鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠胃黏膜損傷及炎癥反應(yīng)的保護(hù)機(jī)制研究

張婉迎，白雪媛，楊俊杰，韓冰，張巍，王思明

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117）

鐵皮石斛為蘭科石斛屬植物鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）的干燥莖，為我國(guó)傳統(tǒng)名貴藥材，享有“中華九大仙草”之首的美譽(yù)，目前作為一種常見(jiàn)的保健品被人們廣泛接受[1]。古籍中多有其“厚腸胃”“平胃氣”“清胃熱”“健脾開(kāi)胃”等論述[2-3]，且諸多學(xué)者認(rèn)為鐵皮石斛多糖（polysaccharides from Dendrobium officinale，DOP）對(duì)胃黏膜具有保護(hù)作用[4-5]，但鐵皮石斛水溶性總蛋白保護(hù)胃黏膜損傷的作用卻未見(jiàn)報(bào)道。

阿司匹林作為非甾體抗炎藥（nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）的代表，近年來(lái)廣泛應(yīng)用于治療各種風(fēng)濕性疾病及心腦血管疾病的預(yù)防，是全球最暢銷(xiāo)的藥品之一。其所致的胃黏膜損傷、潰瘍及出血等急性胃黏膜病變（acute gastric mucosal lesion，AGmL）目前已引起人們的重視，其主要病理特征為急性應(yīng)激性病變，使機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)，是臨床上常見(jiàn)的急性胃黏膜病變之一[6]。目前已報(bào)道臨床上可用于保護(hù)胃黏膜的藥物有質(zhì)子泵抑制劑、鋁／鉍制劑、H2受體拮抗劑、胃泌素受體等，但往往存在療效不持久、停藥后容易復(fù)發(fā)、副作用多、價(jià)格昂貴等諸多缺點(diǎn)，這些缺點(diǎn)使得NSAIDs的臨床應(yīng)用受到了極大限制[7-11]。因此，積極研究并開(kāi)發(fā)純天然的中藥成分抑制阿司匹林所致的胃黏膜損傷對(duì)NSAIDs的臨床應(yīng)用有極大意義。

本文在課題組前期研究基礎(chǔ)上，采用鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)阿司匹林誘導(dǎo)的大鼠急性胃黏膜損傷進(jìn)行預(yù)保護(hù)，通過(guò)測(cè)定大鼠血清中前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-1β（（interleukin-1β，IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，胃組織中環(huán)氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA 的表達(dá)量以COX-2、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，Erk1/2）蛋白的表達(dá)量，證實(shí)鐵皮石斛水溶性總蛋白保護(hù)大鼠急性胃黏膜損傷及炎癥反應(yīng)的機(jī)制可能與增強(qiáng)PGE2等胃黏膜保護(hù)因子，清除氧自由基，降低炎癥反應(yīng)介質(zhì)并激活Erk1/2通路使胃黏膜細(xì)胞增殖有關(guān)，為日后進(jìn)一步開(kāi)發(fā)鐵皮石斛產(chǎn)品提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料

1.1 藥品及試劑

鐵皮石斛：婷美小屋；鐵皮石斛水溶性總蛋白：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥大健康創(chuàng)新中心提供；阿司匹林（純度＞99.0%）：Sigma公司；奧美拉唑（純度＞98%）、苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF）：索萊寶公司；大鼠血清 PGE2、IL-6、IL-1β、TNF-α、SOD、MDA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒：上海朗頓生物技術(shù)有限公司；RIPA裂解液：碧云天生物技術(shù)公司；Trizol：Thermo Fisher Scientific；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、寶生物染料法熒光定量試劑盒（SYBR）：日本TaKaRa公司；β-Actin抗體、COX-2 抗體：美國(guó) Bioworld 公司；Erk1/2、pErk1/2抗體：美國(guó)Cell Signaling Technology公司。

1.2 主要儀器

全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Infinite M200PR0）：瑞士帝肯公司；Mini Protean蛋白電泳儀（PowerPacTMHC）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（CFX connect）：美國(guó)伯樂(lè)公司；智能成像系統(tǒng)（iBright FL1000）：美國(guó)賽默飛世爾公司。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠：長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

2 方法

2.1 大鼠分組、給藥以及急性胃損傷模型的建立

選取 6周齡 Wistar大鼠（200 g～250 g）50只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組，鐵皮石斛水溶性總蛋白低劑量組、高劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，空白對(duì)照組與模型組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉；低劑量組、高劑量組分別給予10、20 mg/kg，陽(yáng)性對(duì)照組給予奧美拉唑3 mg/kg，連續(xù)5 d。末次給藥后禁食不禁水，除空白對(duì)照組外均采用300 mg/kg阿司匹林灌胃5 h建立胃黏膜損傷模型。

2.2 胃黏膜損傷評(píng)價(jià)

大鼠腹腔注射適量10%水合氯醛，麻醉后固定在解剖板上，沿腹中線(xiàn)由下而上剪開(kāi)腹腔，摘除胃，用生理鹽水清洗，沿胃大彎剪開(kāi)，用冰生理鹽水輕輕沖洗胃黏膜表面的污物，用濾紙吸干、除凈胃黏膜表面的黏液、血凝塊等，用4%多聚甲醛固定，拍照后用Image J軟件分析胃黏膜損傷程度[12]。

2.3 ELISA 檢測(cè)血清中 PGE2、IL-1β、IL-6、TNF-α、SOD、MDA的含量

大鼠腹腔注射適量10%水合氯醛，麻醉后固定在解剖板上，沿腹中線(xiàn)由下而上剪開(kāi)腹腔，腹主動(dòng)脈采血5 mL，4℃條件下3 000 r/min離心10 min，取上層血清。按照ELISA KIT說(shuō)明書(shū)中操作方法測(cè)定血清中PGE2、IL-1β、IL-6、TNF-α 含量[13]。

2.4 RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）

取適量胃組織，放入用放入用焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate，DEPC）處理并經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌過(guò)的水浸泡過(guò)夜的預(yù)冷研缽中，加入液氮小心研磨至無(wú)肉眼可見(jiàn)組織塊，加入1 mL Trizol提取RNA，測(cè)定濃度后，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA。將cDNA稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取2.5 μL，加入到含 SYBR Premix Ex Taq TMⅡ（2×）12.5 μL、雙蒸水8 μL、上下游引物各1μL的體系中。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性 30 s、95 ℃變性 5 s、退火 30 s、72 ℃延伸 20 s，40個(gè)循環(huán)[14]。反應(yīng)后繪制擴(kuò)增曲線(xiàn)，對(duì)目的基因擴(kuò)增后產(chǎn)物的表達(dá)量與β-Actin擴(kuò)增后表達(dá)量的比值進(jìn)行結(jié)果分析。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences

續(xù)表1 引物序列Continue table 1 Primer sequences

2.5 蛋白提取和Western blot

適量胃組織，放入預(yù)冷研缽中，加入液氮小心研磨至無(wú)肉眼可見(jiàn)組織塊，加入1 mL RIPA裂解液裂解液及10 μL PMSF，用移液器吹打數(shù)次后轉(zhuǎn)移至離心管中，冰上裂解20 min，4℃條件下12 000 r/min離心10 min，取上清，使用BCA試劑盒測(cè)定蛋白含量，制樣。配置聚丙烯酰氨凝膠電泳所需的凝膠，上樣，70 V 30 min，140 V 50 min電泳后使用NC膜18 V 350 mA半濕法轉(zhuǎn)膜20 min，5%磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）配置的 奶粉封閉30 min，磷酸鹽吐溫緩沖液（phosphate tween buffer，PBST）洗滌膜片3 次，每次5 min，切膜，4℃一抗孵育過(guò)夜（β-Actin、Erk1/2、pErk1/2均按1∶1 000稀釋?zhuān)籆OX-2按 1∶500稀釋?zhuān)?，收集一抗，?%PBS奶粉稀釋二抗，二抗孵育1 h，顯色處理，避光。結(jié)果用Image J軟件進(jìn)行灰度值分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 胃損傷程度

大鼠胃黏膜損傷情況見(jiàn)圖1。以胃黏膜損傷面積占整個(gè)胃黏膜面積的百分比來(lái)評(píng)價(jià)胃的損傷程度，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖1 大鼠胃黏膜損傷情況Fig.1 Rat gastric mucosal injury

表2 各組大鼠給藥劑量及胃損傷程度（±s，n=10）Table 2 The dose of rats and the degree of gastric damage in each group（±s，n=10）

表2 各組大鼠給藥劑量及胃損傷程度（±s，n=10）Table 2 The dose of rats and the degree of gastric damage in each group（±s，n=10）

注：與對(duì)照組相比##p<0.01表示差異極顯著；與模型組相比**p<0.01表示差異極顯著；-表示未給藥。

處理劑量/（mg/kg）胃損傷程度/%空白對(duì)照組 - 3.04±0.692模型組 - 56.34±2.71##鐵皮石斛水溶性總蛋白 10 38.88±0.59**20 15.87±0.84**奧美拉唑 3 26.39±1.02**

空白對(duì)照組胃損傷面積為（3.04±0.692）%，結(jié)果與模型組相比有極顯著差異（p<0.01）。模型組、低劑量組、高劑量組及奧美拉唑組經(jīng)阿司匹林灌胃5 h損傷后的損傷面積分別為（56.34±2.71）%、（8.88±0.59）%、（15.87±0.84）%以及（26.39±1.02）%。各給藥組與模型組相比均有極顯著性差異，且鐵皮石斛水溶性總蛋白高劑量組恢復(fù)效果最好。表明隨著鐵皮石斛水溶性總白濃度的增大胃損傷程度逐漸下降，鐵皮石斛對(duì)胃損傷具有一定的預(yù)防作用。

3.2 鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠血清中PGE2水平的影響

大鼠血清中PGE2水平如表3所示。

表3 大鼠血清中PGE2水平（±s，n=10）Table 3 PGE2 levels in rat serum（±s，n=10）

表3 大鼠血清中PGE2水平（±s，n=10）Table 3 PGE2 levels in rat serum（±s，n=10）

注：與對(duì)照組相比##p<0.01表示差異極顯著；與模型組相比**p<0.01表示差異極顯著。

組別PGE2/（ng/L）空白對(duì)照組 654.4±30.18模型組 331.46±10.74##低劑量組 424.8±49.8高劑量組 569.64±44.77**奧美拉唑組 480.02±21.89**

與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清中PGE2水平明顯下降（p<0.01），鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)保護(hù)使大鼠血清中PGE2水平逐漸回升，且高劑量組效果最好（p<0.01），表明鐵皮石斛水溶性總蛋白可以通過(guò)升高PGE2含量達(dá)到保護(hù)阿司匹林誘導(dǎo)的胃黏膜損傷的效果。

3.3 鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠血清中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α 水平的影響

大鼠血清中炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平如表4所示。

表4 大鼠血清中炎癥因子 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平（±s，n=10）Table 4 Levels of inflammatory factors IL-1β，IL-6 and TNF-α in rat serum（±s，n=10）

表4 大鼠血清中炎癥因子 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平（±s，n=10）Table 4 Levels of inflammatory factors IL-1β，IL-6 and TNF-α in rat serum（±s，n=10）

注：與對(duì)照組相比##p<0.01表示差異極顯著，#p<0.05表示差異顯著；與模型組相比*p<0.05表示差異顯著，**p<0.01表示差異極顯著。

組別IL-6/（ng/L）IL-1β/（ng/L）TNF-α/（ng/L）空白對(duì)照組 177.08±0.6 29.13±3.68 156.47±7.32模型組 343.98±12.14##57.35±4.01##341.49±36.07#鐵皮石斛水溶性總蛋白低劑量組229.90±30.86**43.07±2.01*209.12±4.51**鐵皮石斛水溶性總蛋白高劑量組128.45±8.17**34.10±3.07**169.39±14.24*奧美拉唑組 172.67±2.90**39.45±3.97*207.19±16.39

與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 的水平均有所升高（p<0.01；p<0.01；p<0.05），表明阿司匹林誘導(dǎo)大鼠胃黏膜產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。與模型組相比，鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)保護(hù)使大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平明顯降低，結(jié)果呈濃度依賴(lài)性，且高劑量組預(yù)保護(hù)后大鼠血清中IL-6水平高于對(duì)照組，表明鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)阿司匹林造成的炎癥損傷有較好的保護(hù)作用。

3.4 鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA水平的影響

大鼠血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA水平如表5所示。

表5 大鼠血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA水平（±s，n=10）Table 5 Oxidative stress indicators SOD，MDA levels in rat serum（±s，n=10）

表5 大鼠血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD、MDA水平（±s，n=10）Table 5 Oxidative stress indicators SOD，MDA levels in rat serum（±s，n=10）

注：與對(duì)照組相比##p<0.01表示差異極顯著，#p<0.05表示差異顯著；與模型組相比*p<0.05表示差異顯著，**p<0.01表示差異極顯著。

組別SOD/（ng/mL）MDA/（nmol/mL）空白對(duì)照組 7.55±1.34 20.12±2.77模型組 4.05±0.48#39.78±1.38##鐵皮石斛水溶性總蛋白低劑量組 4.61±1.88 19.49±0.83**鐵皮石斛水溶性總蛋白高劑量組 6.18±0.18**14.41±2.7**奧美拉唑組 6.12±0.8**17.71±3.58*

與對(duì)照組相比，模型組大鼠SOD含量有所下降（p<0.05）、MDA含量明顯升高（p<0.01），表明阿司匹林引起了胃黏膜的氧化損傷。與模型組相比，鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)保護(hù)使SOD含量逐漸上升、MDA含量明顯下降，且高劑量組效果最明顯，結(jié)果均具有極顯著差異，表明鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)阿司匹林誘導(dǎo)的胃黏膜氧化損傷有一定的保護(hù)作用。

3.5 鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠胃組織中COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA 表達(dá)的影響

大鼠胃組織中 COX-2、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)如圖2所示。

圖2 大鼠胃組織中COX-2、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)Fig.2 mRNA expression of COX-2，IL-1β，IL-6 and TNF-α in rat gastric tissue

與對(duì)照組相比，模型組大鼠胃組織COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表達(dá)明顯上調(diào)，且均具有極顯著差異（p＜0.01）；鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)處理后可使胃組織中 COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA 表達(dá)下調(diào)，且隨著藥物濃度升高作用效果更明顯。表明鐵皮石斛水溶性總蛋白能對(duì)阿司匹林誘導(dǎo)的大鼠胃黏膜損傷及炎癥反應(yīng)起到一定程度的保護(hù)作用。

3.6 鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠胃組織中COX-2蛋白表達(dá)的影響

COX-2蛋白表達(dá)如圖3所示。

圖3 大鼠胃組織COX-2蛋白表達(dá)Fig.3 COX-2 protein expression in rat stomach tissue

與對(duì)照組相比，模型組大鼠胃組織COX-2蛋白明顯上調(diào)（p＜0.01），鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)處理后，COX-2蛋白有明顯下調(diào)，且結(jié)果均具有極顯著差異（p＜0.01，p＜0.01），表明鐵皮石斛水溶性總蛋白通過(guò)下調(diào)COX-2蛋白表達(dá)量起到保護(hù)胃黏膜損傷的作用。

3.7 鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)大鼠胃組織中Erk1/2、pErk1/2蛋白表達(dá)的影響

Erk1/2、pErk1/2蛋白表達(dá)如圖4所示。

與對(duì)照組相比，模型組大鼠胃組織中Erk1/2/pErk1/2的比值明顯上調(diào)（p＜0.01），表明發(fā)生胃黏膜損傷時(shí)Erk1/2通路被激活，從而起到保護(hù)胃黏膜損傷的作用。經(jīng)鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)處理后，Erk1/2/pErk1/2有明顯下調(diào)，且結(jié)果均具有極顯著差異（p＜0.01），表明鐵皮石斛水溶性總蛋白通過(guò)激活Erk1/2通路起到保護(hù)胃黏膜損傷的作用。

4 討論

圖4 大鼠胃組織中Erk1/2、pErk1/2蛋白表達(dá)Fig.4 Erk1/2，pErk1/2 protein expression in rat gastric tissue

