深圳地區(qū)HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者兩種歸隊(duì)模式風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究*

——楊轉(zhuǎn)笑 肖慧芬 肖 忠 鄔旭群* 方 瑛 黃華霖

表1兩種歸隊(duì)模式下血液歸隊(duì)前檢測(cè)結(jié)果及成功歸隊(duì)情況

項(xiàng)目無(wú)門檻自愿模式獻(xiàn)血10次以上模式歸隊(duì)調(diào)查人數(shù)(人)1926歸隊(duì)前第一次酶免檢測(cè)有反應(yīng)性[n(%)]3(15.79)0(0.00)歸隊(duì)前第一次核酸檢測(cè)有反應(yīng)性[n(%)]4(21.05)2(7.69)歸隊(duì)前首次合格第二次酶免檢測(cè)有反應(yīng)性[n(%)]0(0.00)0(0.00)歸隊(duì)前首次合格第二次核酸檢測(cè)有反應(yīng)性[n(%)]2(10.53)1(3.85)成功歸隊(duì)[n(%)]10(52.63)23(88.46)P <0.05

表2兩種歸隊(duì)模式下獻(xiàn)血者成功歸隊(duì)后再次出現(xiàn)血液檢測(cè)不合格及獻(xiàn)血情況

項(xiàng)目無(wú)門檻自愿模式獻(xiàn)血10次以上模式成功歸隊(duì)人數(shù)(人)1023歸隊(duì)后酶免檢測(cè)有反應(yīng)性[n(%)]0(0.00)0(0.00)歸隊(duì)后核酸檢測(cè)有反應(yīng)性[n(%)]2(20.00)3(13.04)歸隊(duì)后再次不合格人數(shù)[n(%)]2(20.00)3(13.04)歸隊(duì)后一年內(nèi)人均獻(xiàn)血次數(shù)(含機(jī)采)(次)2.204.78P >0.05

血清學(xué)酶聯(lián)免疫檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)應(yīng)用于無(wú)償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)，有助于提高血液安全。但核酸檢測(cè)靈敏度高且特異性較酶免檢測(cè)低，故核酸檢測(cè)假反應(yīng)性檢測(cè)結(jié)果在所難免。目前，國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)基于血液安全，逐漸完善了獻(xiàn)血者歸隊(duì)工作。《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019 版)》要求對(duì)血清學(xué)檢測(cè)和核酸檢測(cè)同時(shí)呈反應(yīng)性的獻(xiàn)血者永久屏蔽。那么，酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV(乙型肝炎病毒)核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者能否歸隊(duì)？歸隊(duì)風(fēng)險(xiǎn)如何？本研究通過(guò)對(duì)某地區(qū)2015年-2018年無(wú)償獻(xiàn)血酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤檢測(cè)，評(píng)估了獻(xiàn)血者歸隊(duì)風(fēng)險(xiǎn)，探討了安全、嚴(yán)密的歸隊(duì)策略。

1 資料與方法

1.1擬跟蹤獻(xiàn)血者選擇和標(biāo)本采集處理

選擇2015年1月-2018年10月自愿無(wú)償獻(xiàn)血后酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者。深圳市龍崗區(qū)中心血站采用無(wú)門檻自愿原則進(jìn)行采樣，另一家血站應(yīng)用獻(xiàn)血次數(shù)≥10次的條件進(jìn)行采樣。每次采樣間隔3個(gè)月以上，直接靜脈采樣，兩次采樣所有檢測(cè)結(jié)論均合格，經(jīng)評(píng)價(jià)和審批后予以歸隊(duì)。歸隊(duì)后繼續(xù)進(jìn)行兩次以上獻(xiàn)血采樣。所有采樣分別采集EDTA-K2 抗凝、無(wú)分離膠的血清學(xué)檢測(cè)標(biāo)本5ml和有分離膠的核酸管標(biāo)本8ml。核酸標(biāo)本于采血后 4h內(nèi)離心(2 200g×15min)。所有標(biāo)本采集后48h內(nèi)完成各項(xiàng)檢測(cè)。

