滑子菇新品種液體培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)

王廣耀 李雪 李盛旻 李鳳林 于匯 王慧英

【摘? ?要】 該試驗(yàn)通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，探討不同碳源、氮源對(duì)滑子菇新品種液體培養(yǎng)基菌絲生物量的影響。結(jié)果得出滑子菇新品種的最佳液體培養(yǎng)基是玉米粉3.0%、葡萄糖2.5%、麩皮3.5%、黃豆粉2.7%。

【關(guān)鍵詞】 滑子菇;碳源;氮源;菌絲生物量;液體發(fā)酵

[Abstract] Through single factor test and orthogonal test， the effects of different carbon and nitrogen sources on the mycelia biomass in liquid medium of a new mushroom variety were investigated. Results the best liquid medium for the new mushroom variety was corn flour 3.0%， glucose 2.5%， bran 3.5% and soybean flour 2.7%.

[Key words] shiitake mushroom; carbon source; nitrogen source; mycelium biomass; liquid fermentation

滑子菇（Pholiota namekio），屬于真菌界、真菌門、擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目[1]，又稱珍珠菇、光帽鱗傘，在日本被叫做納美菇?；庸饺斯ぴ耘嗍加谌毡?，1977年引入我國(guó)[2]。近年來(lái)， 在吉林省有近萬(wàn)滑子菇的栽培戶，但是產(chǎn)量不穩(wěn)定、質(zhì)量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，主要表現(xiàn)在菌種老化、抗性差、產(chǎn)量低，因此，篩選出適宜當(dāng)?shù)卦耘嗟男缕贩N非常關(guān)鍵。該實(shí)驗(yàn)主要是針對(duì)液體培養(yǎng)基所需營(yíng)養(yǎng)源進(jìn)行篩選，篩選出最佳的碳、氮源培養(yǎng)基組合，并應(yīng)用于生產(chǎn)，為滑子菇液體發(fā)酵提供理論依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院食用菌實(shí)驗(yàn)室、吉林市匯豐科技有限公司進(jìn)行?；庸狡贩N由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院食用菌實(shí)驗(yàn)室提供。所用到的試劑和材料還有瓊脂、酵母膏、可溶性淀粉（98%）、硝酸銨（99%）、蔗糖（99.9%）、葡萄糖（99.9%）、蛋白胨（86%）、麥芽糖（99.9%）、麩皮、玉米粉、黃豆粉，均由吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院食用菌實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2? 培養(yǎng)基配方

斜面試管培養(yǎng)基配方：馬鈴薯20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、K2HPO4 0.1%、MgSO4 0.1%、瓊脂2%、水100%、pH值取自然。與常規(guī)配制方法相同;液體種子初培養(yǎng)基配方：在斜面試管培養(yǎng)基配方的基礎(chǔ)上去掉2%的瓊脂，其它相同;碳源供試培養(yǎng)基：馬鈴薯20%，水100%，再分別加入葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麥芽糖和可溶性淀粉;氮源供試培養(yǎng)基：馬鈴薯20%，葡萄糖2%，水100%，再分別加入黃豆粉、蛋白胨、酵母膏、硝酸銨、麩皮，馬鈴薯、玉米粉、黃豆粉、麥麩均煮汁，雙層紗布過濾。

1.3? 實(shí)驗(yàn)方法

菌種活化：在無(wú)菌操作臺(tái)下切取黃豆粒大小菌種，接種到斜面試管培養(yǎng)基中央，然后放到25℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)菌絲長(zhǎng)滿斜面。

液體種子初培養(yǎng)：在無(wú)菌操作臺(tái)下進(jìn)行接種，每支試管菌種接2瓶，將培養(yǎng)箱調(diào)到25 ℃搖床中靜置48 h后，檢察瓶中菌種是否有雜菌，如無(wú)雜菌，在160r/min、溫度為25 ℃條件下培養(yǎng)8d，獲得滑子菇菌液。

