分析血清IL-34水平與幽門螺桿菌感染相關性胃疾病的關系*

周紅菊,楊 揚,向 瑜

(重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科，重慶 400016)

慢性胃炎是指由不同病因所引起的發(fā)生在胃黏膜上的慢性炎癥性病變，若治療不及時，可導致胃黏膜的腸上皮化生、萎縮、異型增生和癌變，發(fā)展成為胃潰瘍甚至是胃癌。全球有超過一半的人曾患有慢性胃炎[1]。據(jù)全球癌癥最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計，惡性腫瘤發(fā)病率中胃癌高居第5位，其病死率居惡性腫瘤病死率第3位[2]。慢性胃炎和胃癌作為嚴重影響人類健康的疾病越來越受到關注。幽門螺桿菌(HP)是引起人類慢性活動性胃炎、消化性潰瘍的重要致病因素，是世界上感染率極高的一種病原菌。HP感染后,浸潤到胃黏膜上的中性粒細胞、單核細胞產(chǎn)生炎性細胞因子，如白細胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)等，是造成胃黏膜損傷的重要因素[3-4]。IL-34作為一個新的細胞因子，在免疫和炎性反應中發(fā)揮重要作用，參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展和預后。目前尚無文獻報道IL-34在胃疾病中的水平變化，以及是否在HP感染進程中發(fā)揮作用。本研究旨在探討IL-34在幽門螺桿菌相關性胃疾病中的表達情況，以確定IL-34能否作為HP感染相關性胃疾病的血清學標志物。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2018年10月至2019年5月重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院(下稱本院)新入院的患有胃部疾病的患者共270例，在經(jīng)過分析篩選后共收集胃癌39例，慢性胃炎21例，所有胃癌、慢性胃炎患者均符合以下條件：(1)胃鏡和組織病理學確診為慢性胃炎或者胃癌；(2)排除合并有自身免疫性疾病、感染、其他腫瘤等疾病的病例；(3)排除納入研究前已經(jīng)進行過胃癌根治術或者放化療的病例；(4)排除就診前4周出現(xiàn)過急性感染或者重大刺激的病例。40例健康對照者來自同時期本院體檢中心的健康人群。本研究經(jīng)本院倫理委員會論證通過，患者或家屬簽署知情同意書后實施。

1.2方法

1.2.1血清IL-34水平檢測 所有待檢查的患者抽取靜脈血4 mL，離心后留取血清，標本置于-80 ℃保存待檢。應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒(R&D Systems,USA)檢測血清IL-34水平，操作條件和步驟嚴格按照說明書進行：(1)準備試劑、標準品、樣品，取出反應條；(2)每孔加100 μL稀釋劑RD1-77；(3)每孔加50 μL樣品或者標準品，震蕩混勻，室溫下孵育2 h；(4)每孔加400 μL洗液，清洗4次；(5)加200 μL酶結合物，震蕩混勻，室溫下孵育2 h；(6)重復第4步；(7)加200 μL底物混合物，避光放置30 min；(8)加50 μL終止液，Tecan酶標儀(Tecan奧地利有限公司)比色(測定波長450 nm，參比波長620 nm)；(9)通過標準曲線計算得出患者血清IL-34水平。

1.2.2HP感染檢測 采用幽門螺桿菌檢測試劑盒(膠體金法，北京康美天鴻生物科技有限公司)，定性檢測患者和健康對照者血清中幽門螺桿菌抗體存在的情況，以明確區(qū)分住院患者是否感染了幽門螺桿菌。操作嚴格按照說明書進行：(1)待試劑盒復溫后取出測試板；(2)在測試板樣品孔中加4滴血清；(3)15～20 min內觀察結果；(4)對照線和測試線都出現(xiàn)紅色判定為陽性，即患者血清中存在幽門螺桿菌抗體，判斷患者幽門螺桿菌感染陽性。

1.2.3腫瘤標志物檢測 采用雙抗體夾心電化學發(fā)光技術，運用Cobas 8000 e602全自動電化學發(fā)光分析儀對胃癌患者和慢性胃炎患者血清中腫瘤標志物甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原19-9(CA19-9)進行定量檢測，參考區(qū)間：AFP：0.6～5.0 ng/mL、CEA：0.2～10.0 ng/mL、CA19-9：0～27.0 U/mL。操作條件和步驟嚴格按照儀器說明書進行。