1.2試劑與儀器

深圳市龍崗區(qū)中心血站使用HBsAg 酶免試劑為北京萬(wàn)泰、英國(guó)索林；核酸檢測(cè)試劑為羅氏 cobas TaqScreenMPX test(美國(guó))；酶免檢測(cè)儀器為Xantus全自動(dòng)加樣儀(瑞士)，STAR全自動(dòng)加樣儀(瑞士)，STAR全自動(dòng)核酸加樣儀(美國(guó))，F(xiàn)AME全自動(dòng)酶免檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó))；核酸檢測(cè)儀器為羅氏cobas s201核酸檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó))，HamiltonSTAR 混樣設(shè)備(瑞士)。另一家血站使用HBsAg 酶免試劑為北京萬(wàn)泰、意大利索林；核酸檢測(cè)試劑為蓋立復(fù)Procleix Ultrio Plus Assay、Procleix Ultrio Elite Assay(西班牙)、羅氏 cobas TaqScreenMPX test(瑞士)；酶免檢測(cè)儀器為愛(ài)康XANTUS 44/OH-200 全自動(dòng)樣本分配系統(tǒng)、FAME全自動(dòng)酶免檢測(cè)系統(tǒng)(瑞士)；核酸檢測(cè)儀器為Procleix Tigri系統(tǒng)(美國(guó))及Procleix Panther系統(tǒng)(西班牙)，羅氏cobas s201核酸檢測(cè)系統(tǒng)(美國(guó))，HamiltonSTAR混樣設(shè)備(瑞士)。

1.3跟蹤檢測(cè)和HBV檢測(cè)不合格判定

跟蹤檢測(cè)時(shí)間間隔≥3 個(gè)月，在本次檢測(cè)合格的條件下進(jìn)行下一次跟蹤檢測(cè)，對(duì)合格結(jié)果最少進(jìn)行4 次跟蹤檢測(cè)。跟蹤檢測(cè)項(xiàng)目包括進(jìn)行進(jìn)口與國(guó)產(chǎn)兩種ELISA試劑和羅氏核酸混檢或單檢兩種模式檢測(cè)。跟蹤檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)以下變化之一均判定為檢測(cè)不合格(排除免疫接種)：(1)檢出 HBV DNA；(2)HBsAg 單試劑陽(yáng)性；(3)HBsAg 雙試劑陽(yáng)性。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和處理

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各組之間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1無(wú)門檻自愿歸隊(duì)模式和獻(xiàn)血10次以上歸隊(duì)模式獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果及成功歸隊(duì)情況比較(表1)

2.2無(wú)門檻自愿歸隊(duì)模式和獻(xiàn)血10次以上歸隊(duì)模式獻(xiàn)血者成功歸隊(duì)后再次出現(xiàn)血液檢測(cè)不合格情況及歸隊(duì)后年人均獻(xiàn)血頻次比較(表2)

3 討論

無(wú)償獻(xiàn)血者血液常規(guī)酶免篩查后應(yīng)用核酸檢測(cè)可以有效降低酶免法漏檢造成的輸血風(fēng)險(xiǎn)，保障血液安全[1-2]。HBV核酸檢測(cè)存在相當(dāng)比例的假陽(yáng)性[3]，導(dǎo)致更多的獻(xiàn)血者被屏蔽，特別是在固定機(jī)采血小板獻(xiàn)血者隊(duì)伍中，既加劇了采供血與需求的矛盾，又造成了獻(xiàn)血者的身心和名譽(yù)傷害，還可能引起糾紛。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定核酸單檢初次反應(yīng)性及混檢(≤8 份)初次與分拆后檢測(cè)均為反應(yīng)性的血液要采取報(bào)廢處理，而該獻(xiàn)血者在重復(fù)檢測(cè)確定假陽(yáng)性后可經(jīng)評(píng)估進(jìn)入獻(xiàn)血者再次準(zhǔn)入程序[4]。國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)在探討安全、合理的獻(xiàn)血者歸隊(duì)模式方面也進(jìn)行了探討[5]。自《血站技術(shù)操作規(guī)程(2019 版)》頒布以來(lái)，血清學(xué)檢測(cè)和核酸檢測(cè)同時(shí)呈反應(yīng)性的獻(xiàn)血者需永久屏蔽已無(wú)爭(zhēng)議，但酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性單HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者歸隊(duì)工作缺少明確指引。部分血站對(duì)酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性單HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽獻(xiàn)血者的歸隊(duì)策略是參考《中國(guó)輸血協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)》?！吨袊?guó)輸血協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)》中血液篩查后可申請(qǐng)進(jìn)入歸隊(duì)的條件并不包含酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者，此項(xiàng)對(duì)策更多的是出于血液安全的考慮[6]。從無(wú)償獻(xiàn)血推廣和發(fā)展的層面，血站作為一個(gè)非營(yíng)利性社會(huì)機(jī)構(gòu)，應(yīng)該從獻(xiàn)血者的角度去看待核酸檢測(cè)結(jié)果假反應(yīng)性高的問(wèn)題。如將所有單純HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者列為永久淘汰，對(duì)于獻(xiàn)血者的質(zhì)疑，血站無(wú)法給出有說(shuō)服力的檢測(cè)結(jié)論，容易造成血站信任危機(jī)。因此，有必要探討高敏感度NAT試劑應(yīng)用造成篩查假陽(yáng)性的獻(xiàn)血者的歸隊(duì)策略。

