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    萊菔子對胃腸積熱大鼠胃腸動力的影響?

    2020-06-15 02:08:32賀建禎劉鐵鋼馬雪顏鮮馥陽汪伯川劉邵陽崔麗軍王雙成谷曉紅
    中國中醫(yī)急癥 2020年5期
    關鍵詞:萊菔子灌胃小腸

    賀建禎 劉鐵鋼 馬雪顏 鮮馥陽 汪伯川 黃 羚 劉邵陽 崔麗軍 王雙成 谷曉紅

    (北京中醫(yī)藥大學,北京 100029)

    胃腸積熱是無形熱邪或有形熱結壅于胃腸而導致的胃腸熱盛的狀態(tài),可影響胃腸的推動能力[1]。小兒形氣未充,胃腸薄弱,常攝入高熱量食物容易形成胃腸積熱。平素胃腸積熱在外感性肺熱證的發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要作用,是外感肺熱證的重要內因。萊菔子具有消食除脹,降氣化痰的功效。臨床中運用單味萊菔子治療食積引起的發(fā)熱效果明顯[2]。目前,對于萊菔子的研究主要集中在成分提取的研究[3],不同劑量對胃腸動力影響及其作用機制的研究相對不足。本文研究不同劑量的萊菔子對胃腸動力的影響并對其機制進行闡述,以期為萊菔子的臨床運用提供實驗數據方面的支持。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 SPF級雄性SD大鼠,60只,體質量110~110 g,購于北京斯貝福生物技術有限公司,動物許可證號:SYXK(京)2016-0038。動物飼料分為普通飼料、高熱量飼料兩種。高熱量飼料購于北京斯貝福生物科技有限公司,其配制方法為鍋巴、巧克力、牛肉粒、面粉按照質量1∶2∶2∶1的比例配制,并加入適量蒸餾水,制作成與普通飼料形狀相同的圓柱狀物。

    1.2 藥物及試劑 萊菔子購自北京中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂,傳統(tǒng)煎藥法煎煮?;凇吨袊幍洹?015版將萊菔子臨床常用劑量設為12 g,人鼠劑量換算系數為6.17[4],按照臨床成人劑量的 3.085 倍、6.17 倍、12.34倍、24.68倍折算,折算后萊菔子低、中、高、超高各劑量組的生藥質量濃度分別為0.015、0.03、0.06、0.12 g/mL。超高劑量萊菔子混懸液制作:單味萊菔子48 g,用純水1 L(北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院提供)浸泡15 min后倒入家用電砂鍋中,用4檔自動煎煮75 min。煎煮結束后將藥液倒入無菌燒杯中,并補充純水至388 mL,自然冷卻至室溫。各劑量組質量濃度比為超高劑量∶高劑量∶中劑量∶低劑量=8∶4∶2∶1。各劑量組按以上比例用純水稀釋分別存入無菌燒杯,密封后放入4℃冰箱保存,使用前將其取出,自然恢復至室溫。營養(yǎng)性半固體糊制備[5]:取10 g羧甲基纖維素鈉,放入裝有250 mL蒸餾水的燒杯中,攪拌均勻后將其放在恒溫加熱器上加熱2 h,直到羧甲基纖維素鈉完全溶于水中,再分別加入16 g奶粉、8 g糖、8 g淀粉和2 g活性炭末,用玻璃棒將其攪拌均勻,并放入冰箱中保存。大鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒(ab65328)、大鼠胃饑餓素(Ghrelin)ELISA試劑盒(ELAR-GHR-1)、大鼠胃泌素(GAS)試劑盒(ELAR-GAS-1)、大鼠P物質(SP)試劑盒(ELAR-SP-1)均購于北京百諾威生物科技有限公司。

    1.3 分組與造模 按隨機數字表法將大鼠隨機分為正常組、胃腸積熱組及萊菔子低、中、高、超高劑量組共6組,每組10只。胃腸積熱造模成功標準參照《大鼠/小鼠辨證論治實驗方法學》[6],大鼠表現為小便黃、大便秘結或溏泄、體質量增加緩慢等與小兒胃腸積熱證臨床表現一致則認為造模成功。正常組給予普通飼料喂養(yǎng)及2 mL/100 g純水灌胃,胃腸積熱組、萊菔子各劑量組在實驗的第1~3天給予高熱量飼料喂養(yǎng)及2 mL/100 g的52%牛奶溶液灌胃。各組共灌胃3 d。