1.3統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)資料采用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，結果以中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25～P75)]進行統(tǒng)計學描述，組間比較采用曼-惠特尼U檢驗(Mann-WhitneyUtest)，相關性分析采用Spearman秩相關分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1一般臨床特征描述 39例胃癌患者、21例慢性胃炎患者和40例健康對照者的一般臨床特征描述見表1。在39例胃癌患者中，幽門螺桿菌感染陽性的患者12例(30.77%)，幽門螺桿菌陰性的患者27例。21例慢性胃炎組中，幽門螺桿菌感染陽性的患者5例(20.81%)，幽門螺桿菌陰性患者16例。40例健康對照幽門螺桿菌檢測均為陰性。

2.2胃癌、慢性胃炎組對照組血清IL-34表達水平比較 胃癌組IL-34的表達水平為6.57(3.86～9.71)pg/mL，與健康對照組比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(U=465，P<0.01)。慢性胃炎組IL-34的表達水平為12.71(2.89～19.42)pg/mL,與健康對照組比較，彩虹顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(U=203，P<0.01)。胃癌組和慢性胃炎組比較,IL-34表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 胃癌、胃炎患者與健康對照組一般臨床資料比較

注：-表示無數(shù)據(jù)。

表2 胃癌、慢性胃炎和健康組IL-34表害水平比較[M(P25～P75)]

注：-表示無數(shù)據(jù)。

2.3胃癌、慢性胃炎組IL-34表達的水平比較 在39例胃癌患者中，HP陰性組IL-34的表達水平為7.29(5.07～9.71) pg/mL，與健康對照組比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(U=294，P<0.01)。在慢性胃炎患者中，HP陰性組IL-34的表達水平為13.60(2.80～19.41) pg/mL，與健康對照組比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(U=157，P<0.05)。胃癌和慢性胃炎患者中HP陽性組IL-34的水平分別與健康對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 胃癌、慢性胃炎組IL-34表達水平比較[M(P25～P75)]

2.4腫瘤標志物AFP、CEA、CA19-9在胃癌和慢性胃炎組中的水平比較 AFP在胃癌組的表達水平為3.20(2.30～3.90)ng/mL,在慢性胃炎組的表達水平為2.40(1.02～3.30)ng/mL，二者比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CEA在胃癌組的表達水平為2.40(1.40～5.20)ng/mL,在慢性胃炎組的表達水平為1.46(1.18～2.70)ng/mL，二者比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。CA19-9在胃癌組的表達水平為10.73(5.10～35.40)U/mL,在慢性胃炎組的表達水平為10.90(7.40～21.35)U/mL，二者比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 AFP、CEA、CA19-9在胃癌、慢性胃炎組中的水平比較[M(P25～P75)]

2.5胃癌、慢性胃炎組血清IL-34與腫瘤標志物AFP、CEA、CA19-9的相關性分析 由Spearman秩相關分析可知，21例慢性胃炎患者中IL-34和腫瘤標志物AFP(r=0.124，P=0.594)、CEA(r=0.235，P=0.306)、CA19-9(r=0.014，P=0.953)均無相關性。39例胃癌患者中IL-34和腫瘤標志物AFP(r=-0.069，P=0.678)、CEA(r=-0.166，P=0.312)、CA19-9(r=0.069，P=0.678)均無相關性。

3 討 論

慢性胃炎是發(fā)生在胃黏膜上的慢性炎性病變，其發(fā)病率在各種胃病中居首位。目前，慢性胃炎仍然是最常見的感染性疾病之一，因其可發(fā)展成為胃潰瘍或者胃癌，仍受到研究者們的關注。胃癌是起源于胃黏膜上皮細胞惡性增殖所致的腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發(fā)病率居前列。據(jù)全球癌癥最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計，惡性腫瘤發(fā)病率中胃癌高居第5位，其病死率居惡性腫瘤病死率第3位，而且胃癌患者5年內的生存率低于30.00%[5-7]。隨著診斷技術的不斷進步，胃疾病的診斷也變得越來越精確。胃鏡檢查可對胃內的病變和情況做初步的判斷，病理學的檢查可用于確診胃內的惡性病變，但二者均具有滯后性，無法及時發(fā)現(xiàn)早期胃部惡性病變的患者。而胃疾病，尤其是胃癌，其療效的好壞以及遠期生存率的高低主要取決于發(fā)現(xiàn)時所處的疾病病程。在這種情況下，可用于早期輔助診斷胃癌診斷的生物學標志物就具有非常重要意義。目前在研究的人類表皮生長因子受體2、上皮鈣黏素、肝細胞生長因子受體、微RNA均為熱門胃癌生物學標志物[7-10]。本研究也旨在發(fā)現(xiàn)可用于早期輔助診斷胃癌的生物學標志物。

