雞糞除臭菌的分離篩選及除臭效果分析

李 玥，李成成，李 靜，張瀟月，張紫薇，黃議漫，劉 浩，羅 鴻，張小平，趙 珂*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)資源學(xué)院，成都 611130；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，北京 100094；3.旺蒼縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 廣元628200；4.瀘州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展促進(jìn)中心，四川 瀘州 646000）

隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，大量畜禽排泄廢物已經(jīng)成為主要的環(huán)境污染源[1-2]。畜禽養(yǎng)殖業(yè)所產(chǎn)生的大量固體廢棄物和廢水，已經(jīng)對(duì)我們?nèi)粘５纳a(chǎn)生活造成了不可忽視的影響。目前畜禽排泄物處理的方法主要有好氧堆肥發(fā)酵、厭氧消化法和烘干法等，處理后的畜禽排泄物惡臭氣體排放量明顯減少，并且大部分成為肥料和飼料資源。但由于畜禽排泄物成分復(fù)雜、處理周期長(zhǎng)，在處理過(guò)程中也會(huì)產(chǎn)生大量的臭氣，主要成分有氨、硫化物、胺類和一些低級(jí)脂肪酸類等化學(xué)物質(zhì)[3]，其中濃度最高、影響最大的是氨和硫化氫，這兩種氣體進(jìn)入大氣后不僅會(huì)引起一系列環(huán)境問(wèn)題，同時(shí)產(chǎn)生的刺激性氣味也會(huì)對(duì)人和家畜的健康造成極大危害[4-6]。

在各種畜禽排泄物中，雞糞由于其強(qiáng)烈的惡臭而比豬糞、牛糞等危害更大、更難處理。未腐熟的雞糞或在腐熟過(guò)程中產(chǎn)生的惡臭氣味，是由糞便里的甲硫醇、硫化氫、氨、吲哚和丙烯醛等10 多種物質(zhì)混合造成的[7]。雞糞產(chǎn)生的強(qiáng)烈惡臭不僅污染環(huán)境，危害人畜健康，也嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量，因而引起公眾的極大關(guān)注。因此，減少雞糞中惡臭物質(zhì)的釋放對(duì)解決雞糞污染尤為重要。

研究表明，采用化學(xué)、物理及生物方法處理臭氣有一定效果，但化學(xué)和物理方法除臭可能造成二次污染，且處理費(fèi)用頗高，大面積使用效果不理想，多見(jiàn)于化工業(yè)。微生物除臭的生物處理方法具有無(wú)二次污染、處理方式溫和、能耗低等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于畜禽排泄物的無(wú)害化處理，且處理效果顯著[2，8]，在國(guó)外已有較多的研究和應(yīng)用[9]。因此，以微生物為主的生物處理方法已成為固廢資源化的重要途徑，而微生物除臭法也成為堆肥除臭的有效方法和研究熱點(diǎn)。然而，受環(huán)境因素、畜禽排泄物來(lái)源及微生物特異性等因素影響，單一微生物很難高效除臭。研究表明，多種除臭菌混合培養(yǎng)后，各菌株相互協(xié)同作用更有利于臭氣的分解，增強(qiáng)除臭效果[10-11]。而目前我國(guó)有關(guān)選育和復(fù)配微生物除臭劑的研究報(bào)道還較少[12-13]。因此，本研究以雞糞堆肥為材料，從中分離篩選出具有除臭效率高、生長(zhǎng)能力強(qiáng)的高效除臭菌株，并構(gòu)建復(fù)合菌系，旨在為畜禽糞便特別是雞糞的資源化和無(wú)害化處理提供菌種資源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源

采集發(fā)酵前期、中期、后期3 個(gè)階段的雞糞堆肥樣品裝于無(wú)菌采樣袋中，封口并貼上標(biāo)簽。將裝有樣品的采樣袋置于冰盒中，帶回實(shí)驗(yàn)室置于4 ℃冰箱備用。

1.1.2 培養(yǎng)基

（1）分離培養(yǎng)基。含氮富集液體培養(yǎng)基N1[5]：蔗糖 25 g，NH4NO32 g，KH2PO42 g，NaCl 2 g，F(xiàn)eSO40.1 g，CaCl20.5 g，ZnSO40.05 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，蒸餾水950 mL，滅菌后的雞糞浸出液50 mL，pH 7.5～8.0。