    1.4 干預方法 造模成功后,實驗第4~6天正常組、胃腸積熱組給予2 mL/100 g的純水灌胃;超高劑量組給予0.12 g/mL的萊菔子混懸液灌胃;高劑量組給予0.06 g/mL的萊菔子混懸液灌胃;中劑量組給予0.03 g/mL的萊菔子混懸液灌胃;低劑量組給予0.015 g/mL的萊菔子混懸液灌胃。以上各組每日灌胃兩次,每次2 mL/100 g,持續(xù)3 d。

    1.5 標本采集與檢測 1)大鼠體征。開始實驗后,每天固定時間更換食水,觀察大鼠體征變化(毛色、精神狀態(tài)、體質量等)。2)大鼠胃腸病理。給藥結束后,禁食不禁水24 h后處死動物,取大鼠胃竇與結腸組織做HE染色,在光鏡下觀察胃腸組織病理變化情況。3)小腸推進率。用黑色半固體糊狀物灌胃,20 min后開始麻醉,10 min后取出大鼠全部腸部,并用直尺測量幽門至黑色物質前沿的距離以及幽門到盲腸的全長,小腸推進率=(幽門至黑色物質前沿的距離/幽門到盲腸的全長)×100%。4)血清中Ghrelin、NO、GAS、SP含量變化。腹主動脈取血,靜置4 h后離心,取血清,按照ELISA試劑盒說明書操作檢測Ghrelin、NO、GAS、SP含量。

    1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPASS25.0統(tǒng)計軟件。各組計量數據以()表示。符合正態(tài)分布者,若方差齊則用單因素方差分析。不符合正態(tài)分布者用非參數檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 各組大鼠體征比較 正常組大鼠皮毛順滑,毛色雪白有光澤,活潑好動,小便淡黃,大便梭狀,顏色棕黑。胃腸積熱組大鼠皮毛較為蓬松,毛色略黃無光澤,整體精神較差,小便黃,大便秘結。經過治療后,萊菔子高劑量組與超高劑量組大鼠精神狀態(tài)好轉,毛色正常,更加靈動,小便恢復成淡黃色,大便干濕適度,而中、低劑量組體征無明顯變化。

    2.2 各組大鼠體質量比較 見表1。各組大鼠的體質量逐漸增加。正式實驗的第1、3、5天,正常組大鼠與胃腸積熱組、萊菔子各劑量(低、中、高、超高)組大鼠體質量存在明顯差異(P<0.01)。

    2.3 各組大鼠鏡下胃組織、結腸組織切片觀察 鏡下觀察正常組大鼠結腸組織杯狀細胞排列整齊,細胞結構完整,組織無充血、水腫及炎癥細胞表現。胃腸積熱組大鼠結腸組織相對于正常組出現了細胞排列紊亂的現象,但結構相對完整,黏膜層出現少量充血,無水腫及炎癥細胞表現。經萊菔子治療后,各劑量組大鼠結腸組織細胞結構完整,排列整齊,無充血、無水腫及炎癥細胞表現。見圖1。鏡下觀察正常組大鼠胃竇組織中黏膜組織結構正常,無充血表現,黏液細胞較多,胃腺體結構整齊。胃腸積熱組中黏液細胞減少,胃腺體有充血表現。經過萊菔子治療后,各劑量組表現均與正常組無明顯差異。見圖2。

    表1 各組大鼠體質量比較(g,±s)

    表1 各組大鼠體質量比較(g,±s)

    與正常組比較,△P<0.05,△△P<0.01。下同

    組別正常組胃腸積熱組萊菔子低劑量組萊菔子中劑量組萊菔子高劑量組萊菔子超高劑量組n 10 10 10 10 10 10第1天127.00±2.89 118.28±3.41△△119.99±4.07△△120.81±4.44△△122.46±4.86△119.91±3.74△△第3天142.91±3.94 124.10±3.32△△124.64±4.68△△122.76±4.51△△125.87±4.42△△121.60±5.32△△第5天162.12±4.37 152.11±6.63△△150.32±6.35△△150.04±6.42△△153.11±6.50△△147.69±6.45△△

