NFKBIA基因多態(tài)性、飲食習(xí)慣及其交互作用與胃癌易感性的關(guān)系

李 丹，劉寶英，余明明，莊海林，揭金花，吳涵梅

(1．福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州350101；2．福建醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，福建福州 350108)

胃癌的發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果，其中基因多態(tài)性被認(rèn)為是最重要的遺傳因素。非可控性炎癥在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演著十分重要的角色[1]，胃部慢性炎癥是由物理化學(xué)因素刺激、遺傳因素、病原體感染和免疫失衡等多病因綜合作用的結(jié)果[2]，其中不良飲食習(xí)慣引起的物理性化學(xué)性刺激對(duì)誘發(fā)胃部慢性炎癥和胃癌不容忽視。NF-κB信號(hào)通路是炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)的重要通路，NFKBIA是該通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)NF-κB復(fù)合物抑制蛋白IκB的編碼基因，其基因多態(tài)性的改變可間接導(dǎo)致NF-κB調(diào)控基因編碼產(chǎn)物的異常。rs696位點(diǎn)位于NFKBIA基因3′UTR端，其多態(tài)性改變?cè)黾佣喾N腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[3-4]，而Zhang等的一項(xiàng)Meta分析顯示rs696位點(diǎn)GG+GA基因型在腫瘤的發(fā)生中起保護(hù)作用[5]，其多態(tài)性改變可增加胃賁門(mén)癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[6]，同時(shí)其與不良飲食習(xí)慣間的交互作用可能增加胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，但尚未見(jiàn)報(bào)道。本次研究旨在分析NFKBIA基因rs696位點(diǎn)多態(tài)性、飲食習(xí)慣及其交互作用對(duì)胃癌的影響，探討環(huán)境中物理性、化學(xué)性致炎因子與炎癥信號(hào)通路相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)的聯(lián)合作用模式，為胃癌病因?qū)W研究及其預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

采用1∶1配對(duì)病例對(duì)照研究方法，收集2013年4月至2017年6月福建省仙游縣醫(yī)院經(jīng)病理確診的587例新發(fā)胃癌患者作為病例組，其中賁門(mén)癌患者263例，非賁門(mén)癌患者324例。排除胃部良性病變及其他惡性腫瘤者及病危無(wú)法清晰回答問(wèn)題的患者。健康對(duì)照選擇：按性別、年齡±3歲與病例進(jìn)行1∶1配對(duì)，選取與病例相同鄉(xiāng)鎮(zhèn)或胃癌死亡率相近鄉(xiāng)鎮(zhèn)的健康人群作為對(duì)照，無(wú)腫瘤病史，共納入對(duì)照587例。其中男性病例425例，女性病例162例，年齡在33～90歲，平均年齡(65.3±9.9)歲；健康對(duì)照587例，其中男性對(duì)照425例，女性對(duì)照162例，年齡在33～87歲，平均年齡(65.3±9.7)歲。

1.2 調(diào)查方法

采用自制調(diào)查問(wèn)卷，調(diào)查問(wèn)卷參考文獻(xiàn)資料及當(dāng)?shù)靥厣盍?xí)慣編制，由經(jīng)過(guò)統(tǒng)一專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)后的調(diào)查人員對(duì)病例組和對(duì)照組人員進(jìn)行面訪式資料收集，包括研究對(duì)象的一般人口學(xué)特征及飲食習(xí)慣等，收集治療前外周血5 mL，放置冷藏箱中半小時(shí)內(nèi)分裝成血漿、白細(xì)胞、紅細(xì)胞，于-80℃低溫冰箱保存，用于DNA提取及基因分型。

1.3 基因分型檢測(cè)

采用紅細(xì)胞裂解法提取血液標(biāo)本基因組DNA，檢測(cè)DNA濃度和純度。PCR的引物為：上游5′-ACGTTG GATGAAAATGAGGGCTGATCCTAC-3′；下 游5′-ACG TTGGATGGTGTACTTATATCCACACTGC-3′。Sequenom MassARRAY SNP方法檢測(cè)過(guò)程結(jié)合多重PCR技術(shù)、MassARRAY iPLEX單堿基延伸技術(shù)和基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜分析質(zhì)譜技術(shù)(matrixassisted laser desorption ionization time-of-flight，MALDITOF)進(jìn)行分型檢測(cè)。

