頂空-氣相色譜法測(cè)定鹽酸貝尼地平中4種溶劑殘留量

章少勇，許國(guó)峰，吳永江

(1.浙江大學(xué) 藥學(xué)院，杭州310058; 2.紹興民生醫(yī)藥股份有限公司，紹興312071)

鹽酸貝尼地平化學(xué)名為(4RS)-2，6-二甲基-4-(3-硝 基 苯 基)-1，4-二 氫-3，5-吡 啶 二 甲 酸-3-[(3RS)-1-苯甲基-3-哌啶基]酯-5-甲酯鹽酸鹽。鹽酸貝尼地平是日本協(xié)和發(fā)酵工業(yè)公司在70年代后期為改善硝苯地平副作用而合成、篩選得到的一種新型持續(xù)性鈣拮抗劑[1-2]。鹽酸貝尼地平片目前在國(guó)內(nèi)外均有上市。在鹽酸貝尼地平的合成過程中，可能發(fā)生乙醇、丙酮、二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等溶劑的潛在殘留，殘留的溶劑具有一定的毒性，會(huì)產(chǎn)生用藥安全風(fēng)險(xiǎn)。

目前，針對(duì)鹽酸貝尼地平中殘留溶劑的測(cè)定，尚無公開的文獻(xiàn)與專利記載，已有的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[3]亦無殘留溶劑檢查項(xiàng)。為控制鹽酸貝尼地平原料藥的質(zhì)量，本工作根據(jù)其制備工藝，按照《藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求》原則[4]和2015版中國(guó)藥典通則[5]中對(duì)于殘留溶劑的控制要求，對(duì)本品中可能殘留的乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF 等進(jìn)行測(cè)定。由于鹽酸貝尼地平為鹽酸鹽類化合物，不適宜進(jìn)入氣相色譜儀，而其潛在的殘留溶劑可通過揮發(fā)進(jìn)入氣相色譜儀被檢測(cè)。因此，本工作采用頂空-氣相色譜法測(cè)定鹽酸貝尼地平中殘留的乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF的殘留量。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

島津GC2010 型氣相色譜儀，配島津工作站，XS105型電子天平。

對(duì)照品儲(chǔ)備溶液:稱取乙醇620 mg、丙酮620 mg、二氯甲烷75 mg、DMF 110 mg，用二甲基亞砜(DMSO)溶解并轉(zhuǎn)移至100 m L 容量瓶中，用DMSO 稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為6.2，6.2，0.75，1.10 g·L－1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

混合對(duì)照品溶液:分別量取2 m L 各對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，置于同一預(yù)先裝有適量DMSO 的50 m L容量瓶中，用DMSO 稀釋至刻度，搖勻，即得乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF 的質(zhì)量濃度分別為0.248，0.248，0.03，0.044 g·L－1的混合對(duì)照品溶液。以此溶液作為100%混合對(duì)照品溶液，分別量取1，2.5 m L各對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，同時(shí)配制50%，125%混合對(duì)照品溶液。

乙醇、丙酮、二氯甲烷、DMF 和DMSO 均為分析純，鹽酸貝尼地平原料藥。

1.2 儀器工作條件

HP-5 毛 細(xì) 管 色 譜 柱(0.53 m ×30 mm，1.5μm);氫火焰離子化檢測(cè)器(FID);進(jìn)樣口溫度為250 ℃，檢測(cè)器溫度為250 ℃;載氣為氮?dú)?分流進(jìn)樣，分流比為10∶1。柱升溫程序:初始柱溫為40 ℃，保 持4 min;以20 ℃·min－1速 率 升 溫 至220 ℃，保持2 min。頂空瓶區(qū)域溫度80℃;保溫時(shí)間30 min，低速振蕩;定量環(huán)溫度120 ℃，傳輸線溫度130 ℃;定量管體積1 m L。

1.3 試驗(yàn)方法

稱取鹽酸貝尼地平250 mg置于20 m L頂空瓶中，加DMSO 5 m L 溶解，密封，作為供試品溶液。按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜行為