本研究中，無(wú)門檻自愿歸隊(duì)模式歸隊(duì)檢測(cè)19例中出現(xiàn)3例HBsAg轉(zhuǎn)陽(yáng)，3 例均為首次獻(xiàn)血者，接近國(guó)內(nèi)報(bào)道HBV窗口期感染獻(xiàn)血者首次獻(xiàn)血占80%的比例[3]；而獻(xiàn)血10次以上歸隊(duì)模式26例中未出現(xiàn)HBsAg轉(zhuǎn)陽(yáng)，23例成功歸隊(duì)，歸隊(duì)成功率88.46%，明顯高于無(wú)門檻模式的52.63%(P<0.05)。因此，增加獻(xiàn)血次數(shù)門檻可提高歸隊(duì)成功率，減少窗口期風(fēng)險(xiǎn)。建議對(duì)因酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者歸隊(duì)增加歸隊(duì)次數(shù)門檻，將首次獻(xiàn)血而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性的獻(xiàn)血者排除在歸隊(duì)目標(biāo)人群之外。

獻(xiàn)血10次以上歸隊(duì)模式的獻(xiàn)血者成功歸隊(duì)后年人均獻(xiàn)血4.78次且參與捐獻(xiàn)機(jī)采血小板者較多，表明該模式的獻(xiàn)血者歸隊(duì)是以獻(xiàn)血為主要目的的。因此，建議將酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽但多次獻(xiàn)血或固定獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者列入歸隊(duì)目標(biāo)人群。完善單項(xiàng)NAT 陽(yáng)性獻(xiàn)血者屏蔽與歸隊(duì)檢測(cè)策略，穩(wěn)定獻(xiàn)血者隊(duì)伍，減少獻(xiàn)血者流失，是采供血機(jī)構(gòu)現(xiàn)階段的重點(diǎn)工作[7-8]。同時(shí)，成功歸隊(duì)的獻(xiàn)血者歸隊(duì)后的追蹤檢測(cè)中，無(wú)門檻歸隊(duì)模式出現(xiàn)兩例再次檢測(cè)不合格，與增加獻(xiàn)血次數(shù)門檻歸隊(duì)模式成功歸隊(duì)后再次出現(xiàn)不合格情況無(wú)明顯差異(P>0.05)，提示僅以 HBsAg + HBV DNA 作為酶免檢測(cè)無(wú)反應(yīng)性而HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性被屏蔽的獻(xiàn)血者歸隊(duì)血液檢測(cè)仍然存在一定的輸血感染風(fēng)險(xiǎn)。兩種模式歸隊(duì)后面臨的主要風(fēng)險(xiǎn)均主要為OBI(隱匿性乙型肝炎病毒感染)[3]。OBI獻(xiàn)血者因標(biāo)本中病毒含量極低而難以捕獲，我國(guó)是HBV感染高發(fā)區(qū)，更需要加強(qiáng)對(duì)OBI的檢測(cè)。有文獻(xiàn)報(bào)道稱，HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)復(fù)檢ELISA、NAT均無(wú)反應(yīng)，補(bǔ)充化學(xué)發(fā)光法試驗(yàn)89.5%為抗-HBc 和/或抗-HBe反應(yīng)性[9]。建議對(duì)HBV核酸檢測(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者的歸隊(duì)增加化學(xué)發(fā)光法等補(bǔ)充試驗(yàn)，制定更嚴(yán)密的安全歸隊(duì)策略以保證血液安全。因此，需要在《血站技術(shù)操作規(guī)程( 2019 版)》的基礎(chǔ)上，在保障血液安全的同時(shí)，充分考慮獻(xiàn)血者實(shí)際需求，進(jìn)一步研究將化學(xué)發(fā)光法等實(shí)驗(yàn)作為歸隊(duì)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目[9-10]，從而更加安全、合理、有效地保障血液質(zhì)量，推動(dòng)我國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血事業(yè)持續(xù)、穩(wěn)定發(fā)展。