四季菊中總黃酮超聲提取工藝研究

劉存瑞，曾憲佳，喬秀文

(1.蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術學院，江蘇 蘇州 215000；2.石河子大學 化學化工學院，新疆 石河子832003)

1 引言

四季菊為菊科植物，研究發(fā)現其花朵中含有黃酮類化合物。黃酮類化合物有活血化瘀，能抑制肝臟中膽固醇的合成和加快膽固醇的分解代謝，有抗炎解熱的作用。能抗自由基、抑制脂質過氧化，也具有降血脂、抗菌抗病毒等多種保健功能[1，2]。研究表明 ,利用超聲波產生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應、攪拌作用等 ,可以加速藥物有效成分進入溶劑 ,從而提高提出率 ,縮短提取時間 ,并且免去高溫對提出成分的影響。

本實驗通過正交實驗優(yōu)化四季菊中黃酮類物質提取工藝[3]，旨在探索一種快速簡便、效率高的提取方法。

2 儀器與試劑

2.1 儀器

紫外可見分光光度計(S54型上海棱光技術有限公司)；電子天平(BS210S北京賽多利斯儀器系統有限公司)；超聲波清洗器(KQ-250B型，昆山市超聲儀器有限公司)；酸度計(pHs-3c型，上海雷磁儀器廠)。

2.2 試劑

石油醚、丙酮、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳、亞硝酸鈉 、硝酸鋁、氫氧化鈉、濃鹽酸、三氯化鐵、鎂粉。(均為分析純，天津市富宇精細化工有限公司)蘆丁對照品(購自中國藥品生物制品檢定所) 四季菊黃色花瓣(石河子大學藥學院)：剪碎，80℃烘干。

3 實驗方法

3.1 蘆丁標準曲線的制作

(1)精確稱取120 ℃干燥恒重的蘆丁標準品0.001 g，加乙醇溶解定溶至50.00 mL容量瓶中搖勻，制成濃度是0.2 mg·mL-1的標準溶液。

(2)精確稱取120 ℃干燥恒重的蘆丁標準品0.001 g，加65%的乙醇溶解定溶至100.00 mL容量瓶中搖勻[4]，精密移取20.00 mL,置于50.00 mL容量瓶中 ,用水稀釋至刻度 ,搖勻,即得(每1 mL含蘆丁對照品0.2 mg)。

準確移取標準溶液0.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL于容量瓶中，分別加水至6.00 mL，加5%的亞硝酸鈉溶液1.00 mL，放置6 min后，加10%的硝酸鋁溶液1.00 mL，放置6 min,加1 mol·L-1的NaOH溶液10.00 mL，加水至刻度，放置15 min后用分光光度計在波長510 nm下測定吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=11.538X-0.0012(R2=0.9992)線性良好[5,6]。

3.2 四季菊中黃酮的提取

準確稱取四季菊干花，加入一定濃度的乙醇溶液，按一定料液比，超聲提取5～15 min后抽率，所得濾液定容在25.00 mL容量瓶中。

3.3 四季菊中黃酮的含量測定

取各種不同實驗條件下的濾液2.50 mL于25.00 mL容量瓶中，分別加水至6.00 mL，加5%的亞硝酸鈉溶液1.00 mL，放置6 min后，加10%的硝酸鋁溶液1.00 mL，放置6 min后,加1 mol·L-1的NaOH溶液10.00 mL，加水至刻度，搖勻，放置15 min，在510 nm波長處下測定吸光度，由回歸方程計算樣品中總黃酮的含量[7,8]。

3.4 正交實驗設計

在單因素實驗的基礎上，為了確定超聲提取總黃酮的最佳工藝條件，采用L9 (34)正交表以乙醇濃度、 料液比、 超聲時間3個因素，選擇較優(yōu)區(qū)域的3個水平做正交實驗，結果見表1。

表1 因素水平

4 結果與分析

4.1 正交實驗結果

按正交表1設計方案進行試驗，以分光光度法測得四季菊中總黃酮含量為評價指標進行分析，結果見表2和表3。

表2 四季菊中總黃酮超聲提取正交實驗結果

表3 超聲提取結果的方差分析

注：F0.05(2、2)=19

從表2可以確定超聲法提取四季菊總黃酮的最佳常規(guī)提取工藝組合為A2B3C3，即超聲時間為10 min，乙醇濃度為 70%，料液比為1∶12，由表2、表3數據可以看出，影響四季菊中黃酮含量的主要因素為超聲時間、其次為料液比、乙醇濃度影響較小。表3中方差分析結果表明，各因素間無顯著差異，說明幾個因素的聯合作用對實驗結果發(fā)生影響[9]。

4.2 正交放大實驗

為了考察上述實驗結果，按工藝條件A2B3C3進行放大試驗，平行測定3次，分別測定四季菊中總黃酮的含量，平均含量為3.35%。由正交實驗結果表明實驗所得最佳工藝條件可靠、可行[10]。

5 討論和結論

本實驗選擇超聲提取法提取四季菊中的總黃酮，實驗確定提取的最佳條件是：乙醇的濃度為70%，料液比為1∶12,超聲提取10 min。

超聲提取法應用于中藥中有效成分的提取，具有操作簡單、所需時間短、效率高、無需加熱等特點。研究表明，超聲波作用于植物，可以產生強大的空化作用。空化可加速植物中的有效成分進入溶劑 ,增加有效成分的提取率。除空化作用外，超聲波還具有機械振動、乳化、擴散、擊碎等多級效應，有利于使植物中有效成分的轉移，并充分和溶劑混合，促進提取的進行。超聲提取法具有節(jié)能、省時、提取率高的優(yōu)點。