（2）純化保種培養(yǎng)基。LB培養(yǎng)基[14]。

（3）篩選培養(yǎng)基。剛果紅培養(yǎng)基[15]：CMC-Na 2 g，K2HPO40.5 g，MgSO4·7H2O 0.25 g，（NH4）2SO41 g，剛果紅0.1 g，瓊脂18～20 g，蒸餾水1000 mL；產(chǎn)氣檢測(cè)培養(yǎng)基L1：蔗糖2 g，NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g，瓊脂18～20 g，蒸餾水1000 mL，pH 6.5～7.0。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

稱取5 g 新鮮樣品置于帶有玻璃珠且裝有45 mL無(wú)菌水的三角瓶中，放于28 ℃恒溫?fù)u床室振蕩30 min 后，取 1 mL 接入 50 mL 富氮液體培養(yǎng)基 N1 中進(jìn)行富集培養(yǎng)，3 d 后再轉(zhuǎn)接到新鮮的N1 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，連續(xù)轉(zhuǎn)接3次。

1.2.2 分離純化菌種

將新鮮樣品和富集后的溶液進(jìn)行梯度稀釋，分別取稀釋濃度為 10-4、10-5、10-6的培養(yǎng)液 0.1 mL 涂布于LB 培養(yǎng)基上，于28 ℃和45 ℃的恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，待菌長(zhǎng)出后挑取單個(gè)菌落在LB 培養(yǎng)基上純化保種，于4 ℃冰箱保藏。

1.2.3 除臭微生物的初篩

（1）產(chǎn)氣篩選

將純化后的菌株接種在產(chǎn)氣檢測(cè)培養(yǎng)基L1 上，放入30 ℃恒溫培養(yǎng)箱擴(kuò)培，待菌長(zhǎng)出后，小心將濕潤(rùn)的紅色石蕊試紙、醋酸鉛試紙插入培養(yǎng)皿內(nèi)讓其貼在皿蓋，3～5 min后觀察試紙是否發(fā)生顏色變化，菌株生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生氨紅色石蕊試紙將變?yōu)樗{(lán)色，產(chǎn)生硫化氫氣體醋酸鉛試紙將變?yōu)楹谏玔8]。

（2）除氨檢測(cè)

將不產(chǎn)生氨和硫化氫氣體的菌株在液體培養(yǎng)基中擴(kuò)培3 d 制成菌懸液，取10 mL 接入100 g 新鮮雞糞中；將此雞糞放入2 L 的密閉塑料罐，并在罐中放入1 個(gè)裝有30 mL 1 mol·L-1稀硫酸溶液的小燒杯，以此吸收雞糞產(chǎn)生的氨；空白對(duì)照組是將菌懸液換為10 mL 無(wú)菌水，每處理分別設(shè)置3 個(gè)平行。將此裝置放置在25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20 d 后，用凱氏定氮法測(cè)定吸收液中吸收氨的量[1，16]。按下述公式計(jì)算其除氨率。

式中：CNH3空為空白組氨的含量，CNH3處為處理組氨的含量，mg·L-1；c為硫酸溶液摩爾濃度，mol·L-1；v為消耗硫酸溶液的體積，mL；17為氨的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，g·mol-1；V為2%硼酸吸收液體積，mL。

（3）除硫化氫檢測(cè)

將上述除氨檢測(cè)中所用菌懸液，取10 mL 接入100 g新鮮雞糞中；將此雞糞放入2 L的不透光密閉塑料罐，并在罐中放入1個(gè)裝有30 mL 1 mol·L-1堿性鋅銨絡(luò)溶液的小燒杯，以此吸收雞糞產(chǎn)生的硫化氫氣體；空白對(duì)照組是將菌懸液換為10 mL 無(wú)菌水，每處理分別設(shè)置3 個(gè)平行。將此裝置放置在25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14 d后，用亞甲基藍(lán)分光光度法測(cè)定吸收液中硫化氫的含量[13]。按下述公式計(jì)算除硫化氫率。

