索拉非尼聯(lián)合卡培他濱治療肝細(xì)胞肝癌療效及對(duì)患者血清miR-212和miR-132水平的影響

曹紹華，王慶慶，張金冉

延安大學(xué)附屬醫(yī)院臨床藥學(xué)科（延安716000）

肝癌病死率居惡性腫瘤前五位，其中肝細(xì)胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）約占90%，具有高復(fù)發(fā)傾向，目前暫無(wú)有效方法能將其阻斷，因外科切除手術(shù)適應(yīng)證多、復(fù)發(fā)率高，射頻消融、化療等手段在臨床上應(yīng)用的越來(lái)越廣泛［1-3］。索拉非尼通過(guò)抑制絲／蘇氨酸激酶及上游受體的產(chǎn)生，抑制腫瘤增殖和新血管的生成，對(duì)中晚期HCC 患者療效顯著［4］。但是，索拉非尼的高劑量使用給患者帶來(lái)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，在臨床治療中會(huì)聯(lián)合其它抗腫瘤藥物進(jìn)一步發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)［5］。本研究討論了索拉非尼聯(lián)合卡培他濱治療HCC 的療效及對(duì)患者血清微小RNA（miR）-212 和miR-132水平的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料 選取2017年1月至2019年1月本院收治的70 例HCC 患者，隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，試驗(yàn)組35例，男性23例，女性12例，年齡40～76歲，平均（56.94±5.23）歲；TNM 分期:Ⅲb期7例、Ⅳ期28例；體力狀況（ECOG）評(píng)分（2.14±0.14）分。對(duì)照組35例，男性21例，女性14例，年齡39～75歲，平均（57.32±5.68）歲；TNM 分期:Ⅲb期10例、Ⅳ期25例；ECOG 評(píng)分（2.17±0.15）分。兩組患者一般資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。病例納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)病理確診為HCC 患者；②TNM 分期:Ⅲb、Ⅳ期；③無(wú)外科手術(shù)、肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)等介入治療指征；④病灶可測(cè)量，預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月；⑤經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，患者自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn):①患有其他惡性腫瘤者；②合并嚴(yán)重感染及出血者；③合并血液系統(tǒng)疾病或傳染病等；④合并嚴(yán)重心腦血管疾病者；⑤伴隨肺間質(zhì)疾病或嚴(yán)重肝腎功能障礙者。

2 治療方法 兩組患者均在治療過(guò)程中進(jìn)行抑酸、保肝和抗感染等常規(guī)處理。對(duì)照組:口服索拉非尼（多吉美，注冊(cè)證號(hào)20060296），200 mg／d，分兩次服用，21 d為1個(gè)療程，持續(xù)口服2個(gè)療程。試驗(yàn)組:在對(duì)照組基礎(chǔ)上口服卡培他濱（國(guó)藥準(zhǔn)字H20133365）1500 mg／（m2·d），連續(xù)口服14 d，停藥7 d，21 d為1個(gè)療程，化療2個(gè)療程。治療結(jié)束進(jìn)行影像學(xué)檢查，并對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)估。

