傳統(tǒng)及趁鮮加工工藝對桔梗飲片質(zhì)量的影響

王 斌，梁偉龍，林欽賢*，郭長達，郝建新

(1.廣州市香雪制藥股份有限公司，廣東 廣州 510663；2.亳州市滬譙藥業(yè)有限公司，安徽 亳州 236800；3.寧夏隆德縣六盤山中藥資源開發(fā)有限公司，寧夏 固原 756300)

桔梗為桔?？浦参锝酃latycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，列為下品。桔梗在我國大部分地區(qū)均有分布，主要分布于安徽、河南、湖北、云南、吉林、四川等地[3]，其味苦、辛，性平，具有宣肺、利咽、祛痰、排膿的功效，主要有效成分為三萜皂苷[4-5]，現(xiàn)代藥理研究表明桔梗皂苷D為主要的鎮(zhèn)咳成分[6]。

目前桔梗飲片仍沿用傳統(tǒng)加工方式，即鮮品干燥成藥材后，再軟化切制成飲片。該加工模式耗時耗力，且在軟化過程中容易導致有效成分的損失，影響飲片的質(zhì)量。2019年7月26日，河北省藥品監(jiān)督管理局印發(fā)《關于支持醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的若干政策措施》提到“允許企業(yè)采購趁鮮切制的中藥材”[7]，但關于桔梗趁鮮切制加工工藝的研究較少，難以保證中藥飲片質(zhì)量安全穩(wěn)定，本文就桔梗趁鮮加工工藝進行研究，以桔梗皂苷D、浸出物含量為評價指標，比較傳統(tǒng)加工工藝及趁鮮加工工藝，探討桔梗趁鮮切片的可行性。

1 儀器、試藥及材料

1.1 儀器

QWZL-150D型直線往復式切藥機(臺州博大制藥機械科技有限公司)，RHP-100型高速多功能粉碎機(浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司)，DHG-9245A型電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)，HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學儀器有限公司)，XS204型電子天平(d=0.1 mg，Mettler Toledo)，MS603S型電子天平(d=1 mg，Mettler Toledo)，KQ-500DA型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，DIONEX Ultimate 3000高效液相色譜儀(ELSD檢測器)。

1.2 試藥

桔梗皂苷D(111851-201607，中國食品藥品檢定研究院，純度94.0%)，乙腈(色譜純，merck)，甲醇、正丁醇、乙醇等均為分析純，超純水。

1.3 材料

桔梗藥材于2019年7月30日采于云南省德欽縣，經(jīng)廣州香雪制藥股份有限公司康志英高級工程師鑒定為桔?？浦参锝酃latycodongrandiflorum(Jacq.)A.DC.干燥根。

2 方法與結果

2.1 傳統(tǒng)加工工藝制備飲片

將采集的桔梗鮮品洗凈，除去須根，60 ℃干燥處理加工成藥材，再按《中國藥典》方法處理：洗凈，潤透，切厚片(4 mm)，60 ℃烘至水分合適。

2.2 趁鮮加工工藝制備飲片

將采集的桔梗鮮藥材除去須根及泥土等雜質(zhì)，平均分成2份，剝?nèi)ネ馄せ虿蝗ネ馄ぃ泻衿?4 mm)，60 ℃烘至水分合適。

2.3 浸出物含量的測定

取各桔梗樣品粗粉約2 g，精密稱定，置150 mL的錐形瓶中，精密加乙醇50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算樣品中浸出物的含量(%)。

2.4 桔梗皂苷D含量的測定

2.4.1 色譜條件 依利特SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：乙腈-水(25∶75)，檢測器：ELSD檢測器，流速：1 mL/min，柱溫：30 ℃，進樣量：5 μL、10 μL。在此條件下，桔梗皂苷D分離較好，HPLC色譜見圖1。

A：對照品；B：供試品；C：空白對照；1：桔梗皂苷D

2.4.2 對照品溶液的制備 取桔梗皂苷D對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過二號篩)約2 g，精密稱定，精密加入50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置水浴上蒸干，殘渣加水20 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液50 mL洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水50 mL洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇3 mL使溶解，加硅膠0.5 g拌勻，置水浴上蒸干，加于硅膠柱100～120目，10 g，內(nèi)徑為2 cm，用三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液濕法裝柱上，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液50 mL洗脫，棄去洗脫液，再用三氯甲烷-甲醇-水(60∶20∶3)混合溶液100 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用三氯甲烷-甲醇-水(60∶29∶6)混合溶液100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4.4 線性關系考察 將標準溶液分別進樣1、3、5、7、10、15 μL檢測，以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，進行回歸分析，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=1.547X+1.3419，r=0.999 3，說明桔梗皂苷D在0.022 1～2.535 μg之間有較好的線性關系。

2.4.5 精密度試驗 取對照品溶液，按上述色譜條件重復進樣6次，記錄峰面積。結果：桔梗皂苷D的峰面積RSD為0.7%，說明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣檢測，測定桔梗皂苷D峰面積，結果：峰面積RSD為1.4%，說明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7 重復性試驗 取同一批藥材，制備供試品溶液6份，按色譜條件項進樣分析，測定峰面積，結果：峰面積的RSD為1.0%，說明方法重復性良好。

2.4.8 加樣回收試驗 精密稱取同一批次已知含量的樣品1 g，共6份，按1∶1加入桔梗皂苷D對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣10 μL，記錄峰面積，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 桔梗皂苷D回收率試驗

2.5 樣品測定

按照上述實驗方法，測定兩種加工工藝所得的桔梗飲片中浸出物及桔梗皂苷D的含量，結果見表2。采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件，對浸出物及桔梗皂苷D含量進行單因素方差分析，結果表明，趁鮮與傳統(tǒng)加工工藝所得的桔梗飲片中浸出物及桔梗皂苷D含量的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，趁鮮加工工藝所制得的飲片中浸出物及桔梗皂苷D含量均明顯高于傳統(tǒng)加工工藝所得的飲片，且趁鮮加工工藝省時省力。結果提示，趁鮮加工工藝優(yōu)于傳統(tǒng)加工工藝，這也在一定程度上證實了桔梗趁鮮切片的可行性。

表2 含量測定結果 (%)

3 結論與討論

本研究說明，趁鮮加工工藝制得的飲片中浸出物及桔梗皂苷D的含量均高于傳統(tǒng)加工工藝所得的飲片，且兩種工藝所制得的飲片浸出物及桔梗皂苷D的含量均符合《中國藥典》的要求，此外，趁鮮加工工藝省去了桔梗由鮮品加工成藥材及藥材再軟化的步驟，省時省力且降低了有效成分的損失，因此，趁鮮加工工藝具有一定的可行性及優(yōu)越性。

同時，桔梗是否刮皮是規(guī)范炮制工藝的一個關鍵性的問題，研究中發(fā)現(xiàn)，去皮桔梗浸出物及桔梗皂苷D的含量均高于帶皮桔梗，這與石俊英、許傳蓮等人[8-9]研究的結論一致，因此建議桔梗趁新鮮除去栓皮，除去栓皮后不但有效成分較高，且易于干燥，藥材及飲片色澤潔白、美觀。