式中：CH2S為空白組硫化氫的含量，CH2S處為處理組硫化氫的含量，mg·m-3；A為樣品顯色液吸光度；A0為空白溶液吸光度；BS為計(jì)算因子，斜率的倒數(shù)，μg·吸光度-1；VS換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，L。

1.2.4 除臭菌株的復(fù)篩

將上述初篩獲得的同時(shí)具有除氨和除硫化氫能力的菌株于LB 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)3 d。取10 mL 菌懸液接入裝有100 g新鮮雞糞的2 L塑料罐中，并將吸收液，即裝有30 mL 1 mol·L-1稀硫酸溶液的小燒杯和裝有30 mL 1 mol·L-1堿性鋅銨絡(luò)溶液的小燒杯同時(shí)放入塑料罐中，密封好后放置于25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后取出吸收液，同時(shí)放置新的吸收液，將取出的吸收液分別測(cè)定其吸收的氨或硫化氫氣體含量，連續(xù)測(cè)定 10 d[1，13]。

1.2.5 纖維素降解實(shí)驗(yàn)

將初篩獲得的效果較好的菌株接種于剛果紅培養(yǎng)基中，28 ℃恒溫培養(yǎng)48 h 后觀察其菌落周圍是否產(chǎn)生水解圈，并測(cè)量水解圈的直徑[15]，同時(shí)參照李靜等[15]的實(shí)驗(yàn)方法定量測(cè)定各菌株的羧甲基纖維素酶（CMCase）活性，設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.2.6 除臭菌株系統(tǒng)發(fā)育分析

對(duì)篩選出具有除臭效果的菌株進(jìn)行DNA 提取，采用 16S rRNA 基因序列通用引物 Eubac 27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和Eubac 1492R（5′-CGGTTACCTTGTTACGACTT-3′）[17-18]對(duì) DNA 進(jìn) 行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物送往上海生工生物有限公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果通過(guò)Blast 軟件與Genbank 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)Blast軟件的結(jié)果，選擇與目標(biāo)菌株同源性較高的菌株的16S rRNA 序列，用MEGA 6.0 軟件通過(guò)鄰近法構(gòu)建目標(biāo)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，確定其種屬。

1.2.7 拮抗實(shí)驗(yàn)

將篩選出具有除臭效果的菌株分別均勻地涂布于固體培養(yǎng)基上，待菌長(zhǎng)滿平板后，用5 mm的無(wú)菌打孔器取下菌餅，將菌餅倒置于剛均勻涂布有另一菌液的平板上，28 ℃恒溫培養(yǎng)72 h，待另一種菌完全長(zhǎng)出后觀察是否有拮抗現(xiàn)象[19]。

1.2.8 除臭菌系的構(gòu)建

根據(jù)各菌株的除臭效果，結(jié)合拮抗實(shí)驗(yàn)結(jié)果，構(gòu)建復(fù)合菌系。將各組合菌株的菌懸液按照體積比1∶1混合后，按上述除臭檢測(cè)步驟測(cè)定各組合菌株的除臭能力，篩選出除臭效果好的復(fù)合菌系。

1.2.9 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò) SPSS 20.0 軟件（SPSS Inc.，Chica?go，US）進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株的分離與產(chǎn)氣篩選

本研究從不同處理時(shí)期的雞糞堆肥中共分離獲得200 株菌株，其中細(xì)菌146 株，真菌54 株。試紙檢測(cè)結(jié)果表明，200株菌僅有15株不產(chǎn)生氨和硫化氫氣體，其中細(xì)菌10 株（MS03、MS07、MS11、MS42、MS51、MS60、MS61、MS82、MS88 和 MS92），真菌 5 株（Z14、Z24、Z26、Z35和Z38）。

2.2 除臭檢測(cè)

對(duì)篩選獲得的不產(chǎn)生惡臭氣體的15 株菌進(jìn)行除氨、除硫化氫能力的檢測(cè)。結(jié)果顯示除菌株MS88 以外，其余14株菌對(duì)氨或硫化氫氣體均有一定的去除能力，但各菌株對(duì)兩種惡臭氣體的去除效果有較大差異，除臭率表現(xiàn)為除硫化氫率大于除氨率，而兩種氣體的減少量則表現(xiàn)為氨氣遠(yuǎn)高于硫化氫氣體（表1）。