分別取空白溶液、混合對(duì)照品溶液各5 m L，置于20 m L 頂空瓶中，封裝，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。另取2 份鹽酸貝尼地平各約250 mg，置于20 m L頂空瓶中，分別加入空白溶液和對(duì)照品溶液5 m L，封裝，搖勻，得到的溶液分別記作供試品溶液和加標(biāo)供試品溶液，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。記錄各溶劑峰的保留時(shí)間并計(jì)算其與相鄰峰的分離度，各溶液的色譜圖見圖1。

圖1 色譜圖Fig.1 Chromatograms

由圖1可知:空白溶劑DMSO 不干擾4種溶劑的檢測(cè)，空白溶劑峰、各溶劑峰之間分離度均大于1.5，且樣品對(duì)各溶劑的測(cè)定均無干擾。

2.2 提取溶劑和柱溫的選擇

由于鹽酸貝尼地平的水溶性很差，故采用有機(jī)溶劑DMSO 將其溶解，避免由于樣品不溶解被包裹在小顆粒中或吸附在小顆粒表面而造成結(jié)果重復(fù)性較差;由于乙醇、丙酮、二氯甲烷均為極性相似的低沸點(diǎn)溶劑(沸點(diǎn)分別是78，56，40℃)，參照中國(guó)藥典2015年版通則0861 第二法，調(diào)整色譜柱初始柱溫為40 ℃，并 保 持4 min 后(上 述3 種 成 分 均 在4 min內(nèi)出峰，DMF 與上述3 種溶劑相差較大，若保溫時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)增加不必要的分析時(shí)間)再進(jìn)行升溫，從而保證了三者之間色譜峰的良好分離。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，按試驗(yàn)方法進(jìn)行分析。以乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，與其對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，各溶劑的線性參數(shù)見表1。

表1 線性參數(shù)Tab.1 Linearity parameters

由表1可知:乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF 的質(zhì)量濃度均在一定范圍內(nèi)呈線性，其相關(guān)系數(shù)均大于0.998 0。

2.4 檢出限與測(cè)定下限

取各對(duì)照品溶液，用DMSO 逐漸稀釋，取5 m L置于20 m L頂空瓶中，封裝，頂空進(jìn)樣，記錄各主峰的峰高，以3倍信噪比計(jì)算方法的檢出限(3S/N)，以10倍信噪比計(jì)算方法的測(cè)定下限(10S/N)，結(jié)果見表2。

2.5 精密度試驗(yàn)

移取混合對(duì)照品溶液5 m L 共6份，分別置于6個(gè)20 m L頂空瓶中，封裝;取上述6份溶液頂空進(jìn)樣，記錄所得各溶劑的峰面積及理論板數(shù)，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見表3。

表2 檢出限與測(cè)定下限的結(jié)果Tab.2 Results of limits of detection and lower limits of determination

表3 精密試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)Tab.3 Results of test for precision(n＝6)

由表3可知:各溶劑的色譜峰面積RSD 均不大于10%，符合精密度的要求，且理論板數(shù)均在5 000以上。

2.6 回收試驗(yàn)

稱取已知?dú)埩羧軇┖康柠}酸貝尼地平供試品約250 mg，共9份，分別置于20 m L頂空瓶中，分別加入50%，100%，125%混合對(duì)照品溶液各5 m L溶解，封裝。每個(gè)加標(biāo)溶液平行制備3份。在儀器工作條件下測(cè)定，根據(jù)各有機(jī)溶劑峰面積計(jì)算各溶劑的回收率，結(jié)果見表4。

結(jié) 果 表 明:4 種 溶 劑 的 回 收 率 為98.2% ～118%，說明測(cè)定值是準(zhǔn)確和可靠的。

2.7 樣品分析

取3 批樣品按試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，3批樣品均未檢出乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF。

表4 回收試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of test for recovery %

本工作建立了頂空-氣相色譜法測(cè)定鹽酸貝尼地平中溶劑殘留量的方法。該方法對(duì)乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF的區(qū)分能力較強(qiáng)，具有靈敏度高，準(zhǔn)確度好等特點(diǎn)，能有效地測(cè)定鹽酸貝尼地平樣品中潛在殘留的乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF。