沉默信息調(diào)節(jié)蛋白2在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)及臨床意義探討

侯志斌 劉春艷 郭新建

【摘 要】：目的探究沉默信息調(diào)節(jié)蛋白2（SIRT2）在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)及臨床意義。方法選取我院2018年6月～2019年6月收治的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者56例（肝轉(zhuǎn)移組織、腫瘤原發(fā)組織、正常黏膜組織），采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)上述標(biāo)本內(nèi)SIRT2表達(dá)，并分析結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者不同部位標(biāo)本中SIRT2表達(dá)水平、預(yù)后關(guān)系、細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果SIRT2在正常黏膜組織中陽性率50.00%高于肝轉(zhuǎn)移組織、腫瘤原發(fā)組織14.29%、3.57%（P<0.05）;結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中SIRT2低表達(dá)者生存時(shí)間短于SIRT2高表達(dá)者（P<0.05）;過表達(dá)SIRT2后結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480侵襲能力顯著減弱。結(jié)論SIRT2在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中呈低表達(dá)，影響結(jié)直腸癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力，對(duì)評(píng)估結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者預(yù)后具有一定臨床價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】：沉默信息調(diào)節(jié)蛋白2;結(jié)直腸癌;肝轉(zhuǎn)移;腫瘤原發(fā)組織

結(jié)直腸癌是臨床常見消化道惡性腫瘤，多發(fā)于中年以上人群，40～70歲人群最為多見，目前其發(fā)病率、病死率在消化道系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于食管癌、胃癌及原發(fā)性肝癌，可經(jīng)血液循環(huán)、淋巴循環(huán)及直接蔓延等途徑轉(zhuǎn)移至其他組織與臟器[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，晚期結(jié)直腸癌患者5年生存率僅19.0%，且多數(shù)死于肝轉(zhuǎn)移[2]。目前，結(jié)直腸癌發(fā)病及出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚不明確，因此尋找新靶點(diǎn)為診療提供新思路至關(guān)重要?；诖耍狙芯窟x取結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者56例，旨在探究SIRT2的表達(dá)及臨床意義，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，選取三家醫(yī)院2018年6月～2019年6月收治的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者56例，男31例，女25例;年齡42～85歲，平均年齡（61.58±8.54）歲;臨床分期：Ⅰ期16例、Ⅱ期18例、Ⅲ期12例，Ⅳ期10例;腫瘤分化程度：高分化14例，中分化22例，低分化20例;浸潤(rùn)深度：T2 12例，T3 35例，T4 9例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：N0 18例，N1 23例，N2 15例。

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理檢查，結(jié)合X射線鋇劑灌腸、纖維結(jié)腸鏡檢查確診為結(jié)直腸癌，伴發(fā)肝轉(zhuǎn)移;簽訂研究同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：其他惡性腫瘤者;近期接受相關(guān)治療者;其他消化系統(tǒng)病變者。

1.3 方法

1.3.1 免疫組織化學(xué)染色：采集肝轉(zhuǎn)移組織、腫瘤原發(fā)組織、癌旁正常黏膜組織，常規(guī)石蠟包埋，制備石蠟切片（厚度4μm），二甲苯脫蠟、洗滌及孵育等操作解除內(nèi)源性過氧化物酶活性，抗原修復(fù)及抗原封閉后，4℃一抗孵育及二抗孵育，行辣根過氧化物酶標(biāo)記，DAB顯色;蘇木精染核，并脫水透明處理，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.3.2 免疫組織化學(xué)染色半定量評(píng)價(jià)：陽性表達(dá)：細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)產(chǎn)生明顯棕黃色顆粒，根據(jù)視野中著色細(xì)胞百分比評(píng)估染色程度：染色細(xì)胞占5%為0分，染色細(xì)胞占6%～25%為1分，染色細(xì)胞占26%～50%為2分，染色細(xì)胞占51%～75%為3分，染色細(xì)胞占76%～100%為4分;最終得分=細(xì)胞質(zhì)陽性細(xì)胞所占百分比得分+細(xì)胞核陽性細(xì)胞所占百分比得分;評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：陰性：0分;弱陽性：1～4分;陽性：5～8分，其中陰性、弱陽性為陰性病例，陽性為陽性病例;由2名病理醫(yī)師在不知臨床數(shù)據(jù)情況下對(duì)染色情況進(jìn)行獨(dú)立評(píng)分。

