TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

賈光輝，趙永強(qiáng)

烏蘭察布市中心醫(yī)院普外科，內(nèi)蒙古烏蘭察布 012000

大腸癌是當(dāng)前人類眾多疾病中非常常見的一種惡性腫瘤之一，在眾多的腫瘤死亡原因中占據(jù)著較高的排名，并且正呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢[1]。其發(fā)生發(fā)展是由于多因素參與作用的過程。當(dāng)前在關(guān)于惡性腫瘤發(fā)生的癌基因眾多的研究中,曾有專家學(xué)者提出多基因協(xié)同作用假說,他認(rèn)為在腫瘤進(jìn)行發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移的各個(gè)階段,至少會(huì)有兩個(gè)或者是兩個(gè)以上功能不同的異常激活的癌基因在其中發(fā)揮著各自不同的作用[2]。而轉(zhuǎn)化生長因子β是一類多功能的多肽類生長因子，TGF-β1是該家族中重要的一員[3]。TGF-β1在各種腫瘤中的過度表達(dá)以及臨床病理特征與預(yù)后中具有著密切的關(guān)系。Smad 4基因則是定位于18q21染色體,其編碼產(chǎn)物 Smad 4蛋白是 TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中可以發(fā)揮出瓶頸作用的一個(gè)關(guān)鍵因子[4]。該研究通過采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)于2017年1月—2018年12月該院60例大腸癌組織觀察組與同期的正常人的大腸組織60例對(duì)照組檢測TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)以及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察組為60例大腸癌組織，均采用該院部分大腸癌手術(shù)切術(shù)組織的石蠟標(biāo)本，該次研究經(jīng)過院倫理委員協(xié)會(huì)批準(zhǔn)，患者均同意該次研究，并簽署知情同意書。其中觀察組男性35例，女性25例；年齡最小為32歲，最大為65歲，平均48.5歲。對(duì)照組正常人的大腸黏膜組織，同樣具有60例，其中男性32例，女性28例；年齡最小為35歲，最大為71歲，平均53歲。其中結(jié)腸癌 50例,結(jié)腸炎50例,正常結(jié)腸黏膜20例。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。

1.2 方法

觀察組和對(duì)照組同樣經(jīng)常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋,4 μm切片等一系列操作處理,在經(jīng)過切片之后，分別進(jìn)行組織病理學(xué)檢查以及免疫組化染色[5]。采用免疫組織化學(xué)SABC法進(jìn)行免疫組化染色。用已知陽性染色組織切片作為陽性對(duì)照,陰性對(duì)照則是采用 PBS液代替一抗孵育已知陽性切片。兔抗人TGF-β1多克隆抗體為 Santa Cruz產(chǎn)品。兔抗人 Smad4多克隆抗體、即用型 SABC試劑盒以及DAB染色試劑盒均來自于武漢博士德生物工程有限公司。

具體的操作方法也就是觀察組采用SABC法[6]，切片經(jīng)二甲苯脫蠟以及梯度酒精脫水,在滴加3%過氧化氫溶液之后，將其放置于室溫下孵育10 min滅活內(nèi)源性過氧化物酶,并經(jīng)過 3次3 min的PBS沖洗之后，將其中滴加一抗,并再次進(jìn)行60 min的室溫孵育,以及PBS沖洗3 min 3次,滴加二抗,經(jīng)30 min的室溫孵育之后,3 min 3次的PBS沖洗,滴加SABC進(jìn)行10 min的室溫孵育，并經(jīng)過蒸餾水沖洗、蘇木素復(fù)染之后,對(duì)其進(jìn)行脫水，等到其透明后觀察中性樹脂封片。

1.3 結(jié)果判定

TGF-β1以及 Smad4結(jié)果分析分別以文獻(xiàn)[7]進(jìn)行計(jì)分,按照分?jǐn)?shù)的高低進(jìn)行分類：0～1分為陰性或無表達(dá)(-)；2～3分則是弱陽性表達(dá)(±);4～8分是陽性表達(dá)(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用（）進(jìn)行表示，采用秩和檢驗(yàn)，或 t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組中的TGF-β1及Smad4表達(dá)

觀察組中的TGF-β1的陽性率為75.5%（45/60),對(duì)照組的TGF-β1的陽性率為3.3%（2/60)。見表1。而觀察組中的Smad4陽性率為93.3%（56/60)，對(duì)照組的Smad4陽性率為 50.0%（30/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 2。

表1 觀察組與對(duì)照組中的TGF-β1的表達(dá)Table 1 Expression of TGF-β1in observation group and control group