碳、氮源液體供試培養(yǎng)：在無(wú)菌操作臺(tái)下進(jìn)行接種，按5%的接種量進(jìn)行接種，分別接到裝有碳、氮源不同液體培養(yǎng)基的三角瓶中，放在25℃的搖床中，培養(yǎng)6d。

菌絲干重的測(cè)定：培養(yǎng)好的菌液，經(jīng)40目過篩，將處理好的菌絲體用蒸餾水沖洗3次后，置于75℃干燥箱內(nèi)烘干直至恒重，用電子天平準(zhǔn)確稱量菌絲干重。

1.4? 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

碳源供試因素分別為葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麥芽糖和可溶性淀粉，氮源供試因素分別為黃豆粉、蛋白胨、酵母膏、硝酸銨、麩皮，試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1，每個(gè)水平重復(fù)三次。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同碳源對(duì)滑子菇菌絲干重的影響 見圖1。

由圖1可知，5種碳源隨著水平因素量的增加菌絲干重也隨著增加，滑子菇菌絲對(duì)葡萄糖的利用效果最好，在取水平2.5%時(shí)菌絲干重達(dá)到2.991g/100mL，其次是蔗糖、玉米粉、麥芽糖和可溶性淀粉。從碳源的單糖、二糖、多糖來(lái)考慮，選擇小分子單糖，從成本方面來(lái)考慮，選擇大分子多糖玉米粉，所以確定先選擇碳源葡萄糖和玉米粉來(lái)進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.2? 不同氮源對(duì)滑子菇菌絲干重的影響 見圖2。

由圖2可知，隨著黃豆粉、硝酸銨、麩皮3種不同水平因素量的增加菌絲干重隨著增加，而隨著蛋白胨、酵母膏兩種因素量的增加菌絲干重隨著減少?；庸骄z對(duì)氮源的利用效果最好是黃豆粉，其次是麩皮。從菌絲干重和成本、經(jīng)濟(jì)效益方面考慮，確定選擇黃豆粉和麩皮作為氮源進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.3? 碳、氮源正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇碳源的葡萄糖、玉米粉和氮源的黃豆粉、麩皮進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)重復(fù)3次，取其平均值，最終根據(jù)測(cè)得的干重計(jì)算其平均值。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)可知，極差次序依次為葡萄糖>麩皮>黃豆粉>玉米粉，由此分析出極差越小，起的作用就越小，說明影響菌絲干重最大的是葡萄糖，其次是麩皮，影響最小的是黃豆粉和玉米粉。

3? 結(jié)論與討論

經(jīng)過單因素試驗(yàn)，結(jié)果選擇碳源是葡萄糖2.5%、玉米粉3.0%，氮源則是麩皮3.5%、黃豆粉2.7%。通過正交試驗(yàn)，得到滑子菇新品種的最佳液體培養(yǎng)基是玉米粉3.0%，葡萄糖2.5%，麩皮3.5%，黃豆粉2.7%。對(duì)于不同的碳源，不論大、小分子碳源，都能被滑子菇菌絲利用上，從生產(chǎn)實(shí)際成本出發(fā)，選擇既能降低成本又能提高菌絲量的碳源。在氮源的選擇上，發(fā)現(xiàn)它在滑子菇發(fā)酵過程中起到了相當(dāng)高的作用，而且氮源作為原材料，為食用菌細(xì)胞合成蛋白質(zhì)和核酸提供了能量。當(dāng)滑子菇液體培養(yǎng)基中加入硝酸銨時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度明顯變慢，但加入麥麩、黃豆粉、蛋白胨、酵母膏時(shí)，菌絲卻能生長(zhǎng)的很好，說明無(wú)機(jī)氮對(duì)滑子菇的作用不大。從經(jīng)濟(jì)方面考慮，麥麩、黃豆粉作為農(nóng)產(chǎn)品具有方便采購(gòu)且成本低等特點(diǎn)，因此，選擇麥麩、黃豆粉作為氮源。

（編輯：李曉琳）