3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) ①兩組臨床療效?；熐昂突熃Y(jié)束后兩周，進(jìn)行CT 檢查，按照RECIST 實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［6］，完全緩解（CR）:可見(jiàn)病灶消失，至少持續(xù)4周以上掃描無(wú)異常；部分緩解（PR）:腫瘤最大直徑和最大垂直直徑的乘積減小≥50%；疾病穩(wěn)定（SD）:腫瘤最大直徑和最大垂直直徑的乘積減?。?0%，增大＜25%；疾病進(jìn)展（PD）:一個(gè)或多個(gè)病灶的腫瘤最大直徑和最大垂直直徑的乘積增大≥25%。疾病控制率=（CR+PR+SD）／總例數(shù)×100%。②兩組白細(xì)胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（INF-γ）水平對(duì)比。采集化療前后患者靜脈血5 ml，在3000 r／min離心10 min分離血清，-20℃保存待查，利用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)血清中IL-2、TNFα、INF-γ濃度，試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供。③兩組血清miR-212和miR-132水平對(duì)比。血漿總RNA 的提取:標(biāo)本解凍后進(jìn)行兩相分離，通常RNA 分布于上層無(wú)色水相中；取上層液進(jìn)行RNA 沉淀，管底出現(xiàn)白色沉淀，將獲得的白色沉淀進(jìn)行洗滌和溶解，DU800型分光光度計(jì)測(cè)定RNA 的濃度及純度；隨即進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，將獲得的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物保存于-20℃的冰箱中。實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（Realtime qPCR）技術(shù)檢測(cè)miR-212／132 水平，Real-time qPCR 引物合成由英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司提供，PCR 引 物 序 列miR-212／132 分 別 為:5'-GCCGATAACAGT CTACAGC-3'和5'-CAGTGCAG GGTCCGAGG-3'；5'-GCCGATAACAGTCTACAG C-3'和5'-CAGTGCAGGGTCCGAGG-3'；內(nèi)參照基因?yàn)閁6 RNA，U6定量引物:5'-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3'和5 AACGCTTCACGAATTTGCG T-3'。嚴(yán)格按照Access RT-PCR System 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。由SDS 軟件計(jì)算每個(gè)樣品和內(nèi)參的Ct值，△Ct=Ct目標(biāo)基因-Ct內(nèi)參基因，受試者miRNA 的相對(duì)表達(dá)水平=2-△△Ct。④兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況。根據(jù)通用毒性標(biāo)準(zhǔn)（CTC）將不良反應(yīng)分為0～Ⅳ級(jí)，不良反應(yīng)包括高血壓、手足綜合征、蛋白尿、肝腎功能異常和消化道出血。⑤兩組預(yù)后情況比較。對(duì)兩組患者通過(guò)門(mén)診和電話隨訪1年，統(tǒng)計(jì)其1年生存率。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用［例（%）］表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier法分析生存率，P＜0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 兩組近期療效比較 化療結(jié)束后，試驗(yàn)組疾病控制率為82.86%高于對(duì)照組的60.00%（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組近期療效比較［例（%）］

2 兩組血清IL-2、TNF-α、INF-γ水平對(duì)比 兩組治 療 后IL-2、TNF-α、INF-γ 均 高 于 治 療 前（P＜0.05），治療后試驗(yàn)組的TNF-α水平低于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3 兩組血清miR-212和miR-132水平對(duì)比 兩組治療后miR-212、miR-132水平均高于治療前（P＜0.05），治療后實(shí)驗(yàn)組的miR-212、miR-132 水平均高于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表2 兩組IL-2、TNF-α、INF-γ水平對(duì)比（±s）

表2 兩組IL-2、TNF-α、INF-γ水平對(duì)比（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對(duì)照組治療后比較，△P＜0.05

組 別 n 時(shí) 段 IL-2（ng／L） TNF-α（U／ml）INF-γ（U／ml）試驗(yàn)組 35 治療前3.55±0.52 42.14±5.23 14.37±2.12治療后 6.14±0.83* 55.78±5.14*△23.04±3.17*對(duì)照組 35 治療前 3.71±0.47 42.33±5.26 14.36±2.14治療后 6.28±1.03* 59.03±5.27* 24.19±3.12*

表3 兩組血清miR-212和miR-132水平對(duì)比（±s）

表3 兩組血清miR-212和miR-132水平對(duì)比（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對(duì)照組治療后比較，△P＜0.05

組 別 n 時(shí) 段miR-212 miR-132試驗(yàn)組 35 治療前0.45±0.11 0.37±0.11治療后 1.03±0.16*△ 0.82±0.17*△對(duì)照組 35 治療前 0.44±0.12 0.36±0.11治療后 0.82±0.13* 0.64±0.14*

4 兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況對(duì)比 試驗(yàn)組患者手足綜合征和惡心嘔吐的發(fā)生率高于對(duì)照組（P＜0.05）；兩組疲乏、貧血和白細(xì)胞下降的發(fā)生率相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況對(duì)比［例（%）］

5 兩組預(yù)后情況比較 試驗(yàn)組1 年生存率為74.29%（26／35）高于對(duì)照組51.43%（18／35），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1。

圖1 兩組HCC患者1年生存曲線

討 論

索拉非尼自2005年批準(zhǔn)上市以來(lái)，在HCC 及其它惡性腫瘤的治療中都取得了不錯(cuò)的進(jìn)展，多項(xiàng)研究證實(shí)索拉非尼作為一種絲／蘇氨酸Raf-1激酶抑制劑，可有效延長(zhǎng)惡性腫瘤患者生存時(shí)間，延緩腫瘤進(jìn)展時(shí)間，為晚期不能進(jìn)行手術(shù)治療的HCC患者提供了生存希望［7］。高劑量索拉非尼的應(yīng)用會(huì)使患者出現(xiàn)較多不良反應(yīng)，因此索拉非尼聯(lián)合用藥方式也是研究熱點(diǎn)之一，Trevisani等［8］的研究指出卡培他濱經(jīng)腫瘤組織轉(zhuǎn)化為5-氟尿嘧啶，可與索拉非尼協(xié)同治療惡性腫瘤。

本研究中，試驗(yàn)組疾病控制率為82.86%高于對(duì)照組60.00%，說(shuō)明索拉非尼聯(lián)合卡培他濱的化療效果優(yōu)于索拉非尼單藥。mi-RNA 是一類(lèi)非編碼單鏈小分子，參與多種疾病過(guò)程，同時(shí)調(diào)控細(xì)胞分化、免疫應(yīng)答等多種過(guò)程，存在于易提取的外周血循環(huán)系統(tǒng)中，在疾病的無(wú)創(chuàng)診斷、評(píng)估患者預(yù)后的應(yīng)用中有很大潛力；miR-212／132屬同一基因簇，序列類(lèi)似，在肝硬化、肝癌患者體內(nèi)表達(dá)均呈降低狀態(tài)［9-10］。有研究指出，miR-212／132在肝癌中發(fā)揮抑癌基因作用，對(duì)肝癌的增殖、轉(zhuǎn)移有抑制作用，與腫瘤分化程度呈正相關(guān)［11-12］。除此之外，通過(guò)檢驗(yàn)兩組患者血清miR-212／132水平，發(fā)現(xiàn)治療后試驗(yàn)組的miR-212、miR-132 水平均高于對(duì)照組，說(shuō)明兩種藥物聯(lián)用可以進(jìn)一步提升miR-212／132水平。

化療對(duì)身體的免疫系統(tǒng)有一定傷害，本研究中，兩組治療后IL-2、TNF-α、INF-γ均高于治療前，治療后試驗(yàn)組的TNF-α水平低于對(duì)照組，說(shuō)明兩者聯(lián)用對(duì)患者的免疫系統(tǒng)影響更多，提示臨床上應(yīng)同時(shí)采取恢復(fù)治療，避免晚期HCC 患者化療后出現(xiàn)肝腎功能衰竭、免疫抑制等嚴(yán)重毒副反應(yīng)。畢麗華等［13］的研究中指出，替吉奧、紫杉醇分別聯(lián)合索拉非尼治療肝癌患者，發(fā)現(xiàn)兩組不良反應(yīng)差別不大。石潔瓊等［14］分析了半量或全量索拉非尼聯(lián)合卡培他濱治療HCC的療效，發(fā)現(xiàn)兩組患者疾病控制情況相當(dāng)，減少索拉非尼用量會(huì)降低患者出現(xiàn)手足綜合征、高血壓的情況。本研究中，試驗(yàn)組患者手足綜合征和惡心嘔吐的發(fā)生率高于對(duì)照組；兩組疲乏、貧血和白細(xì)胞下降的發(fā)生率相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，大多數(shù)出現(xiàn)不良反應(yīng)的患者均為Ⅰ-Ⅱ度，說(shuō)明大部分患者對(duì)于化療劑量是可以耐受的，聯(lián)合用藥的不良反應(yīng)更多。既往研究指出，卡培他濱具有成為結(jié)直腸癌一線化療藥物的潛力，而索拉非尼對(duì)HCC患者預(yù)后提升效果確切［14-16］。試驗(yàn)組1年生存率高于對(duì)照組，證明聯(lián)合用藥可更好的控制HCC 進(jìn)展，提升患者短期生存率。

綜上所述，與索拉非尼單藥化療相比，聯(lián)合卡培他濱可提高HCC疾病控制率，同時(shí)提升患者血清miR-212和miR-132水平，一定程度上改善預(yù)后。