表2 觀察組與對(duì)照組中的Smad4的表達(dá)Table 2 Smad4 expression in the observation group and the control group

2.2 TGF-β1及Smad4表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系

TGF-β1及Smad4的表達(dá)與大腸癌分化程度不具有關(guān)系差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；與臨床Dukes分期具有明顯的關(guān)系,并且伴隨著病理特征的進(jìn)展，其陽性率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表 3。

表 3 TGF-β1的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]Table 3 Relationship between TGF-β1expression and clinicopathological characteristics of colorectal cancer[n(%)]

2.3 TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中不同的TNM分期的表達(dá)

TGF-β1及Smad4表達(dá)存在著明顯的下降，與腫瘤的腫瘤分期和分化程度具有著直接的關(guān)系，并且TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中的 I期，II期，III期，IV期分期具有明顯的關(guān)系，TGF-β1及Smad 4的缺失程度隨胃腸腫瘤不同的TNM分期的進(jìn)展而更加嚴(yán)重(P＞0.05)，見表4。

表4 TGF-β1及Smad4在大腸癌組織中不同的TNM分期的表達(dá)Table 4 Expression of TGF-β1and Smad4 in different TNM stages in colorectal cancer tissues

2.4 兩組患者的生存率比較

經(jīng)過1年時(shí)間的隨訪調(diào)查，兩組患者的生存曲線見圖1。

圖1 生存時(shí)間Figure 1 Time to live

3 討論

TGF-β1是一種具有多種生物學(xué)活性的多肽生長因子,TGF-β共有3種存在的形式，分別為 TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，這三者之間的生物學(xué)作用非常的相似,其中TGF-β1含量最高所以具有最高的代表性。它可以對(duì)于細(xì)胞的增殖、形態(tài)、分化形成雙重作用。陳玉紅等[8]專家學(xué)者發(fā)現(xiàn)TGF-β1可以有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長，其在組織中的表達(dá)表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.491,P＜0.01）,該因子能有效介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

該研究結(jié)果顯示，觀察組中的TGF-β1的陽性率為75.5%（45/60), 對(duì)照組的 TGF-β1的陽性率為 3.3%（2/60)。而觀察組中的Smad4陽性率為93.3%（56/60)，對(duì)照組的Smad4 陽性率為 50.0%（30/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這與袁學(xué)敏與陳玉紅等[8-9]的TGF-β1與 Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)及意義的研究表達(dá)一致：大腸癌組織中Smad4蛋白的陽性表達(dá)率為44.8%,較正常對(duì)照組(95.8%)明顯降低 (P＜0.05);TGF-β1Smad4在大腸癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.521;P＜0.01)。該研究結(jié)果顯示，有轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中的TGF-β1的表達(dá)水平也會(huì)比無轉(zhuǎn)移的大腸癌組織明顯要高,這主要是因?yàn)門GF-β1的高表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移具有直接的關(guān)系。發(fā)生該作用的可能機(jī)制在于：腫瘤組織中高表達(dá)的 TGF-β1會(huì)存在基因突變,并且會(huì)減弱細(xì)胞增殖、分化的雙重作用,從而導(dǎo)致的形成與發(fā)生腫瘤；而高表達(dá)的 TGF-β1可以起到刺激腫瘤內(nèi)血管形成的作用，并且還會(huì)使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫的監(jiān)視,可能是由于其具有促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制。

Smad4基因在最早的時(shí)候是由 Hahn等在胰腺癌中發(fā)現(xiàn)的,并且Smad4又稱之為 DPC4基因。經(jīng)過專家研究表明,Smad4屬于抑癌基因,可以有效地抑制患者的腫瘤細(xì)胞的生長。 Smad 4在 TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中同樣有著極為關(guān)鍵的作用,其發(fā)生缺失或者是突變都有可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)于 TGF-β1的生長抑制產(chǎn)生耐受,從而促進(jìn)腫瘤的生長[8]。TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)中的唯一公共個(gè)體就是Smad4蛋白,經(jīng)過TGF-β1的刺激,Smad4參與誘導(dǎo) P15(Ink4B)轉(zhuǎn)錄,可以有效的抑制腫瘤細(xì)胞增殖[9]。

綜上所述，經(jīng)過對(duì)于 TGF-β1及 Smad4進(jìn)行檢測,可以幫助臨床醫(yī)生更加了解腫瘤的生物學(xué)行為,并且還能夠有效地預(yù)測腫瘤的復(fù)發(fā)傾向,可以術(shù)后其他輔助治療提供有用的信息,從而使腫瘤患者的愈后得到改善。