免疫組化法與熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺癌組織HER2表達(dá)對比分析

方卓寧 呂祥瑞

河南省焦作市人民醫(yī)院 454150

乳腺癌是一種發(fā)生在乳腺上皮組織的女性惡性腫瘤，異質(zhì)性較強(qiáng)，具有臨床多樣性，且不同乳腺癌組織基因表達(dá)也不同，增加臨床治療的困難程度，嚴(yán)重威脅女性生命健康安全[1]。目前尚未明確乳腺癌的發(fā)病機(jī)制，多認(rèn)為其發(fā)展是多因素、多步驟、多階段共同作用的結(jié)果，故明確乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中重要的生物學(xué)指標(biāo)，對改善患者預(yù)后尤為重要。人類表皮生長因子受體2(Human epidermal growth factor receptor 2，HER2)是一種原癌基因，在細(xì)胞生長因子的信號傳導(dǎo)過程中有重要作用，若乳腺癌患者的腫瘤細(xì)胞中HER2呈高表達(dá)狀態(tài)，則將使癌細(xì)胞生長轉(zhuǎn)移[2]。目前，熒光原位雜交技術(shù)及免疫組化法是檢測乳腺癌組織HER2表達(dá)的常用方法，但兩種方法存在不一致性[3]。鑒于此，本文對我院140例乳腺癌患者檢測結(jié)果展開分析，進(jìn)一步對比免疫組化法與熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺癌組織HER2表達(dá)的效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 通過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核，選擇本院2013年2月—2015年12月140例乳腺癌患者，年齡37～64歲，平均年齡(49.84±9.59)歲；體重指數(shù)(BMI)18～32，平均BMI 23.59±3.29；TNM分期：Ⅱ期87例，Ⅲ期53例；分化程度：低分化30例，中分化38例，高分化72例；合并癥：高脂血癥18例，糖尿病11例，高血壓7例。所有患者及家屬均已知并簽署知情同意書。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前或術(shù)中病理檢查確診為乳腺癌；(2)年齡≤65歲；(3)TNM分期為Ⅱ～Ⅲ期。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并腦梗死、心肌梗死等重大心血管疾??；(2)術(shù)前曾接受化療或分子生物治療；(3)合并其他惡性腫瘤；(4)肝、腎等臟器功能不全；(5)治療期間轉(zhuǎn)院、放棄治療。

1.3 方法 所有患者術(shù)前均完善各項檢查，并擇期進(jìn)行乳腺癌根治術(shù)，術(shù)中取腫瘤組織病理標(biāo)本，分別進(jìn)行免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測病灶組織中HER2表達(dá)情況。(1)免疫組化法檢測：使用10%中性福爾馬林固定乳腺癌組織標(biāo)本，并使用石蠟包埋切片，采用SP免疫組化法對乳腺癌組織中HER2蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測。其中≤10%腫瘤細(xì)胞膜染色為HER2(-)；染色程度較輕，但>10%腫瘤細(xì)胞膜染色為HER2(+)；染色程度較重，且10%～30%腫瘤細(xì)胞完整包膜染色為HER2(++)；>30%腫瘤細(xì)胞完整包膜強(qiáng)染色為HER2(+++)，且認(rèn)為HER2陽性包括HER2(++)及HER2(+++)，HER2陰性包括HER2(-)及HER2(+)。(2)熒光原位雜交技術(shù)：在65℃下烘烤乳腺癌組織的石蠟切片4h后脫蠟，使用90℃蒸餾水處理30min后，采用蛋白酶K消化10min，之后使用10%福爾馬林固定10min后脫水晾干，封片并放入原位雜交儀中，加入DAPI 10μl，15min后使用熒光顯微鏡對玻片進(jìn)行觀察。其中HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞≥6.0或細(xì)胞核內(nèi)橘紅色的HER2基因熒光信號/17號染色體綠色熒光信號值≥2.0則為HER2陽性；HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞<6.0且該比值<2.0為HER2陰性。重新檢測結(jié)果不確定的患者，再分類。所有患者術(shù)后均隨訪3年。

1.4 評價指標(biāo) (1)HER2檢測結(jié)果：統(tǒng)計免疫組化法檢測HER2表達(dá)情況[HER2(-)、HER2(+)、HER2(++)及HER2(+++)]，以及熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2表達(dá)情況(陽性、陰性)；(2)檢測結(jié)果一致性：統(tǒng)計免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2表達(dá)陽性、陰性情況，并計算其一致性；(3)術(shù)后復(fù)發(fā)情況：統(tǒng)計術(shù)后3年疾病復(fù)發(fā)情況，并比較HER2表達(dá)陽性和陰性患者的術(shù)后復(fù)發(fā)情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理所得數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kappa分析免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2結(jié)果的一致性；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER2檢測結(jié)果 免疫組化法檢測結(jié)果為HER2(-)的患者熒光原位雜交技術(shù)檢測均為陰性，其符合率為100.00%；免疫組化法檢測結(jié)果為HER2(+)患者中熒光原位雜交技術(shù)檢測為陰性29例，符合率為96.67%；免疫組化法檢測結(jié)果為HER2(++)患者中熒光原位雜交技術(shù)檢測為陽性21例，符合率為87.50%；免疫組化法檢測結(jié)果為HER2(+++)患者中熒光原位雜交技術(shù)檢測為陽性23例，符合率為95.83%,見表1。