2.3 除臭菌復(fù)篩

為了進(jìn)一步明確除臭菌株的除臭能力，本研究連續(xù)10 d 對(duì)初篩中除臭效果較好的5 株菌（MS03、MS07、MS11、MS42、MS82）分別進(jìn)行氨及硫化氫釋放量的測(cè)定。結(jié)果表明，各菌株氨和硫化氫釋放量均明顯低于CK。說(shuō)明這5 株菌均有較好抑制雞糞在發(fā)酵過(guò)程中釋放惡臭氣體的能力，但各菌株在雞糞發(fā)酵過(guò)程抑制氨和硫化氫釋放作用中存在差異（圖1）。菌株MS03 和菌株MS07 對(duì)氨和硫化氫的抑制量表現(xiàn)出與初篩較為一致的結(jié)果，這兩株菌對(duì)氨和硫化氫的抑制量均較高，并且在接種第6 d 后氨和硫化氫的釋放量均呈現(xiàn)出明顯下降后趨于穩(wěn)定的狀態(tài)，菌株MS11、MS42 和MS82 雖然對(duì)氨和硫化氫的產(chǎn)生有明顯抑制作用但效果不穩(wěn)定，如菌株MS42 和MS82 在雞糞發(fā)酵過(guò)程中抑制氨和硫化氫釋放量均呈現(xiàn)出了先下降后升高的趨勢(shì)，而菌株MS11 在雞糞發(fā)酵過(guò)程中抑制氨和硫化氫釋放量總體是呈下降趨勢(shì)，但存在較大波動(dòng)。結(jié)果表明,菌株MS03 和MS07 對(duì)氨和硫化氫的釋放均有顯著的抑制效果。

表1 菌株除臭結(jié)果Table 1 Deodorization result of strains

2.4 拮抗試驗(yàn)

選取初篩表現(xiàn)較好的菌株MS03、MS07、MS11、MS42 和MS82 進(jìn)行拮抗實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明菌株MS82 與菌株 MS42、MS07 之間有拮抗作用，MS11 與 MS42、MS07相互拮抗，其余菌株間互不拮抗（表2）。

圖1 除臭效果測(cè)定Figure 1 Deodorization effect

表2 菌株間的拮抗試驗(yàn)Table 2 Antagonistic experiment of strains

2.5 復(fù)合菌系構(gòu)建及除臭能力檢測(cè)

因?yàn)椴煌陮?duì)兩種惡臭氣體有不同的除臭效果，據(jù)此將相互不拮抗的菌株兩兩組合，構(gòu)建出5組復(fù)合菌系，分別為：C1（MS03+MS42）、C2（MS03+MS07）、C3（MS03+MS11）、C4（MS03+MS82）、C5（MS11+MS82）。由圖2可以看出，5個(gè)復(fù)合菌系均表現(xiàn)出一定的除臭能力，但不同組合之間，除臭能力存在較大差異，其中C2 和C4 組去除兩種惡臭氣體的能力顯著高于其他組，去除率均高于60%，綜合除臭效果極顯著高于其他組合（P＜0.01）。但值得注意的是，復(fù)合菌系如C1 和C3 組雖然也表現(xiàn)出一定的除臭能力，但除臭率與相應(yīng)單菌株相比并無(wú)明顯差異，除臭效果并無(wú)明顯變化，甚至C3組除臭率顯著低于其單一菌株。

2.6 纖維素降解結(jié)果

剛果紅平板篩選結(jié)果表明，除菌株M42 外，其余4 株菌均能在剛果紅培養(yǎng)基上形成水解圈，同時(shí)也具有產(chǎn)生羧甲基纖維素酶的能力，而水解圈大小與其所產(chǎn)生的CMCase活力之間并無(wú)明顯的相關(guān)性（表3）。

2.7 除臭菌株系統(tǒng)發(fā)育分析

對(duì)除臭效果較好的5 株菌進(jìn)行16S rRNA 測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果通過(guò)Blast 軟件與Genbank 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，根據(jù)Blast軟件的結(jié)果，用MEGA6.0軟件通過(guò)鄰近法構(gòu)建目標(biāo)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹（圖3）。鑒定結(jié)果如下：MS03為芽孢桿菌屬（Bacillussp.），MS07為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis），MS11 為耐寒短桿菌（Brevibacterium frigoritolerans），MS42為木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus），MS82 為變異棒桿菌（Coryne?bacterium variabile）。

