HPVE6/E7mRNA檢測(cè)在ASCUS中的應(yīng)用

薛蕓，許寶珍，周月華

南京市溧水區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，江蘇南京 211200

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，全球每年新發(fā)52.6萬人，死亡26.6萬人。東南亞地區(qū)發(fā)病率及病死率均高，根據(jù)最新發(fā)布的中國(guó)癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示2015年中國(guó)子宮頸癌新發(fā)病例9.89萬，死亡病例3.05萬[1]。2016年ACOG指南顯示美國(guó)歷經(jīng)25年篩查使宮頸癌發(fā)病率從14.8/10萬降至6.7/10萬。早期篩查早期診斷早期治療是預(yù)防子宮頸癌的關(guān)鍵。研究表明，持續(xù)的高危型HPV感染是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變的必要因素[2]，對(duì)于TCT檢測(cè)結(jié)果為ASCUS的人群，需要HPV檢測(cè)進(jìn)行有效分流，該次研究選擇2018年6月—2019年5月在南京市溧水區(qū)人民醫(yī)院就診的165例TCT為ASCUS患者，同時(shí)進(jìn)行Aptima HPVE6/E7mRNA與HC2檢測(cè)，以陰道鏡下活檢病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，探討HPV E6/E7mRNA檢測(cè)在ASCUS分流中的應(yīng)用，指導(dǎo)陰道鏡轉(zhuǎn)診，最大程度節(jié)省資源但又能早期診斷疾病，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取165例TCT為ASCUS患者，年齡為30～71歲，平均（45.56±9.69）歲，排除宮頸手術(shù)史，同時(shí)進(jìn)行 Aptima HPV E6/E7mRNA與HC2檢測(cè)，并于陰道鏡下進(jìn)行宮頸活檢。按病檢結(jié)果進(jìn)行分組，慢性炎癥有87例，CIN1有35例，CIN2有24例，CIN3有18例，子宮頸癌有1例。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 TCT檢測(cè) 使用TCT專用刷在宮頸移行帶區(qū)旋轉(zhuǎn)3～5周，刷取的脫落細(xì)胞置于專門的保存液中貯存送至病理科，采用TBS診斷系統(tǒng)進(jìn)行閱片及診斷。

1.2.2 HC2檢測(cè) 使用HC2專用細(xì)胞刷在宮頸管內(nèi)旋轉(zhuǎn)3～5周，將刷子置于專門保存液中，按照試劑盒說明進(jìn)行，能檢測(cè)13種高危型亞型HPV。結(jié)果判讀：≥1.0為陽性

1.2.3 HPVE6/E7mRNA檢測(cè)采用豪洛捷公司的全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)，簡(jiǎn)稱Aptima HPV，可以檢測(cè)14種高危HPV亞型（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68），將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至樣本轉(zhuǎn)移試劑，可裂解細(xì)胞，分離和純化核酸，通過轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增法（TMA）進(jìn)行目標(biāo)擴(kuò)增，使用發(fā)光核酸探針檢測(cè)擴(kuò)增核酸，DNA雜合體發(fā)射出的光可用光度計(jì)來測(cè)定，檢測(cè)其光子信號(hào)，（相對(duì)光單位RLU），最終檢測(cè)結(jié)果根據(jù)該分析物信號(hào)與閾值之比（S/CO）進(jìn)行判讀，≥0.5為陽性。

1.2.4 陰道鏡檢查及活檢 所有ASCUS患者均行陰道鏡檢查，醋酸染色1 min，然后進(jìn)行碘染色，在不著色區(qū)進(jìn)行多點(diǎn)活檢，未見明顯異常者采用3,6,9,12點(diǎn)進(jìn)行活檢，轉(zhuǎn)化區(qū)暴露不清者加做宮頸管搔刮。所有病理切片均由高年資病理科醫(yī)師閱片，根據(jù)病理結(jié)果分為慢性炎癥、CIN1、CIN2、CIN3及子宮頸癌。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料采用單個(gè)樣本t檢驗(yàn)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或連續(xù)校正、Fisher精確概率法，以頻數(shù)和百分比（%）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 165例ASCUS患者活檢病理結(jié)果情況

診斷為慢性炎癥有87例、CIN1有35例、CIN2有24例、CIN3有18例，子宮頸癌有1例，其中CIN2+占25.45%（42/165），CIN1 及以下者占 73.94%（122/165）。 見表 1。

2.2 兩種檢測(cè)方法檢測(cè)HPV感染情況

HPV E6/E7mRNA檢測(cè)HPV感染陽性率為60.00%（99/165），用HC2檢測(cè)HPV感染陽性率為72.73%（120/165）， 高于 HPV E6/E7mRNA 組 （χ2=38.990，P＜0.05）。CIN2+中 HPV E6/E7mRNA檢測(cè)陽性率為 95.24%（40/42），CIN1及以下感染率為 47.54%（58/122）， 低于 CIN2+組（χ2=30.278，P＜0.05）。 HC2 檢測(cè)組 CIN2+HPV 陽性率為88.10%（37/42），CIN1及以下組 HPV陽性率為 67.21%（82/122），低于 CIN2+組（χ2=7.176，P＜0.05）。 見表 1。

表1165 例ASCUS患者HPV E6/E7mRNA和HC2檢測(cè)結(jié)果情況[n（%）]Table 1 Results of HPV E6/E7 mRNA and HC2 detection in 165 ASCUS patients[Case(%)]