    圖1 大鼠結腸組織光鏡圖(HE染色,200倍)

    圖2 大鼠胃組織光鏡圖(HE染色,200倍)

    2.4 各組大鼠干預后小腸推進率比較 見表2。與正常組相比,胃腸積熱組、萊菔子低劑量組、中劑量組小腸推進率降低,存在明顯差異(P<0.05);與胃腸積熱組相比,萊菔子超高劑量組小腸推進率增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    2.5 各組大鼠血清中Ghrelin、NO、GAS、SP含量比較 見表3。各組血清中NO含量差異較為明顯。與正常組相比,胃腸積熱組血清中NO含量明顯升高(P<0.05);與胃腸積熱組相比,萊菔子高劑量組與超高劑量組血清中NO含量降低(P<0.05)。各組血清中Ghrelin含量差異顯著(P<0.05)。與正常組相比,胃腸積熱組、萊菔子低劑量組、中劑量組血清中Ghrelin含量明顯降低(P<0.05);與胃腸積熱組相比,萊菔子超高劑量組血清中Ghrelin含量明顯升高(P<0.05),同時高于低劑量組與中劑量組(P<0.05)。與正常組相比,胃腸積熱組血清中SP含量明顯降低(P<0.05);與胃腸積熱組相比,高劑量組與超高劑量組血清中的SP含量明顯下降(P<0.05)。各組血清中GAS含量無明顯差異(P>0.05),但胃腸積熱組經治療后GAS含量逐漸增多,萊菔子超高劑量組的GAS含量低于其他各組。

    表2 各組大鼠小腸推進率比較(%,±s)

    表2 各組大鼠小腸推進率比較(%,±s)

    與胃腸積熱組比較,?P<0.05,??P<0.01。下同

    組別正常組胃腸積熱組萊菔子低劑量組萊菔子中劑量組萊菔子高劑量組萊菔子超高劑量組n 10 10 10 10 10 10小腸推進率66.56±17.32 53.16±9.55△56.45±7.70△56.49±8.83△59.87±4.96 64.87±10.80*

    表3 各組大鼠血清中Ghrelin、NO、GAS、SP含量比較(±s)

    表3 各組大鼠血清中Ghrelin、NO、GAS、SP含量比較(±s)

    組別正常組胃腸積熱組萊菔子低劑量組萊菔子中劑量組萊菔子高劑量組萊菔子超高劑量組n 10 10 10 10 10 10 NO(μmol/L)44.48±4.32 51.98±5.86△46.06±6.38 47.39±7.28 45.21±6.45*44.59±6.87*Ghrelin(ng/mL)33.52±9.30 10.52±4.29△10.83±3.70△9.78±6.78△13.86±6.70 33.45±9.93**SP(ng/mL)63.21±5.55 56.95±3.87△57.16±5.25△58.87±4.53 60.75±4.06 61.86±5.25*GAS(ng/mL)31.87±3.30 30.78±5.20 31.23±3.52 33.42±3.83 34.38±4.96 30.48±4.78

    3 討 論

    隨著經濟的不斷發(fā)展,人們的食物種類呈現了多樣化趨勢,而甜食、油炸類食品以及各種零食含有較高的熱量。小兒臟腑嬌嫩,形氣未充,脾胃功能弱,高熱量飲食的過多攝入容易導致胃腸積熱證。胃腸積熱證的病位在陽明胃與大腸,其或因過食肥甘厚味導致陽氣內郁,蘊于胃腸;或因情志不遂,氣郁化火,壅于胃腸;或因外邪直中或傳變至陽明胃腸,從陽化熱、邪熱壅塞而成,在臨床中常有腹部脹痛、大便干結等胃腸動力不足的表現。相關實驗研究表明銀萊湯可以有效改善肺胃積熱大鼠胃腸動力不足的表現,而萊菔子是銀萊湯的重要組成部分之一[5]。萊菔子最早記載于《雷公炮制藥性解》,李中梓稱其為“其子下氣猶捷,有推墻倒壁之功,可吐風痰”?!侗静菥V目》指出“萊菔子之功,長于利氣”。