表3 纖維素降解結(jié)果Table 3 The result of cellulose degradation

3 討論

畜禽排泄物和堆肥中營(yíng)養(yǎng)豐富且存在大量的微生物，雖然大部分微生物都具有產(chǎn)生惡臭氣體的能力，但惡臭的環(huán)境中可能孕育出可以除去惡臭氣體的微生物，因此可以將此類微生物分離出來(lái)作為篩選除臭菌的潛在菌種。本研究從不同處理時(shí)期的雞糞堆肥中分離獲得200株菌，通過(guò)產(chǎn)氣初篩獲得15株具有除臭潛力的菌株，進(jìn)一步檢測(cè)這些菌株的除氨率和除硫化氫率后，發(fā)現(xiàn)有14 株具有除臭效果，除臭菌獲得率為7%。相較于顧文杰[13]、簡(jiǎn)保權(quán)等[20]、高華等[21]、魏良[22]所采用的硼酸吸收法和鋅銨絡(luò)鹽比色法篩選除臭菌，本試驗(yàn)采用濕潤(rùn)的紅色石蕊試紙和醋酸鉛試紙法對(duì)菌株進(jìn)行產(chǎn)氣初篩，方法簡(jiǎn)單、便捷，能大幅減少初篩時(shí)耗費(fèi)的時(shí)間和精力，提高了定量檢測(cè)時(shí)獲得除臭菌的機(jī)會(huì)。然而，由于大部分微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中或多或少會(huì)有一定量氨或硫化氫氣體產(chǎn)生，因此本研究所采用的試紙初篩方法在篩選過(guò)程中會(huì)淘汰一些具有除臭能力的微生物，導(dǎo)致篩選所獲得的除臭菌數(shù)量較少。通過(guò)復(fù)篩獲得5 株具有較好除臭效果的菌株，對(duì)菌株16S rRNA 序列分析，確定這5 株除臭菌分屬于芽孢桿菌屬（Bacillussp.）、貝萊斯芽孢桿菌（Ba?cillus velezensis）、耐寒短桿菌（Brevibacterium frigoritol?erans）、木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus）、變異棒桿菌（Corynebacterium variabile）。已有研究表明芽孢桿菌屬在惡臭氣體處理中具有重要作用，如芽孢桿菌屬的枯草芽孢桿菌有很強(qiáng)的生物同化作用，能有效降低糞便中產(chǎn)生的氨、吲哚等有害氣體濃度，減輕糞便臭味[23]。楊柳等[24]從豬糞堆肥以及土壤中分離獲得了5 株分屬于芽孢桿菌屬和短桿菌屬（Brevibacteriumsp.）的高效除臭菌株。此外，本研究結(jié)果表明除菌株MS42 外，其余4 株菌還有很強(qiáng)的纖維素降解能力。楊偉平等[25]從鵝糞便中篩選出具有纖維素分解能力的芽孢桿菌屬，其可用作動(dòng)物微生態(tài)添加劑和除臭劑。黃旺洲[26]將高效纖維素分解菌用于豬糞和牛糞的堆肥發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)糞便中的粗纖維和有機(jī)質(zhì)被有力地分解和降解，從而抑制了糞便中的氨和硫化氫氣體的釋放。徐杰等[27]從土壤、秸稈、牛糞等樣品中分離得到3 株具有木質(zhì)纖維素降解能力的細(xì)菌，其具有使堆肥快速升溫和有效除臭的潛力，經(jīng)鑒定均為芽孢桿菌屬。由此可見(jiàn)，芽孢桿菌屬和短桿菌屬不僅可以通過(guò)生物同化作用有效減輕糞便臭味，同時(shí)還可以通過(guò)對(duì)雞糞中纖維素的降解，提高易利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的C/N 進(jìn)而減少氨的釋放，在畜禽糞便除臭方面具有良好的應(yīng)用前景。

圖2 單菌與復(fù)合菌系除臭率Figure 2 Deodorization rate of single bacteria and complex microbial system

圖3 除臭菌16S rRNA序列系統(tǒng)發(fā)育樹Figure 3 Phylogenetic tree of 16S rRNA of deodorizing strains