2.2 檢測結(jié)果一致性 免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺癌患者HER2結(jié)果的一致性較好(Kappa=0.920，P=0.000),見表2。

2.3 術(shù)后復(fù)發(fā)情況 經(jīng)3年隨訪，140例乳腺癌患者中復(fù)發(fā)35例。其中熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2表達(dá)為陽性患者中術(shù)后復(fù)發(fā)23例(51.11%)，明顯高于其檢測為陰性患者的12例(12.63%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=36.631，P=0.000)；免疫組化法檢測HER2表達(dá)陽性患者術(shù)后復(fù)發(fā)24例(50.00%)，明顯高于其檢測為陰性的患者的11例(11.96%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=24.348，P=0.000)。

表1 免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2的結(jié)果(n)

表2 免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測HER2結(jié)果的一致性分析(n)

3 討論

乳腺癌是一種好發(fā)于中年及更年期婦女的婦科腫瘤性疾病，其發(fā)生率約占女性惡性腫瘤的25%，具有較高的死亡率，特別是HER2陽性乳腺癌患者。HER2是一種原癌基因，在乳腺癌診斷中具有重要的作用，其陽性表達(dá)則表示病灶具有轉(zhuǎn)移的可能性。而有關(guān)研究指出，根據(jù)HER2表達(dá)情況制定針對性的治療方案，可在一定程度上降低術(shù)后疾病復(fù)發(fā)率，延長患者生存周期，改善生活質(zhì)量[4]。因此，選擇一種更為有效的檢測方法明確病灶組織中HER2表達(dá)情況尤為重要。

免疫組化法是一種常用HER2表達(dá)檢測方法，以組織為基礎(chǔ)的蛋白檢測方法，通過特殊染色后可對腫瘤細(xì)胞表面是否有HER2受體進(jìn)行判斷，具有操作簡單、價格低廉等特點(diǎn)。但其檢測過程中標(biāo)本的固定及處理中可能會產(chǎn)生蛋白質(zhì)變性、17號染色體非整倍體情況及在抗原修復(fù)、抗體批號差異、結(jié)果主觀判斷等實驗關(guān)鍵步驟不標(biāo)準(zhǔn)化情況，對結(jié)果的可靠性造成影響[5-6]。熒光原位雜交技術(shù)是以熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為探針，檢查17號染色體著絲粒和HER-2/neu基因擴(kuò)增情況的乳腺癌診斷新技術(shù)，可使腫瘤細(xì)胞表面的HER2基因受體發(fā)出熒光，在熒光顯微鏡下對細(xì)胞或組織原位觀察分析，進(jìn)而獲取細(xì)胞內(nèi)染色體或基因變化的原位，可對基因擴(kuò)增、鑒別染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常情況進(jìn)行判斷，且具有較高的敏感性、特異性[7-8]。本文中，熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺癌組織HER2表達(dá)的結(jié)果與免疫組化法檢測結(jié)果具有較高的符合率，表明免疫組化法和熒光原位雜交技術(shù)檢測乳腺癌組織HER2具有較高的一致性，可顯示乳腺癌組織HER2表達(dá)情況。組織中DNA的穩(wěn)定性較高，故熒光原位雜交技術(shù)檢測可提供客觀、明確的陰性或陽性結(jié)果，但其易受蛋白消化不當(dāng)、烤片溫度過高等因素影響，導(dǎo)致熒光信號減弱或無信號等[9]。同時該檢測方法對實驗要求較高、實驗器材較為昂貴，無法廣泛推廣使用。而免疫組化法對材料要求不高，且方法簡便、可重復(fù)性好等，可用于對乳腺癌篩查，而對于無法確定的病灶組織則可采用熒光原位雜交技術(shù)檢測[10]。

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，原癌基因、抑癌基因的失活、缺失、突變等有著重要的作用。隨著研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)，分子標(biāo)志物的檢測在乳腺癌的診斷、治療和預(yù)后的評估中提供了新的措施，有助于更好的預(yù)測乳腺癌患者術(shù)后生存情況[11]。本文結(jié)果顯示，熒光原位雜交技術(shù)和免疫組化法檢測HER2表達(dá)陽性患者術(shù)后復(fù)發(fā)率明顯高于各自檢測陰性患者，表明HER2表達(dá)情況可對乳腺癌患者術(shù)后疾病復(fù)發(fā)情況進(jìn)行預(yù)測。分析其原因為HER2是具有酪氨酸蛋白激酶活性的表皮生長因子受體家族成員，在細(xì)胞增殖、分化及維持正常細(xì)胞調(diào)節(jié)中有著重要作用，是乳腺癌分子靶向治療的基因靶位點(diǎn)，而激活HER2受體后將產(chǎn)生過度表達(dá)，使惡性腫瘤轉(zhuǎn)化活性得到充分發(fā)揮，進(jìn)而造成惡性腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，縮短患者無病生存期和總生存期[12]。

綜上所述，在乳腺癌組織HER2表達(dá)檢測中熒光原位雜交技術(shù)和免疫組化法檢測有高度一致性，可對乳腺癌患者術(shù)后疾病復(fù)發(fā)進(jìn)行反映。