新型癸氧喹酯乳劑制備及含量檢測方法建立

唐紅梅，陳誠

(重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460)

癸氧喹酯為喹啉類抗球蟲藥物，主要用于避免家禽腸道受到球蟲的傷害，保護(hù)腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，同時具有顯著促生長作用[1]。但是由于癸氧喹酯溶液為強(qiáng)酸溶液，故口服刺激性較大、加水稀釋產(chǎn)生沉淀分散不均；癸氧喹酯預(yù)混劑固體顆粒較大不易吸收、且分散不均生物利用率不高；癸氧喹酯干混懸劑存在易沉淀、固體顆粒分散不均療效不穩(wěn)等缺陷[2]。

本課題研發(fā)的癸氧喹酯乳劑有效解決了癸氧喹酯口服刺激性較大、加水稀釋產(chǎn)生沉淀分散不均等問題[3-5]。對制劑制備、穩(wěn)定性、粒徑進(jìn)行了表征，并建立了新型制劑癸氧喹酯乳劑含量測定HPLC法，可用于癸氧喹酯乳劑中癸氧喹酯的含量檢測。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

癸氧喹酯對照品(批號k0651211),中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；癸氧喹酯乳劑(規(guī)格3%，批號190320-1、190320-2、190320-3),重慶市畜牧科學(xué)院獸醫(yī)獸藥所；甲醇、乙腈均為色譜純；油酸乙酯、硝酸鈣、冰醋酸、磷酸、甲酸均為分析純。

Winner2308C激光粒度儀；Agilent 1260型液相色譜儀(UV-230紫外-可見檢測器和EC2000色譜工作站)；AUW220D電子分析天平。

1.2 癸氧喹酯乳液制備

稱取癸氧喹酯3.00 g，OP-10 3.50 g，斯盤-80 1.50 g于燒杯中，然后加入油酸乙酯40 mL，加熱至80 ℃，在磁力攪拌器3 000 r/min攪拌20 min后緩慢加入60 mL、80 ℃的注射用水中，繼續(xù)攪拌20 min，將制成的乳液通過高剪切勻質(zhì)機(jī)10 000 r/min，剪切5 min，最后經(jīng)3KGY的60Co-Y射線輻照滅菌，制成癸氧喹酯乳液。生產(chǎn)批號(190320-1，190320-2，190320-3)。

1.3 性能測試

乳液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)以2015版獸藥典中對乳液穩(wěn)定性檢測方法進(jìn)行檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法如下：以半徑為10 cm的離心機(jī)以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，不應(yīng)有分層現(xiàn)象。如有分層，記錄分出相體積，以分出相體積最小為佳。

粒度分析采用激光粒度儀測試癸氧喹酯乳液粒徑。

1.4 含量檢測方法

1.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱為反相柱SepaxHP-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)。流動相：乙腈∶0.2%冰醋酸(85∶15)為流動相，流速0.8 mL/min，檢測波長265 nm，進(jìn)樣體積 20 μL，柱溫為30 ℃。上述條件下，癸氧喹酯與其他物質(zhì)基線分離良好，分離度達(dá)到1.5以上，理論塔板數(shù)大于5 000。

1.4.2 對照品溶液的制備 取癸氧喹酯對照品約25 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加0.05 mol/L硝酸鈣甲醇溶液20 mL，超聲溶解，以0.05 mol/L硝酸鈣甲醇溶液定容至刻度，得到0.496 mg/mL的對照品溶液，0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液得到對照品儲備液，4 ℃冰箱內(nèi)保存，備用。

1.4.3 供試品溶液的制備 精密量取本品0.85 g，置50 mL容量瓶中，加入0.05 mol/L硝酸鈣甲醇溶液20 mL，搖勻，超聲處理30 min，定容搖勻，過濾，取續(xù)濾液，過0.45 μm濾膜，得0.510 mg/mL供試品溶液，4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.4 測定方法 按“1.4.1”節(jié)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣，以色譜峰保留時間定性，以色譜峰峰面積定量，用外標(biāo)法計算樣品中癸氧喹酯的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 性能測試

2.1.1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 3批次癸氧喹酯液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在半徑為10 cm的離心機(jī)4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min后均未分層，符合2015版獸藥典要求。

2.1.2 粒徑分析 通過激光粒度儀對癸氧喹酯乳液進(jìn)行粒徑測試，結(jié)果見圖1。由圖1可知，癸氧喹酯乳液分散均勻，平均粒徑0.548 μm，粒徑分布在0.105～1.997 μm，符合2015版獸藥典要求。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 專屬性實(shí)驗(yàn) 按照1.4.1節(jié)高效液相色譜條件，以空白輔料溶液、流動相、0.248 mg/mL對照品溶液、0.255 mg/mL供試品溶液分別進(jìn)樣20 μL，采集色譜數(shù)據(jù)，記錄色譜，結(jié)果見圖2。

圖2 方法專屬性考察色譜圖Fig.2 The specificity inspection of HPLC method

由圖2可知，癸氧喹酯保留時間約為23.0 min，空白輔料溶液及流動相中有機(jī)溶劑在保留時間3～4 min左右出現(xiàn)溶劑峰，但與癸氧喹酯色譜峰相隔較遠(yuǎn)，不影響癸氧喹酯的出峰。由此說明該分析方法專屬性強(qiáng)，乳液中各種輔料對其含量的檢測無干擾，因此該方法可用于癸氧喹酯乳劑中癸氧喹酯的檢測。