研究表明除臭是多種微生物共同作用的結(jié)果，復(fù)合菌系的除臭效果要優(yōu)于單一菌株。顧文杰[13]的研究表明，在相同的培養(yǎng)時(shí)間下，復(fù)合菌系除臭效果要優(yōu)于單株菌的效果。廖瀚峰等[28]將兩種能降解纖維素的除臭菌混合培養(yǎng)后，除臭效果好于單株菌。趙晨曦等[2]也同樣是將篩選出的單株除臭菌進(jìn)行混合培養(yǎng)，然后應(yīng)用于雞糞發(fā)酵處理，取得了滿意的雞糞無(wú)害化處理除臭效果。本研究選取互不拮抗的除臭菌株兩兩組合，構(gòu)建5組復(fù)合菌系，進(jìn)行除臭檢測(cè)，C2和C4 組對(duì)兩種惡臭氣體的去除率均高于60%，其中對(duì)硫化氫的去除率均高于70%，綜合除臭效果顯著高于其他組合，也顯著高于歐亞鈴[8]、魏良[22]篩選的雞糞除臭菌的除臭效果。這是由于雞糞成分復(fù)雜，其本身就有許多微生物，微生物間相互關(guān)系也較為復(fù)雜，改變一種微生物的數(shù)量都可能引起微生物群落的改變，而將除臭菌組合后添加入雞糞可能更易對(duì)雞糞中的微生物菌群結(jié)構(gòu)造成影響，有利于除臭菌成為優(yōu)勢(shì)菌群并發(fā)揮相應(yīng)功能，從而達(dá)到提升除臭率的目的。同時(shí)，雞糞中的惡臭氣體屬于多種臭氣的混合物，單一微生物很難將臭氣全部除去。因此，將具有除臭效果的優(yōu)良菌株構(gòu)建復(fù)合菌系處理雞糞，對(duì)減少惡臭氣體的排放，減少氮素?fù)p失，提升堆肥的質(zhì)量具有廣闊的應(yīng)用前景。但值得注意的是，并不是所有復(fù)合菌系的除臭效果都高于單菌株，如組合C1和C3雖然表現(xiàn)出一定的除臭能力，但除臭率與相應(yīng)單菌株相比并無(wú)明顯差異，甚至C3組的除臭率顯著低于其單一菌株，雖然構(gòu)建這兩個(gè)復(fù)合菌系的各菌株其除臭效果并不差，為什么會(huì)出現(xiàn)復(fù)合菌系除臭效果還低于單一菌株的現(xiàn)象呢？究其原因很有可能是組合菌株之間存在生存空間、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等因素的競(jìng)爭(zhēng)，導(dǎo)致各菌株均不能達(dá)到最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，從而無(wú)法達(dá)到很好的協(xié)同效果，影響了各菌株的除臭能力。因此，在構(gòu)建復(fù)合菌株體系的過(guò)程中，我們不僅要考慮單菌株的除臭能力，還要著重考慮復(fù)合后各菌株間除了具有拮抗作用外還可能存在的其他競(jìng)爭(zhēng)因素。

4 結(jié)論

（1）從以雞糞為原料的堆肥中分離出5 株具有除臭功能的菌株，對(duì)其進(jìn)行分子鑒定，菌株MS03為芽孢桿菌屬（Bacillussp.），菌株MS07 為貝萊斯芽孢桿菌（Bacillus velezensis），菌株MS11 為耐寒短桿菌（Brevi?bacterium frigoritolerans），菌株 MS42 為木糖葡萄球菌（Staphylococcus xylosus），菌株 MS82 為變異棒桿菌（Corynebacterium variabile）。

（2）5 株具有除臭功能的菌株對(duì)惡臭物質(zhì)成分氨和硫化氫氣體均有一定的去除能力，菌株MS03 和MS07對(duì)氨和硫化氫的釋放具有顯著的抑制效果。

（3）通過(guò)拮抗實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建的5 個(gè)復(fù)合菌系均表現(xiàn)出一定的除臭能力，C2 組合和C4 組合去除氨和硫化氫氣體的能力高于其他組合，在無(wú)害化處理雞糞方面具有較大的潛力和應(yīng)用前景。