縮至干,殘留物加入2 mL 0.02 mol/L鹽酸稀釋液溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾頭過濾,濾液即為試樣溶液,后用氨基酸自動分析儀進(jìn)行測定,檢測限為1 μmoL/L。

1.2.7 HPLC法測定靈芝三萜 根據(jù)李保明等[18]方法,精確稱取靈芝酸A 2.8 mg、靈芝酸B 2.5 mg、靈芝酸D 2.7 mg,分別溶解定容于5 mL甲醇溶液中,配成待測對照品溶液。精確稱取去壁與破壁靈芝孢子粉各50 g,用1000 mL乙醇萃取過夜,反復(fù)提取三次,過濾后合并提取液,真空濃縮至原體積十分之一。每次分別取5 mL去/破壁靈芝孢子粉提取液,真空濃縮至干,甲醇復(fù)溶,過0.22 μm有機(jī)濾膜,供HPLC待測。

色譜條件:Agilent C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相A為0.1%冰乙酸水溶液,流動相B為乙腈;梯度洗脫條件:0～5 min,90% A,5～10 min,90%～85% A,10～30 min,85%～70% A,30～40 min,70%～60% A,40～70 min,60%～55% A,70～80 min,55%～50% A,80～100 min,50%～90% A。流速1 mL/min,Waters 2487紫外檢測器,檢測波長254 nm,進(jìn)樣量:10 μL。

1.2.8 抗氧化活性分析比較 參照Zhu等[19]方法,準(zhǔn)確稱取去/破壁靈芝孢子粉各10 g,分別用200 mL 95%乙醇萃取12 h,反復(fù)萃取3次,收集合并上清液,旋至10 mL左右后,冷凍干燥得到樣品。殘渣風(fēng)干除去酒精后,加水200 mL,沸水浴提取2 h,反復(fù)提取3次,收集合并上清液,旋至少量后冷凍干燥得到樣品。分別得到破壁靈芝孢子粉醇提物(A-PC)0.527 g,破壁靈芝孢子粉水提物(B-PS)0.449 g,去壁靈芝孢子粉水提物(C-QS)1.082 g,去壁靈芝孢子粉醇提物(D-QC)1.816 g。分別配制溶液即得到破壁靈芝孢子粉醇提相(A-PC)、水提相(B-PS),去壁靈芝孢子粉水提相(C-QS)、醇提相(D-QC),進(jìn)行體外抗氧化測定。

分別將A-PC、B-PS、C-QS、D-QC、VC配成濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和2.0 mg/mL 6個濃度的溶液進(jìn)行總還原力及DPPH自由基清除能力的測定;同時,分別配制0.05、0.10、0.15、0.20、0.25和0.50 mg/mL不同濃度的溶液用于ABTS+自由基清除能力的測定;分別配制1、2、3、4、5和10 mg/mL不同濃度的溶液用于羥基自由基清除能力的測定。

1.2.9 總還原力 參照Tian等[20]方法,取A-PC、B-PS、C-QS、D-QC不同濃度的溶液各1 mL,加入0.2 mol/L pH6.6的磷酸鹽緩沖溶液1 mL和1%的鐵氰化鉀溶液1.0 mL,將其混勻。50 ℃保溫反應(yīng)20 min,之后加入10%的TCA溶液1.0 mL,冷卻至室溫,再加入1.0 mL 0.1% FeCl3溶液。反應(yīng)10 min后,測定700 nm處的吸光值A(chǔ)x。VC作為陽性對照,用等體積的純水作空白對照,測得的吸光值A(chǔ)0。

還原力=Ax-A0

式(4)

1.2.10 DPPH自由基(DPPH·)清除能力測定 參照Nagai等[21]方法,分別量取2 mL不同濃度的各相溶液于具塞試管中,加入濃度為0.2 mmol/L DPPH甲醇溶液1 mL。密封后混勻,于25 ℃恒溫并避光反應(yīng)1 h,測定517 nm處的吸光值A(chǔ)i。用等體積的甲醇溶液代替DPPH溶液為樣品對照組Aj,消除樣品溶液對吸光值的影響,等體積的蒸餾水代替樣品溶液作空白對照,測吸光度為A0。

式(5)

1.2.11 ABTS+自由基清除能力測定 參照Poonsit等[22]的方法,制備ABTS+·儲備液,量取8 mL 濃度為7 mmol/L的ABTS溶液和141 μL濃度為140 mmol/L的過硫酸鉀溶液,將兩者混合后于4 ℃下避光反應(yīng)12～16 h。用pH為7.4,濃度為10 mmol/L的磷酸鹽緩沖液稀釋儲備液至OD=1.00±0.02后,備用。分別量取1 mL各濃度的各提取相溶液,加入ABTS+·溶液3 mL,混勻后,進(jìn)行避光反應(yīng)1 h,測定在734 nm處的吸光值A(chǔ)i。用1 mL純水作空白對照,同條件下測得吸光值A(chǔ)0;用3 mL純水作為樣品對照組,替代ABTS+·溶液,測得吸光值A(chǔ)j。

