重癥肌無(wú)力患者血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)及臨床意義

令狐永會(huì)

云南省文山州中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南文山 663000

重癥肌無(wú)力的發(fā)病機(jī)制主要是由于人體神經(jīng)以及肌肉接頭處出現(xiàn)的傳遞障礙導(dǎo)致的，受到抗乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)的細(xì)胞免疫依賴性影響，屬于一種自身免疫性疾病[1]?；颊咴诨疾≈竺黠@感到肌肉無(wú)力，特別是在運(yùn)動(dòng)以后，病情發(fā)展會(huì)影響到患者神經(jīng)以及肌肉接頭突觸后膜ACh R[2]。經(jīng)過(guò)臨床的相關(guān)研究表明，血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體是影響重癥肌無(wú)力疾病的重要因素，所以需要在臨床上進(jìn)行檢測(cè)，這樣也有利于重癥肌無(wú)力疾病的診斷[3]。該次研究就針對(duì)2017—2018年期間收治的40例重癥肌無(wú)力患者以及40名健康體檢患者的血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)及臨床意義進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究的研究對(duì)象全部是患有重癥肌無(wú)力患者以及健康體檢者。前者為觀察組，人數(shù)為40例，后者為對(duì)照組，人數(shù)為40名。所有患者都進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。其中重癥肌無(wú)力的納入標(biāo)準(zhǔn)為：①疾病患者具有肌肉無(wú)力的癥狀，并且在運(yùn)動(dòng)之后肌無(wú)力情況加重；②人體內(nèi)部的血清抗AChR抗體滴度升高。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①合并其他重要臟器疾病以及處于妊娠期的婦女；②不配合該次研究的患者。其中觀察組的男性為17例，女性名為23例，年齡范圍在 18～87 歲之間，中位年齡為（55.52±1.34）歲，對(duì)照組的男性名為16名，女性名為24名，年齡范圍在17～86歲之間，中位年齡為（55.42±1.32）歲，比較以上資料發(fā)現(xiàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），該次研究已經(jīng)經(jīng)過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者家屬知情同意。

1.2 方法

首先對(duì)所有參與該次研究的患者進(jìn)行標(biāo)本采集，護(hù)理人員要通知所有患者在規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行空腹靜脈血4 mL抽取，并且將所有采集標(biāo)本進(jìn)行離心處理，處理之后將血清放在4℃的環(huán)境內(nèi)保存，同時(shí)進(jìn)行血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗連接素抗體和抗Ryanodine受體抗體的檢測(cè)。首先進(jìn)行血清抗乙酰膽堿受體抗體檢測(cè)，采取的檢測(cè)方式為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，并且采用ELISA方法向已經(jīng)保存?zhèn)溆玫难逑♂?0倍之后進(jìn)行血清去除，將其放在37℃的水域中進(jìn)行甩板去除，持續(xù)時(shí)間為90 min。隨后再放入pH值為7.4的0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗，清洗次數(shù)為4次，保證將一些非特異性結(jié)合的物質(zhì)進(jìn)行清除。隨后再加入氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人Ig G 100 μL進(jìn)行水浴，水溫度保持在37℃，持續(xù)60 min，再放入pH值為7.4的0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗，清洗次數(shù)為4次，隨后再加入100 μL三甲氧基苯甲醛顯色物進(jìn)行顯色，時(shí)間為15 min[4]?？惯B接素抗體和抗Ryanodine受體抗體最后通過(guò)0.50 mmol/L硫酸溶液終止反應(yīng)，在采用波長(zhǎng)為450 nm進(jìn)行光密度值的測(cè)試。其次再進(jìn)行相關(guān)結(jié)果的判斷，對(duì)所有進(jìn)行檢驗(yàn)的患者進(jìn)行在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率的判斷，保證血清抗乙酰膽堿受體抗體的水平在0.469以上為陽(yáng)性[5]。另外在進(jìn)行抗Titin抗體檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中首先使用ELISA方法將所有患者的血液標(biāo)本進(jìn)行血清稀釋10倍，并且和血清抗乙酰膽堿受體抗體檢測(cè)方式一致。隨后進(jìn)行結(jié)果判斷，當(dāng)抗Titin抗體的水平在0.343以上為陽(yáng)性。最后進(jìn)行抗Ryanodine受體抗體的檢測(cè)，使用ELISA試劑進(jìn)行檢測(cè)，將血液標(biāo)本進(jìn)行血清稀釋10倍，并且對(duì)抗Ryanodine受體抗體進(jìn)行檢測(cè)，最后進(jìn)行結(jié)果判斷，當(dāng)抗Ryanodine受體抗體水平＞0.25的時(shí)候呈陽(yáng)性[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組患者的血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率情況，而且還要觀察觀察組中早發(fā)型和晚發(fā)型兩種類型患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗連接素抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

將有關(guān)數(shù)據(jù)全部輸入到SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，資料以（）表示，進(jìn)行 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)應(yīng)用（%）表示，行 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同抗體的陽(yáng)性率比較

觀察組在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率要高于對(duì)照組，見表1。

表1 兩組不同抗體的陽(yáng)性率比較[n(%)]Table 1 Comparison of the positive rates of different antibodies in the two groups[n(%)]