1.4 質(zhì)量控制

由研究設(shè)計(jì)者對(duì)調(diào)查員進(jìn)行統(tǒng)一培訓(xùn)并對(duì)調(diào)查問(wèn)卷中的各變量進(jìn)行明確定義。調(diào)查結(jié)束后及時(shí)整理調(diào)查表，復(fù)查核實(shí)，對(duì)缺漏項(xiàng)及時(shí)填補(bǔ)，并剔除不合格問(wèn)卷。采用盲法判讀基因型，并隨機(jī)選擇2%的樣本進(jìn)行盲法重復(fù)檢測(cè)，重檢一致率為100%。其中12例未檢出樣本已予以剔除，DNA質(zhì)量及濃度合格率98.99%。全部位點(diǎn)的分型成功率超過(guò)99.0%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用EpiData 3.1軟件雙錄入調(diào)查資料，應(yīng)用SPSS 20.0軟件整理分析數(shù)據(jù)；采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行一般人口學(xué)特征均衡性檢驗(yàn)；采用條件logistic回歸分析多態(tài)位點(diǎn)基因型的比值比(odds ratio，OR)及95%CI；采用叉生分析結(jié)合logistic回歸模型分析基因與環(huán)境的聯(lián)合作用及相乘交互作用，采用Andersson等編制的EXCEL表分析基因與環(huán)境的相加交互作用，交互作用相對(duì)超額危險(xiǎn)度(relative excess risk due to interaction，RERI)、歸 因 比(attributable proportion due to interaction，AP)、交互指數(shù)(synergy index，S)3個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)相加交互作用，若兩因素?zé)o相加交互作用，則RERI和AP的可信區(qū)間應(yīng)包含0，S的可信區(qū)間應(yīng)包含1，反之則存在相加交互作用；所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

均衡性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，除文化程度和BMI外，其他因素均衡可比，見(jiàn)表1。經(jīng)條件logistic回歸分析顯示高中及以上文化程度是胃癌保護(hù)因素，其OR(95%CI)為0.60(0.40，0.91)；BMI≥24 kg/m2是保護(hù)因素，其OR(95%CI)為0.45(0.33，0.61)；BMI＜18.5 kg/m2為危險(xiǎn)因素，其OR(95%CI)為1.89(1.30，2.75)。

2.2 飲食習(xí)慣與胃癌易感性分析

經(jīng)調(diào)整年齡、文化、婚姻、職業(yè)、BMI，快速飲食、不規(guī)律進(jìn)餐、高鹽飲食和經(jīng)常攝入腌菜是胃癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，OR(95%CI)分別為1.53(1.20，1.95)、1.55(1.16，2.08)、1.51(1.17，1.94)、2.78(2.01，3.85)，除進(jìn)餐時(shí)間是否規(guī)律外，其他飲食習(xí)慣與賁門(mén)癌和非賁門(mén)癌的關(guān)系相同，見(jiàn)表2。

表1 病例組和對(duì)照組一般情況比較

2.3 rs696位點(diǎn)基因型與胃癌易感性分析

結(jié)果顯示該位點(diǎn)符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(χ2=2.047，P=0.152)。在調(diào)整了年齡、文化等因素之后，經(jīng)條件logistic回歸分析結(jié)果顯示，rs696位點(diǎn)AG基因型、AA基因型及顯性模型(AG+AA)與賁門(mén)癌發(fā)生有關(guān)，且均增加賁門(mén)癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

2.4 rs696位點(diǎn)基因型與飲食習(xí)慣聯(lián)合作用及交互作用與賁門(mén)癌易感性分析

在賁門(mén)癌中，攜帶rs696位點(diǎn)AA基因型且高鹽飲食發(fā)生賁門(mén)癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶rs696G等位基因且清淡飲食的8.34倍；攜帶rs696位點(diǎn)AA基因型且經(jīng)常攝入腌菜發(fā)生賁門(mén)癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶rs696位點(diǎn)G等位基因且未吃或偶爾吃腌菜的5.49倍；攜帶rs696位點(diǎn)A等位基因且快速飲食發(fā)生賁門(mén)癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶rs696位點(diǎn)GG基因型且飲食速度較慢的2.85倍；攜帶rs696位點(diǎn)A等位基因且高鹽飲食患賁門(mén)癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶rs696位點(diǎn)GG基因型且清淡飲食的14.38倍；攜帶rs696位點(diǎn)A等位基因且經(jīng)常攝入腌菜發(fā)生賁門(mén)癌的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶rs696位點(diǎn)GG基因型且未吃或偶爾吃腌菜的9.62倍。未發(fā)現(xiàn)rs696位點(diǎn)與飲食習(xí)慣的相乘和相加交互作用，見(jiàn)表4～表6。