2.2.2 線性范圍 精密移取對照品儲備溶液0.05,0.10,0.20,1.00,2.00,5.00,10.00 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用0.05 mol/L硝酸鈣甲醇溶液稀釋至刻度。按1.4.1節(jié)液相色譜條件分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積(y)對進(jìn)樣濃度(x)進(jìn)行線性回歸，得到癸氧喹酯的線性回歸方程為y=5.24×104x-98.42，相關(guān)系數(shù)R=0.999 2，表明樣品在2.48～496 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，可用于樣品含量檢測。

2.2.3 重復(fù)性考察 取同一批次癸氧喹酯乳劑，按1.4.3節(jié)條件平行制備待測癸氧喹酯乳劑供試品溶液6份，按1.4.1節(jié)色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計算癸氧喹酯峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。結(jié)果RSD為1.21%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.4 精密度考察 精密吸取對照品儲備溶液適量，配制成濃度為0.099 2 mg/mL的溶液，按1.4.1節(jié)色譜條件進(jìn)樣20 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。計算RSD為1.13%，表明精密度良好，可以滿足實(shí)驗(yàn)檢測需要。

2.2.5 檢測限和定量限 精密移取對照品儲備溶液適量，用0.05 mol/L硝酸鈣甲醇溶液逐級稀釋。按1.4.1節(jié)液相色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。以信噪比3∶1為樣品檢測限，以信噪比10∶1為樣品定量限。經(jīng)過測定，癸氧喹酯的檢測限和定量限分別是0.046 μg/mL和0.153 μg/mL。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取癸氧喹酯乳劑，按1.4.3節(jié)條件制備成待測癸氧喹酯供試品溶液，按1.4.1節(jié)色譜條件操作，分別在0,1,2,4,6,12,24 h進(jìn)樣，測定色譜峰面積，計算癸氧喹酯乳劑峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。RSD為0.89%，表明癸氧喹酯乳劑在24 h之內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.2.7 準(zhǔn)確度考察 精密稱取含量為3%的癸氧喹酯乳劑9份，每份約0.03 g，平均分為3組分別置于100 mL容量瓶中，分別準(zhǔn)確加入相應(yīng)量的癸氧喹酯對照品，按1.4.3節(jié)條件制備成待測癸氧喹酯供試品溶液，按1.4.1節(jié)色譜條件操作，計算加樣回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，結(jié)果見表1。由表1可知，該方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

表1 癸氧喹酯回收率結(jié)果(n=9)Table 1 Result of recovery for decoquinate

2.2.8 樣品含量測定 取批號為190320-1、190320-2、190320-3的三批癸氧喹酯乳劑，分別按1.4.3節(jié)條件制備成3份平行待測供試品溶液。按1.4.1節(jié)色譜條件分別精密吸取質(zhì)量濃度為0.496 mg/mL的對照品溶液和供試品溶液各20 μL，進(jìn)樣，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法，以峰面積計算樣品的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批癸氧喹酯乳劑含量檢測結(jié)果(n=3)Table 2 Test results of 3 batches of decoquinate emulsion (n=3)

2.3 油相的篩選

在乳液制備過程中，選擇乳化劑親油基與被乳化物結(jié)構(gòu)相近油水界面膜更穩(wěn)定。癸氧喹酯不溶于水和乙醇，微溶于甲醇、氯仿和乙醚，因此在油相篩選中，選擇與癸氧喹酯親油基結(jié)構(gòu)相近的油酸乙酯作為油相，有助于提高癸氧喹酯溶解和分散，更有利于乳液穩(wěn)定。

2.4 檢測波長及流動相的選擇

參考2015版中國獸藥典一部及國內(nèi)外文獻(xiàn)資料，對癸氧喹酯對照品溶液進(jìn)行紫外全波長掃描，由掃描譜圖可知，最大吸收波長為260～270 nm，比較該段波長的各個色譜圖，譜圖最優(yōu)為265 nm，故樣品的測定波長為265 nm。

比較甲醇、乙腈色譜溶劑，發(fā)現(xiàn)乙腈選擇性更強(qiáng)，故以乙腈為有機(jī)溶劑；通過分析磷酸、冰醋酸、甲酸的酸性，最終選擇冰醋酸為pH調(diào)節(jié)劑。故以乙腈：0.2%冰醋酸(85∶15)為流動相，發(fā)現(xiàn)色譜圖對稱性好，不拖尾。

通過對比流速0.8，1.0，1.2 mL/min的色譜圖，以流速0.8 mL/min為最佳實(shí)驗(yàn)條件。對柱溫進(jìn)行分析，最終選擇30 ℃為色譜柱溫。

3 結(jié)論

本文通過表面活性劑復(fù)配方法制備了癸氧喹酯乳液制劑，并建立了新型制劑癸氧喹酯乳劑含量測定HPLC法。該分析方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，并且操作簡單快速，為控制新型癸氧喹酯乳劑產(chǎn)品質(zhì)量、確保產(chǎn)品批次間穩(wěn)定性、建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及為后續(xù)新藥的研究提供重要參考，同時該方法可進(jìn)一步用于含相同藥物的其他制劑中癸氧喹酯的定性定量檢測[6-7]。