式(6)

1.2.12 羥基自由基(·OH)清除能力測定 參照Zeng等[23]方法,量取0.8 mL各濃度的醇提、水提相溶液,分別加入濃度2 mmol/L的FeSO4溶液2 mL、2 mmol/L的水楊酸1 mL和0.1%的H2O2溶液1 mL。在37 ℃恒溫水浴1 h,冷卻至室溫,測定其在510 nm波長處的吸光值A(chǔ)i。以去離子水作空白,同等條件下測吸光值A(chǔ)0;樣品對照組采用去離子水來代替水楊酸溶液,同等條件下測得吸光值A(chǔ)j。

式(7)

1.3 數(shù)據(jù)處理

每組數(shù)據(jù)平行測定三次,表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本獨(dú)立T檢驗(yàn),利用Origin 8.5軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 去/破壁靈芝孢子粉的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)

2.1.1 化學(xué)成分的對比與差異 由表1可見,去壁靈芝孢子粉在灰分、蛋白質(zhì)、水溶性膳食纖維和總多糖等4個指標(biāo)上均高于破壁靈芝孢子粉。而其非水溶性膳食纖維和總膳食纖維2個指標(biāo)較低。本實(shí)驗(yàn)去/破壁靈芝孢子粉所測得總?cè)坪涂偠嗵呛烤哂谖墨I(xiàn)[21-22],特別是經(jīng)去壁處理的靈芝孢子粉總多糖含量顯著高于其他靈芝孢子粉。

表1中微量金屬元素顯示,兩種靈芝孢子粉樣品中的有害金屬元素均低于《破壁靈芝孢子粉浙江標(biāo)準(zhǔn)T/ZZB 0474-2018》規(guī)定的限量安全標(biāo)準(zhǔn):Pb(≤2 mg/kg)、Cd(≤0.5 mg/kg)、As(≤1 mg/kg)、Hg(≤0.1 mg/kg)、Cu(≤20 mg/kg)、Cr(≤2 mg/kg)、Ni(≤1 mg/kg)。不同品種、產(chǎn)地、加工技術(shù)等與靈芝及其產(chǎn)品中金屬元素含量有緊密的關(guān)系[24]。鄒小龍等[25]對靈芝孢子粉破壁前后五種金屬元素含量進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)Cu元素在靈芝孢子粉破壁前后沒有明顯差異,而破壁靈芝孢子粉中Mn、Cr、Ni、Fe四種金屬元素均高于未破壁靈芝孢子粉。本實(shí)驗(yàn)中Cu、Cr、Ni、Se四種元素具有顯著差異性(P<0.05),Pb、Cd、Hg、As沒有顯著性差異(P>0.05),去壁靈芝孢子粉沒有因其生產(chǎn)工藝的改變而使其有害金屬元素含量超標(biāo),反而顯著提高了有益元素Se的含量,從而提高了產(chǎn)品的品質(zhì)。

表1 去/破壁靈芝孢子粉成分指標(biāo)Table 1 Properties of sporoderm-removal/brokenGanoderma lucidum spore powders

2.1.2 氨基酸含量的比較 本實(shí)驗(yàn)對去壁和破壁靈芝孢子粉中17種水解氨基酸的含量進(jìn)行了測定,色氨酸因其易被酸水解,未對其進(jìn)行檢測。由表2可見,由于孢子壁的去除,纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、精氨酸均顯著高于破壁靈芝孢子粉(P<0.05)。纈氨酸和異亮氨酸、亮氨酸作為人體必需氨基酸有助于修復(fù)組織,促進(jìn)身體成長,調(diào)節(jié)血糖,提供能量[26]。酪氨酸既是生糖又是生酮氨基酸,精氨酸在人體內(nèi)參與鳥氨酸循環(huán),促進(jìn)尿素的形成,從而降低血氨濃度。因此,去壁技術(shù)也提高了靈芝孢子粉的營養(yǎng)價值。

表2 去/破壁靈芝孢子粉氨基酸含量Table 2 Comparison of amino acids in sporoderm-removal/broken Ganoderma lucidum spore

2.1.3 三萜物質(zhì)的HPLC比較 圖1可見,去壁靈芝孢子粉中三萜類化合物在40～70 min洗脫時間段內(nèi)有更為豐富的峰,與標(biāo)準(zhǔn)樣品a中靈芝酸A、B和D可一一對應(yīng)。而破壁靈芝孢子粉在該保留時間段內(nèi)沒有對應(yīng)的特征峰?？梢?去壁靈芝孢子粉中具有更為豐富的三萜類物質(zhì)。而總?cè)坪繙y定結(jié)果顯示兩者結(jié)果相近,這可能是由于靈芝孢子粉中的油脂類物質(zhì)干擾紫外檢測的結(jié)果。因此,測定三萜物質(zhì)采用HPLC更為準(zhǔn)確[27]。同時,靈芝孢子粉因品種、產(chǎn)地、加工工藝的不同,都會影響其物質(zhì)成分組成及含量,靈芝孢子粉中壁殼含量占比60%以上,去壁技術(shù)將靈芝孢子粉中的三萜物質(zhì)有效釋放出來并加以濃縮,便于后續(xù)生產(chǎn)加工利用。