表2 飲食習(xí)慣與胃癌關(guān)系的條件logistic回歸分析

3 討論

胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素綜合作用的結(jié)果。不合理的飲食方式常常會(huì)誘發(fā)胃癌的發(fā)生并影響胃癌的進(jìn)展，而合理健康的飲食方式則會(huì)阻斷胃癌的形成[7]。本次研究結(jié)果顯示快速飲食、不規(guī)律進(jìn)餐、高鹽飲食和經(jīng)常攝入腌菜是胃癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，調(diào)整OR及95%CI分別為1.53(1.20，1.95)、1.55(1.16，2.08)、1.51(1.17，1.94)和2.78(2.01，3.85)。研究發(fā)現(xiàn)，飲食速度過(guò)快及不規(guī)律進(jìn)餐會(huì)造成胃液分泌紊亂，胃結(jié)腸反射作用失調(diào)，未被食物中和的胃酸侵蝕胃黏膜，造成化學(xué)性損傷，可能導(dǎo)致慢性胃炎或潰瘍，同時(shí)飲食速度過(guò)快可引起急性胃擴(kuò)張，增加胃部疾病患病風(fēng)險(xiǎn)，同多項(xiàng)研究結(jié)果相似[8-11]。高濃度鹽可直接刺激胃黏膜保護(hù)層，損傷胃腔內(nèi)壁細(xì)胞，引起炎性再生反應(yīng)，誘發(fā)慢性炎癥，使DNA合成異常及細(xì)胞增殖惡性增加，導(dǎo)致胃癌的發(fā)生[12]，同多項(xiàng)研究結(jié)果相似[8，13]。經(jīng)常攝入腌菜發(fā)生胃癌的風(fēng)險(xiǎn)是未攝入或偶爾攝入腌菜的2.78倍，OR(95%CI)為(2.01，3.85)。流行病學(xué)研究與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明腌菜中含有的亞硝酸鹽和硝酸鹽，在合適的條件下生成N-亞硝基化合物，使胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加。加之腌制食品本身為高鹽食物，可直接損傷胃黏膜增加癌前病變的風(fēng)險(xiǎn)。賁門(mén)癌和非賁門(mén)癌在流行病學(xué)、易感因素方面不同[14]，但本次研究在飲食習(xí)慣上發(fā)現(xiàn)除三餐是否規(guī)律外，其他飲食習(xí)慣與賁門(mén)癌和非賁門(mén)癌的關(guān)聯(lián)方向相同。

表3 rs696位點(diǎn)基因型與胃癌易感性的條件logistic回歸分析

表4 rs696位點(diǎn)基因型與飲食習(xí)慣聯(lián)合作用與賁門(mén)癌易感性分析

表5 rs696位點(diǎn)基因型與飲食習(xí)慣相乘交互作用與賁門(mén)癌易感性分析

表6 rs696位點(diǎn)基因型與飲食習(xí)慣相加交互作用與賁門(mén)癌易感性分析

研究表明，人類(lèi)遺傳基因的各種差異有90%可歸因于由SNPs引起的基因變異[15]，特別地炎癥相關(guān)基因多態(tài)性在胃癌啟動(dòng)中發(fā)揮不可忽視的作用。非可控性炎癥在胃癌的發(fā)生發(fā)展中占重要地位[16]。NF-κB炎癥信號(hào)通路可調(diào)控炎癥反應(yīng)的基因表達(dá)[17]，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及腫瘤發(fā)生等過(guò)程中都扮演重要角色[18-19]。本次研究發(fā)現(xiàn)rs696位點(diǎn)AG基因型、AA基因型以及顯性模型(AG+AA)與賁門(mén)癌發(fā)生有關(guān)，都增加賁門(mén)癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，OR(95%CI)分別為1.63(1.04，2.55)、1.70(1.00，2.92)、1.65(1.08，2.53)，未發(fā)現(xiàn)其與非賁門(mén)癌的關(guān)系，與前期研究結(jié)果一致[6]。rs696位點(diǎn)位于3′UTR區(qū)，其多態(tài)性可調(diào)節(jié)NF-κB的活性[20]，IκBα是NF-κB通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)P50和P65二聚體的抑制物，其編碼基因的多態(tài)性改變可能導(dǎo)致通路的異常激活，與靶基因相應(yīng)部位結(jié)合，開(kāi)啟相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。

為進(jìn)一步分析基因與環(huán)境交互作用對(duì)賁門(mén)癌的作用特點(diǎn)，通過(guò)聯(lián)合作用和相乘、相加交互作用分析發(fā)現(xiàn)，rs696位點(diǎn)AA基因型與高鹽飲食、經(jīng)常攝入腌菜存在聯(lián)合作用，均增加賁門(mén)癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。rs696位點(diǎn)顯性模型與快速飲食、高鹽飲食和經(jīng)常攝入腌菜均存在聯(lián)合作用。較快進(jìn)食對(duì)胃黏膜產(chǎn)生物理性損傷，加之高鹽飲食及腌菜產(chǎn)生的化學(xué)刺激，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，長(zhǎng)期存在的物理和化學(xué)刺激，使炎癥轉(zhuǎn)為不可逆性。同時(shí)基因多態(tài)性，可增加環(huán)境暴露人群賁門(mén)癌發(fā)生的易感性。

本研究采用病例-對(duì)照研究設(shè)計(jì)，在病例選擇時(shí)將新發(fā)病例作為首選病例納入，減少回憶偏倚，同時(shí)在調(diào)查過(guò)程中把握調(diào)查質(zhì)量嚴(yán)格定義調(diào)查因素，最大程度減小偏倚增加結(jié)果可信度。綜上，本研究進(jìn)一步肯定了rs696位點(diǎn)與胃賁門(mén)癌發(fā)生的關(guān)系，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性位點(diǎn)與飲食習(xí)慣存在聯(lián)合作用，為后續(xù)作進(jìn)一步的機(jī)制研究提供科學(xué)數(shù)據(jù)。