1.4 觀察指標(biāo)。（1）結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者不同部位標(biāo)本中SIRT2表達(dá);（2）SIRT2陽性表達(dá)與預(yù)后關(guān)系;（3）SIRT2表達(dá)與結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲能力關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。SPSS24.0處理，計(jì)量資料（）表示，t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料n（%）表示，χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者不同部位標(biāo)本中SIRT2表達(dá)。SIRT2在正常黏膜組織中陽性率50.00%高于肝轉(zhuǎn)移組織、腫瘤原發(fā)組織14.29%、3.57%（P<0.05），見表1。

2.2 SIRT2陽性表達(dá)與預(yù)后關(guān)系。56例患者中失訪2例;54例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中SIRT2低表達(dá)者23例，SIRT2高表達(dá)者31例，SIRT2低表達(dá)者生存時(shí)間（41.47±5.12）個(gè)月短于SIRT2高表達(dá)者（61.87±6.24）個(gè)月（t=12.797，P<0.001）。

2.3 SIRT2表達(dá)與結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲能力關(guān)系。結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480轉(zhuǎn)染SIRT2蛋白質(zhì)粒后過表達(dá)SIRT2，通過Transwell侵襲試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)SIRT2后，細(xì)胞SW480侵襲能力減弱;過表達(dá)SIRT2后SW480細(xì)胞內(nèi)的mRNA（1.45±0.07）mmol/L高于試驗(yàn)前（0.98±0.05）mmol/L（t=40.886，P<0.001）。

3 討論

結(jié)直腸癌是胃腸道中常見惡性腫瘤，其形成涉及抑癌基因失活與癌基因激活的多基因調(diào)節(jié)復(fù)雜過程，而遺傳、慢性腸道疾病、環(huán)境等因素與其發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。目前，手術(shù)是治療結(jié)直腸癌主要方式，但70%以上患者確診時(shí)已發(fā)展至中晚期，錯(cuò)失手術(shù)時(shí)機(jī)。因此，研究早期診斷及評(píng)估預(yù)后方法，尋找新型治療靶點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移分子靶向治療已成為研究熱點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，SIRT2在正常黏膜組織中陽性率高于肝轉(zhuǎn)移組織、腫瘤原發(fā)組織，且SIRT2低表達(dá)者生存時(shí)間短于SIRT2高表達(dá)者（P<0.05），表明SIRT2低表達(dá)或缺失可能是結(jié)直腸癌患者進(jìn)展、轉(zhuǎn)移的重要促進(jìn)因素，可作為診斷結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移與評(píng)估預(yù)后指標(biāo)之一。SIRT2在腫瘤侵襲中充當(dāng)重要角色，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，SIRT2能和B-catenin產(chǎn)生相互作用，進(jìn)而抑制Wnt信號(hào)通路，且SIRT2缺失的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞及SW480細(xì)胞遷移與侵襲能力明顯增強(qiáng)。本研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)SIRT2后結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480侵襲能力顯著減弱，表明SIRT2可通過上調(diào)B-catenin，下調(diào)MMP2表達(dá)，抑制SW480細(xì)胞侵襲，進(jìn)一步證實(shí)SIRT2可能與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

綜上所述，SIRT2在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中呈低表達(dá)，影響結(jié)直腸癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力，對(duì)評(píng)估結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者預(yù)后具有一定臨床價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

譚學(xué)賢，楊嶽鑫，羅秋萍，等.四種錯(cuò)配修復(fù)基因蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2017，17（23）：4514-4517.

王搏，申占龍，葉穎江，等.結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中SIRT2蛋白的表達(dá)及其臨床意義[J].中華普通外科雜志，2019，34（1）：49-52.