2.2 早發(fā)型和晚發(fā)型在不同抗體中的陽(yáng)性率比較

觀察組中早發(fā)型重癥肌無(wú)力患者為20例，晚發(fā)型重癥肌無(wú)力患者為20例，兩種類型疾病患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率有一定的差異，早發(fā)型疾病的陽(yáng)性率要低于晚發(fā)型，見表2。

表2 早發(fā)型和晚發(fā)型在不同抗體中的陽(yáng)性率比較[n(%)]Table 2 Comparison of positive rates of early and late hairstyles in different antibodies[n(%)]

3 討論

經(jīng)過(guò)大量的臨床研究表明，重癥肌無(wú)力疾病的主要發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，被人們所接受的發(fā)病機(jī)制主要是由于人體神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜的煙堿型乙酰膽堿受體出現(xiàn)下調(diào)情況所導(dǎo)致的重癥肌無(wú)力。血清抗乙酰膽堿受體抗體是重癥肌無(wú)力疾病最主要的抗體之一，該種抗體能夠和人體的神經(jīng)以及肌肉接頭處突觸后膜乙酰膽堿受體進(jìn)行特異性結(jié)合，進(jìn)一步加快了乙酰膽堿受體的內(nèi)化作用同時(shí)通過(guò)乙酰膽堿受體的不斷降解，能夠進(jìn)一步加強(qiáng)乙酰膽堿受體的破壞性，從而導(dǎo)致人體內(nèi)部的乙酰膽堿受體數(shù)量大大減少，對(duì)于人體內(nèi)部各種信號(hào)的傳遞產(chǎn)生了阻礙作用，這就是重癥肌無(wú)力的主要發(fā)病原因[7]。根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道表明，在患有胸腺瘤的重癥肌無(wú)力患者中出現(xiàn)血清乙酰膽堿受體抗體陽(yáng)性率為80%，那不具有胸腺瘤的重癥肌無(wú)力患者在血清乙酰膽堿受體抗體陽(yáng)性率方面僅有36.8%，具有全身性重癥肌無(wú)力的患者在血清乙酰膽堿受體抗體陽(yáng)性率方面有85%，具有眼肌型重癥肌無(wú)力患者的血清乙酰膽堿受體抗體為50%。另外該次研究所檢測(cè)的Titin主要是一種絲狀型的蛋白，一般都存在于脊椎動(dòng)物的骨骼肌中，經(jīng)過(guò)生理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)Titin對(duì)于進(jìn)一步控制肌肉結(jié)構(gòu)組成、穩(wěn)定肌肉纖維以及為積極提供彈性的作用具有較大的意義，所以如果人體內(nèi)Titin功能出現(xiàn)障礙，對(duì)于肌肉正常收縮情況也會(huì)產(chǎn)生巨大的影響?？筎itin抗體的主要生理學(xué)機(jī)制就是能夠通過(guò)進(jìn)一步加強(qiáng)肌肉纖維的激活速度，從而對(duì)骨骼肌正常結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞?？筊yanodine受體抗體主要存在于基質(zhì)網(wǎng)中維持鈣離子釋放的通道，對(duì)于人體的纖維膜基質(zhì)往往會(huì)產(chǎn)生一種連接的作用，另外通過(guò)該抗體還能夠進(jìn)一步對(duì)Ryanodine受體以及二氫吡啶受體進(jìn)行促進(jìn)和作用，經(jīng)過(guò)相關(guān)研究結(jié)果表明，Ryanodine受體以及二氫吡啶受體二者能夠在興奮收縮耦聯(lián)中相互作用，進(jìn)一步加強(qiáng)抗Ryanodine受體抗體自身的鈣離子以及通道的開放性和釋放程度。

在該次研究中，觀察組在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率分別為80.0%、70.0%、77.5%，對(duì)照組在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率分別為12.5%、7.5%、5.0%，觀察組的陽(yáng)性率要顯著高于對(duì)照組。根據(jù)不同類型的觀察組疾病可以分成早發(fā)型和晚發(fā)型兩種，比較早發(fā)型和晚發(fā)型兩種類型患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率，發(fā)現(xiàn)早發(fā)型重癥肌無(wú)力患者在血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體方面的陽(yáng)性率分別為40%、45%、50%，要低于晚發(fā)型重癥肌無(wú)力患者（60%、55%、60%）。在張晨紅等[8]的研究中，其研究結(jié)果為重癥肌無(wú)力患者血清抗AChR抗體、抗Titin抗體和抗RyR抗體陽(yáng)性率分別為68.13%(124/182)、64.29%(117/182)和 67.03%(122/182),高于 OND 組(均 P=0.000)和對(duì)照組(均P=0.000);3種血清學(xué)標(biāo)志物同時(shí)陽(yáng)性,診斷重癥肌無(wú)力的靈敏度為41.21%,特異度達(dá)99.40%。

綜上所述，對(duì)重癥肌無(wú)力患者進(jìn)行血清抗乙酰膽堿受體抗體、抗Titin抗體和抗Ryanodine受體抗體進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于疾病的輔助診斷有著重要的意義，能夠有效提高重癥肌無(wú)力疾病的診斷效果，也有利于患者進(jìn)行進(jìn)一步的臨床治療。