歷代中醫(yī)古籍中多有石斛“厚腸胃”相關(guān)功效的報(bào)道，作為臨床常用的“胃腸藥”，其“益胃”功效得到廣泛認(rèn)可。國(guó)內(nèi)早期研究報(bào)道，鐵皮石斛對(duì)胃黏膜損傷有較好的保護(hù)作用[15-17]，但目前多數(shù)研究集中于鐵皮石斛多糖對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用[18]，對(duì)鐵皮石斛水溶性總蛋白的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。本文通過(guò)阿司匹林誘導(dǎo)大鼠急性胃黏膜損傷模型，對(duì)鐵皮石斛水溶性總蛋白保護(hù)大鼠急性胃損傷及炎癥反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)行初步研究。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)胃黏膜具有由防御因子組成的“胃黏膜防御屏障”體系：黏液－碳酸氫鹽屏障、黏膜屏障、表皮生長(zhǎng)因子、前列腺素等，它們相互協(xié)調(diào)，共同對(duì)抗攻擊因子對(duì)胃黏膜的損傷。目前對(duì)NSAIDs造成的胃黏膜損傷機(jī)制尚未完全闡明，但其發(fā)生、發(fā)展必定是一個(gè)復(fù)雜的、多因素綜合的過(guò)程，與氧自由基、炎癥因子等攻擊因子增強(qiáng)以及前列腺素等保護(hù)因子的減弱外有關(guān)[19-22]。

PGE2是人體中的一種重要細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可增加胃黏液的分泌量及胃黏膜血流量，繼而增強(qiáng)胃黏膜抗損傷能力。COX-2是體內(nèi)重要的炎癥調(diào)節(jié)因子，參與介導(dǎo)前列腺素的產(chǎn)生，是PGE2合成的限速酶，在正常的多數(shù)體內(nèi)細(xì)胞中并不表達(dá)，或者僅僅是少量表達(dá)于胃壁相關(guān)細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞中，與IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子在胃損傷導(dǎo)致炎癥反應(yīng)中起協(xié)同作用。除炎癥反應(yīng)外，氧化應(yīng)激也是胃潰瘍發(fā)生的重要基質(zhì)，胃黏膜損傷時(shí)可能引起機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致血清中SOD含量減少，MDA含量增加，機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化之間的平衡被破壞，造成中性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn)，最終導(dǎo)致組織、細(xì)胞氧化損傷的病理過(guò)程[23]。Erk1/2作為MAPK中的一員，對(duì)調(diào)控應(yīng)激炎癥反應(yīng)具有重要作用，可被一系列細(xì)胞外的刺激信號(hào)激活并介導(dǎo)信號(hào)從細(xì)胞膜向細(xì)胞核傳導(dǎo)，參與胃黏膜上皮增殖、分化等過(guò)程的調(diào)節(jié)，諸多報(bào)道證實(shí)激活Erk1/2通路對(duì)大鼠胃損傷愈合過(guò)程具有重要意義[24-26]。Erk1/2通路的激活不僅可促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞的增殖，而且還可以與PGE2共同作用，增加胃黏膜血流量，促進(jìn)胃黏膜損傷的修復(fù)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)采用阿司匹林灌胃5 h的造模方法建立了大鼠急性胃黏膜損傷模型，通過(guò)ELISA、RT-PCR等方法對(duì)大鼠血清及胃組織中的炎癥因子進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)模型組炎癥因子水平有明顯上調(diào)，證明阿司匹林造成的胃黏膜損傷伴有嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，同時(shí)對(duì)SOD及MDA含量進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)模型組SOD含量減少，MDA含量增加，表明此時(shí)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)；經(jīng)鐵皮石斛水溶性總蛋白預(yù)處理后，上述反應(yīng)有明顯好轉(zhuǎn)，炎癥因子水平隨著給藥劑量明顯下調(diào)，SOD含量有所上調(diào)，MDA含量有所下調(diào)，表明機(jī)體炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)有明顯減少，證實(shí)了鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)胃黏膜的預(yù)保護(hù)作用。為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，采用WB法對(duì)COX-2以及Erk1/2、pErk1/2 3個(gè)因子的水平進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)模型組有明顯上調(diào)，給藥組隨著劑量逐漸下調(diào)，表明COX-2/Erk1/2通路被激活，可能通過(guò)促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞增殖等作用達(dá)到保護(hù)胃黏膜的作用。綜上所述，鐵皮石斛水溶性總蛋白對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)機(jī)制可能與增強(qiáng)PGE2等胃黏膜保護(hù)因子，增加胃黏膜血流量，清除氧自由基，降低炎癥反應(yīng)介質(zhì)的含量以及激活Erk1/2通路使胃黏膜細(xì)胞增殖有關(guān)，但更深入的機(jī)制研究還需要進(jìn)一步探討。