綿陽地區(qū)淡水魚過敏的慢性蕁麻疹與HLA-DQA1 基因相關(guān)性

唐幫麗，黃忠奎，易清玲，丁鈺

（綿陽市中心醫(yī)院 皮膚科，四川 綿陽）

0 引言

慢性蕁麻疹（Chronic Urticaria, CU）是皮膚科的常見病，人群發(fā)病率為0.1%～3.0%[1]。通常病程＞6 周，每周發(fā)病大于兩次定義為慢性蕁麻疹。蕁麻疹的病因多樣，免疫相關(guān)[2]、感染、藥物等，然而，很多患者的發(fā)病機制仍然不清楚[3-5]。新近研究發(fā)現(xiàn)CU 與HLA-DRB1、HLA-DQB1、HLA-DQA1 等位基因相關(guān)[6]。HLA 在免疫反應(yīng)起了很重要的作用，包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、胰島素依耐性糖尿病[7]、特應(yīng)性疾病和食物敏感。經(jīng)前期研究，綿陽地區(qū)人員對淡水魚組合過敏原發(fā)病率較高，為16.9%，可能與本地區(qū)人員飲食習(xí)慣有關(guān)[8]。我們這次研究是想探索HLA-DQA1 作為免疫遺傳基因而參與淡水魚過敏的慢性蕁麻疹的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013 年7 月至2015 年7 月病人在本院皮膚科門診級住院部確診的CU 患者，診斷標準參照2009 年版《蕁麻疹診療指南》。其中淡水魚過敏組60 例；非淡水魚過敏組80 例。正常對照組90 例，為同期在本院體檢的健康成年人。兩組研究對象在年齡及性別無差異（P＞0.05）。

1.2 試劑盒

血液基因組DNA 提取試劑盒來自（美國BDPharmingen公司），HLA-DQA1 等位基因序列特異性引物及內(nèi)對照引物美國BD（Pharmingen）公司。

1.2.1 模板DNA 的制備

按血液基因組DNA 提取試：劑盒操作步驟提取基因組DNA，置-80℃保存?zhèn)溆?。HLA-DQA1 基因型分析依據(jù)基因HLA-DQA1 基因第二顯子核苷酸序列設(shè)10 對特異性引物。其所擴增的產(chǎn)物具有相應(yīng)等位基因特異性。

1.2.2 基因型的確定

PCR 產(chǎn)物經(jīng)2%的瓊脂糖凝膠（含0.5 μg/mL 溴化乙啶）電泳，將凝膠置于紫外凝膠成像儀判斷基因型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 13.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理。采用直接計數(shù)法計算等位基因頻率，HLA-DQA1 等位基因頻率=陽性基因數(shù)/樣本數(shù)×2，等位基因頻率的比較采用χ2檢驗。P 值均按Bonferroni 法校正得校正P 值（Pc），Pc=P*所檢出的等位基因數(shù)，顯著性檢驗水準為0.05。

2 結(jié)果

HLA-DQAI 等位基因在淡水魚過敏CU 組與非淡水魚過敏CU 組與對照組間的基因頻率比較，見表1。

表1 淡水魚過敏CU 患者組與非淡水魚過敏CU 患者組及對照組間HLA-DQAl 等位基因頻率的比較（n, %）

在設(shè)計的10 對HLA-DQA1 等位基因序列特異性引物中，淡水魚過敏CU 組和合非淡水魚過敏UC 組分別檢測出10 對和9 對等位基因，基因頻率范圍分別為1.67%～20.00%和7.5%～13.75%。其中HLA-DQA1*0201，*0202，*0601 等位基因頻率在兩組UC 患者組與對照組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Pc＜0.001；Pc＜0.05；Pc＜0.05。淡水魚過敏CU 組與非淡水魚過敏CU 組之間的HLA-DQA1*0202 等位基因頻率有統(tǒng)計學(xué)意義（Pc＜0.05）。

3 討論

慢性蕁麻疹（Chronic Urticaria, CU）是皮膚科的常見病。目前普遍認為CU 的發(fā)生除了可能有自身免疫基礎(chǔ)，也有一定的遺傳背景，該病在患者直系親屬中的發(fā)生率明顯增加[9]。HLA 是具有高度多態(tài)性的同種異體抗原。新近研究發(fā)現(xiàn)CU與HLA-DRB1、HLA-DQB1、HLA-DQA1 等位基因相關(guān)。

通過本次研究，發(fā)現(xiàn)在兩組UC 患者中的HLADQA1*0201，*0202，*0601 基因頻率高于正常對照組，表明HLA-DQA1*0201，*0202，*0601 等位基因是UC 的易感基因，而淡水魚過敏組HLA-DQA1*0202 等位基因頻率較非淡水魚過敏組明顯增高，HLA-DQA1*0202 等位基因可能是淡水魚過敏CU 患者的易感基因。