    近些年,國內外科研工作者對萊菔子及其提取物進行了很多臨床及實驗研究。鄧麗英等[7]用萊菔子外敷于神闕穴來治療慢性阻塞性肺疾病合并腹脹的患者,并與常規(guī)護理干預對比,結果發(fā)現治療組的效果要明顯優(yōu)于對照組,表明萊菔子具有很好的行氣作用。李晨等[8]以50 g萊菔子水煎服治療習慣性便秘患者,藥后排氣增加,腹脹消失,效果明顯。任秦有等[9]通過胃電圖及胃排空方法觀察萊菔子提取物對功能性消化不良患者的影響,結果表明萊菔子提取物可以通過改變胃電的活動進而改善胃排空障礙。同時相關研究表明萊菔子提取物可以通過調節(jié)回腸肌電慢波活動而在一定程度上改善腸梗阻大鼠的胃腸動力[10]。但不同劑量萊菔子對胃腸動力的影響及其作用機制尚未明確。

    本實驗研究發(fā)現胃腸積熱狀態(tài)下大鼠的精神狀態(tài)較差,體質量降低,大便干結,小便黃,這與胃腸積熱證的臨床表現一致,表示造模成功,同時小腸推進率降低。經萊菔子治療后,高劑量組及超高劑量組改善明顯,但超高劑量組的體質量恢復較慢,這可能是萊菔子劑量過大,辛散耗氣較強,損傷了大鼠的正氣所致,其作用機制尚需進一步探討。胃腸積熱大鼠的結腸出現細胞排列紊亂的病理改變,胃竇的黏液細胞減少,胃腺體有少量充血的表現,經各劑量萊菔子治療后,均恢復了正常,可見萊菔子低劑量組和中劑量組對胃腸積熱證的胃腸病理組織都有一定的改善作用。

    胃腸激素分布于胃腸黏膜細胞之間,對胃腸動力的調節(jié)起到重要作用,其中Ghrelin可以保護胃黏膜,刺激食量,對胃腸動力的調節(jié)起到促進作用[11],NO可以抑制消化道的神經肌肉活動[12]。SP屬于興奮性腦腸肽,主要分布于胃腸道,可以促進胃腸道平滑肌的運動[13]。本研究發(fā)現,高劑量及超高劑量萊菔子對于胃腸積熱大鼠血清中的Ghrelin、NO及SP有較好的改善作用??赡芘c萊菔子具有降氣消食的作用有關,它可以促進胃腸的蠕動,改善消化功能,進而增強了小腸推進率。胃腸積熱狀態(tài)大鼠的Ghrelin及SP含量明顯降低,NO含量明顯增高,這與胃腸積熱證患者臨床中所出現的脘腹脹滿、食欲不振等表現一致。萊菔子低劑量組及中劑量組血清Ghrelin及NO含量并無明顯差異,可能是因為低劑量和中劑量藥效較弱,其降氣作用并不明顯。GAS是胃腸道分泌的重要激素之一,它可促進消化液分泌功能,從而增加胃腸道的運動。在本實驗中各組GAS含量無明顯差異,但胃腸積熱組平均值低于正常組,經治療后GAS含量有上升趨勢,而超高劑量組卻降低,究其原因,GAS是由胃竇部G細胞分泌,并直接進入血液循環(huán),但半衰期較短,短時間內會被腎臟代謝出體外,所以血清內的GAS含量具有不穩(wěn)定性。萊菔子超高劑量組中的GAS含量相對較低,可能是由于萊菔子具有加快血液流通的作用[14-15],進一步促進了血液中GAS的代謝。

    綜上所述,萊菔子可以升高胃腸積熱大鼠血清中Ghrelin、SP含量,降低NO含量,增強小腸推進作用,而大劑量萊菔子對胃腸的推動作用更加明顯。萊菔子成分多樣,其有效成分與胃腸動力之間的作用機制尚未明確,需要進一步研究。

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