2.3 兩種方法對(duì)ASCUS人群中診斷CIN2+效能評(píng)價(jià)

HPV E6/E7mRNA診斷CIN2+的靈敏度為95.34%，HC2診斷CIN2+的靈敏度為88.37%，使用Fisher精確概率法計(jì)算（P=0.221）。HC2診斷CIN2+的特異度為32.79%，HPV E6/E7mRN診斷CIN2+的特異度為52.46%，比HC2高 （χ2=27.274，P＜0.05）。 Youden 指數(shù)和一致率 HPV E6/E7mRNA均高于HC2。見表2。

表2 兩種檢測(cè)方法診斷CIN2及以上的效能評(píng)價(jià)Table 2 Evaluation of the effectiveness of two detection methods in the diagnosis of CIN2 and above

3 討論

該次研究發(fā)現(xiàn)165例ASCUS患者中CIN2+占25.45%。大多數(shù)診斷是CIN1或正常。Zhu Y等[3]研究發(fā)現(xiàn)ASCUS中18%患者診斷為CIN2+，僅8.3%診斷為CIN3+。因此可以看出，ASCUS中僅一小部分為真正的患有宮頸癌前病變?nèi)巳?，這是由于細(xì)胞學(xué)檢測(cè)主觀性大，ASCUS可重復(fù)性低，HPV檢測(cè)作為ASCUS細(xì)胞學(xué)分流的手段，就是為了將那些不確定的細(xì)胞學(xué)結(jié)果用HPV檢測(cè)可以降低無CIN的陰道鏡轉(zhuǎn)診率。HC2是經(jīng)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)認(rèn)證的應(yīng)用于高危型HPV DNA的檢測(cè)。該次研究發(fā)現(xiàn)使用HPV E6/E7mRNA檢測(cè)HPV陽性率低于HC2，與HPV一過性感染有關(guān)，病毒基因并未與宿主整合，故而未被Aptima HPV檢測(cè)出來。已有研究表明，大多數(shù)HPV會(huì)通過自身免疫力清除，只有持續(xù)的HPV感染才能發(fā)生宮頸的病變[4]。E6、E7基因作為HPV病毒的致癌基因，它們的轉(zhuǎn)錄mRNA所表達(dá)的蛋白是導(dǎo)致宮頸癌的關(guān)鍵因素，E6、E7癌蛋白通過抑制兩種抑癌蛋白 （p53及pRb）使被感染的宿主細(xì)胞無限增殖并惡變。有研究顯示，CIN及子宮頸癌患者中HPV E6/E7mRNA檢出率高于宮頸炎人群[5]。唐振利等[6]發(fā)現(xiàn)HPVE6/E7 mRNA陽性率隨著宮頸病變病理學(xué)級(jí)別升高呈增加趨勢(shì)，TCT聯(lián)合HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)能提高對(duì)宮頸病變篩查的敏感性和特異性。張?jiān)螺x等人[7]研究亦發(fā)現(xiàn)高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變患者中HPVE6/E7mRNA檢測(cè)率高于低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及以下者。該次研究同樣發(fā)現(xiàn)CIN2+患者中HPV E6/E7mRNA檢測(cè)陽性率明顯高于CIN1及宮頸慢性炎癥者。由此可見，通過HPVE6/E7mRNA檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)人群，進(jìn)而提前診斷及治療，預(yù)防子宮頸癌發(fā)生。

Castle PE等[8]研究 988例 ASCUS婦女發(fā)現(xiàn) Aptima HPV診斷CIN2+的靈敏度為89.4%，特異度為63.1%，診斷CIN3+的靈敏度為95.2%，特異度為60.5%。潘瓊慧等[9]研究同樣發(fā)現(xiàn)HPV E6/E7mRNA的特異性顯著高于HPV DNA。梁馨元等[10]一項(xiàng)Meta分析顯示與HC2檢測(cè)相比，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)CIN3+表現(xiàn)出較高的特異度。潘學(xué)景等[11]在ASCUS分流管理的隨訪研究顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)ASCUS中高度上皮內(nèi)瘤變及子宮頸癌的敏感性與HPV DNA檢測(cè)無差異,而特異性高于HPV DNA檢測(cè)。該次研究結(jié)果Aptima HPV診斷CIN2+的靈敏度為95.34%，特異度為52.46%，結(jié)果與其研究相近。另外利用HC2診斷CIN2+的靈敏度為88.37%，特異度為32.79%。與Aptima HPV相比，具有相似的靈敏度，但Aptima HPV特異度更高，Youden指數(shù)和一致率Aptima HPV E6/E7mRNA均高于HC2，提示Aptima HPV在診斷子宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變中準(zhǔn)確度更高，可用于ASCUS的分流，減少過多不必要的陰道鏡。

綜上所述，由于HPV E6/E7mRNA具有與HC2相似的靈敏度，且具有更高的特異度，對(duì)于TCT為ASCUS患者，應(yīng)用HPV E6/E7mRNA進(jìn)行分流，若陽性則轉(zhuǎn)診陰道鏡活檢，若為陰性，則一年后復(fù)測(cè)TCT及HPV E6/E7mRNA。HPV E6/E7mRNA可有效幫助ASCUS分流，對(duì)篩查子宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變具有較高的診斷價(jià)值，同時(shí)可以減少過度的不必要的陰道鏡，對(duì)于廣大基層?jì)D女來說，同時(shí)減輕了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及精神壓力。