圖1 去/破壁靈芝孢子粉三萜物質(zhì)HPLC圖Fig.1 HPLC of triterpenoids in sporoderm-removal/brokenGanoderma lucidum spore powders注:a:靈芝酸混合標(biāo)準(zhǔn)品(1:靈芝酸B、2:靈芝酸A、3:靈芝酸D);b:去壁靈芝孢子粉;c:破壁靈芝孢子粉。

2.2 體外抗氧化活性

如圖2a所示,4種提取液還原力均隨樣品濃度增大而升高。濃度為1 mg/mL時,D-QC的總還原力高于A-PC和C-QS,其中A-PC的清除能力最弱。濃度為2 mg/mL時,D-QC的還原力最強(qiáng)。4種提取液對DPPH·清除能力也均表現(xiàn)出隨濃度升高而增強(qiáng)的特性,如圖2b所示,當(dāng)濃度達(dá)到2 mg/mL時,4種提取相的清除率都超過80%。如圖2c所示,4種提取液對ABTS+·均有很好的清除能力，其中D-QC的ABTS+·清除能力隨濃度增加而上升速度最快,其次為A-PC,在0.25 mg/mL時,分別達(dá)到了99.714%和93.106%。圖2d顯示,4種提取液的羥基清除能力均隨樣品濃度增大而提升。D-QC的清除能力最強(qiáng)。靈芝孢子粉提取液均有很好的清除能力,對比4組不同體外抗氧化試驗(yàn),達(dá)到最大測定濃度下,DPPH·清除能力的順序?yàn)?D-QC>C-QS>B-PS>A-PC,總還原力順序?yàn)?D-QC>B-PS>C-QS>A-PC其余2組抗氧化活性均為:D-QC>A-PC>C-QS>B-PS。

圖2 靈芝孢子粉提取液的抗氧化活性Fig.2 Antioxidant activities of extracts from Ganoderma lucidum spore powders注:a-PC:破壁靈芝孢子粉醇提相;b-PS:破壁靈芝孢子粉水提相;c-QS:去壁靈芝孢子粉水提相;d-QC:去壁靈芝孢子粉醇提相。

總體來說,去壁靈芝孢子粉提取物的抗氧化活性高于破壁靈芝孢子粉提取物,這是由于去壁技術(shù)將孢子壁去除,使得靈芝孢子中的活性物質(zhì)如多糖、三萜等完全溶出,進(jìn)而提高了提取物的活性物質(zhì)濃度。與水提物相比,以95%乙醇作為提取溶劑時,提取物的抗氧化活性更高,這可能是由于在使用95%乙醇作為提取溶劑時,靈芝孢子粉中醇溶性活性物質(zhì)如三萜、多酚、生物堿等[28-29]被提取出來,這些物質(zhì)的抗氧化活性高于靈芝孢子粉水提物中的多糖、核苷類化合物等[29],因此,靈芝孢子粉醇提物的抗氧化活性優(yōu)于水提物。相似的結(jié)論也曾被報道過,趙鐳等[30]報道在相同濃度下,不同靈芝提取物的OH清除能力,醇提相清除能力優(yōu)于水提相,與本實(shí)驗(yàn)的測定結(jié)果相近。

3 結(jié)論

本研究首次對去壁靈芝孢子粉進(jìn)行較為全面的物質(zhì)成分分析及抗氧化活性的測定,并將其與破壁靈芝孢子粉進(jìn)行對比,分析兩者之間差異性。其中破壁靈芝孢子粉和去壁靈芝孢子粉中總多糖的含量差距較大,分別為1.150%和12.129%;總?cè)坪繙y定結(jié)果分別為1.682%和2.556%。結(jié)合HPLC分析,去壁靈芝孢子粉中的三萜種類更為豐富,萃取得率更高。同時,去壁靈芝孢子粉中酪氨酸、精氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸高于破壁靈芝孢子粉?；谌?破壁靈芝孢子粉的物質(zhì)成分,其均表現(xiàn)出較好的抗氧化活性,為去壁靈芝孢子粉的進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論數(shù)據(jù)支持。

靈芝孢子粉在保健食品行業(yè)有較好的市場價值,本研究的物質(zhì)基礎(chǔ)對比只能客觀地描述去/破壁孢子粉的成分差異,若要應(yīng)用于人體,需將其活性物質(zhì)分離純化并進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、動物實(shí)驗(yàn)等研究。此外,應(yīng)用其開發(fā)新型保健品、藥妝品都需要進(jìn)一步進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn),以便更深入了解其活性物質(zhì)作用機(jī)制,并評價其安全性。