幽門螺桿菌是由WARREN和MARSHALL于1983年從慢性胃炎和消化性潰瘍患者胃黏膜中分離出來的一種彎曲樣桿菌，是慢性胃炎和消化性潰瘍的主要病因，超過80.00%的攜帶者并不會出現(xiàn)癥狀。HP在胃部的存活和繁殖依靠多種病理因子，如VacA、NapA、CGT、GGT等，同時可以操控多種細胞外免疫受體，如integrin-β2(CD18)、EGFR、CD74等，引發(fā)胃部的進一步病變[11]。IL-34是于2008年新發(fā)現(xiàn)的細胞因子，主要表達于人體的巨噬細胞、成纖維細胞、小神經(jīng)膠質細胞和M-CSF共同作為CSF-1的配體。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，IL-34參與單核巨噬細胞的存活和分化，后者能產(chǎn)生多種細胞因子如IL-6、TNF等。已有研究報道血清IL-34能預測非病毒性肝癌的生存率[12]，IL-34mRNA在不同乳腺癌型別中表達有差異[13]，但IL-34與HP相關性胃疾病的關系尚少有無相關報道。

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組IL-34的表達水平為6.57(3.86～9.71) pg/mL，慢性胃炎組IL-34的表達水平為 12.71(2.89～19.42) pg/mL，與健康對照組比較，血清IL-34水平均升高，差異均有統(tǒng)計學意義(U=465,P<0.01；U=203,P<0.01)。有文獻報道，IL-34在應激細胞中的mRNA和蛋白水平上調，這種誘導主要受NF-κB調節(jié)[14]。NF-κB是一組轉錄因子(RelA、RelB、c-Rel、NF-κB1、NF-κB2)的集合，可調節(jié)一大類靶基因如免疫相關受體、細胞因子、促炎因子等的表達。胃部炎癥會引起巨噬細胞、中性粒細胞、淋巴細胞等的浸潤，同時分泌一些促炎因子，如IL-6、IL-10、IL-11、IL-32等。高水平的促炎因子會刺激細胞內激酶的磷酸化，誘導轉錄因子如NF-κB、AP-1等表達，因此IL-34在胃癌和慢性胃炎中水平升高，尤其在慢性胃炎中升高更為明顯。

在胃癌患者中，HP陰性組IL-34的表達水平為7.29(5.07～9.71) pg/mL與健康對照組比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(U=294，P<0.01)。在慢性胃炎患者中，HP陰性組IL-34的表達水平為13.60(2.80～19.41) pg/mL，與健康對照組比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(U=157，P<0.05)。胃癌和慢性胃炎患者中HP陽性組IL-34的水平分別與健康對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。這說明IL-34在幽門螺桿菌陰性的胃癌和慢性胃炎患者體內表達更為活躍。有文獻報道，HP分為Ⅰ型和Ⅱ型，前者與后者相比可產(chǎn)生細胞毒素，毒性比較強。Ⅰ型HP菌株攜帶有約40 kb的特殊基因片段，即cag致病島(cagPAI)，只存在于致病力強的菌株上。而HP攜帶cagPAI的菌株比cagPAI陰性的菌株具有更強激活NF-κB途徑的能力，因此，cagPAI也被確認為是NF-κB的重要誘導因子[15]。本研究中并未對幽門螺旋桿菌陽性的患者進行cagPAI的檢測，就無法確認研究中所檢測到的慢性胃炎和胃癌患者中感染的HP菌株是否攜帶cagPAI。根據(jù)本研究結果推測，納入實驗的胃癌和慢性胃炎的患者可能感染的是cagPAI陰性的HP菌株，導致其無法激活NF-κB通道，進而影響IL-34的表達水平。

4 結 論

因此，血清IL-34可以作為幽門螺桿菌感染陰性的胃癌、慢性胃炎的血清學標志物。